腺相关病毒突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种具有静息或激活T细胞靶向性的腺相关病毒突变体及其应用。本发明专利技术靶向静息或激活T细胞的效率高，具有剂量低、感染力强、安全性好的优点。本发明专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体无需整合基因组，构建得到的重组腺相关病毒感染激活的T细胞可实现快速感染和回输，减少不必要的质检和体外停留时间；感染刺激因子刺激后的T细胞也具有非常优异的表现。使用本发明专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体感染静息或激活T细胞具有巨大的临床价值和商业应用场景。有巨大的临床价值和商业应用场景。有巨大的临床价值和商业应用场景。

【技术实现步骤摘要】
腺相关病毒突变体及其应用
[0001]本专利技术专利申请是基于2022年12月08日提交的专利技术名称为“腺相关病毒突变体及其应用”的中国专利申请号2022115761103的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种腺相关病毒突变体及其应用。

技术介绍

[0003]腺相关病毒(AAV)是长约4.7kb单链DNA片段组成的非致病缺陷病毒。AAV基因组包含于非包膜病毒衣壳中，可分成三个功能区域：两个开放阅读框和末端反向重复序列。重组腺相关病毒载体(rAAV)源于非致病的野生型腺相关病毒，作为一种重要的基因载体，由于其具有宿主范围广、非致病性、低免疫原性、长期稳定表达外源基因、良好的扩散性能和物理性质稳定等优点，被广泛应用于基因功能研究和基因治疗领域。不同的血清型对组织和细胞有着不同的特异亲嗜性，转染效率有所差别。
[0004]肿瘤免疫疗法是利用免疫系统自身的特异能力来识别并杀死肿瘤细胞，是当前肿瘤治疗领域应用前景的治疗方法之一。随着近几年对肿瘤免疫疗法的深入研究，多种类型的疗法在难治复发肿瘤中出现很好的疗效，如抗体偶联药物、双靶向抗体、CAR
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T疗法和TCR
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T疗法等。在破坏全身患病细胞中，T细胞具有重要作用。免疫检查点抑制剂和肿瘤浸润淋巴细胞的相关研究表明了T细胞治疗癌症的潜力。但T细胞需要适当的肿瘤特异性，有足够的数量，并且克服任何局部免疫抑制因素，才能有效。因此，研发一种对T细胞具有高效靶向性，且不会影响T细胞的活性的病毒体具有巨大的临床价值和商业意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有静息或激活T细胞靶向性的腺相关病毒突变体及其应用，该腺相关病毒突变体对静息或激活T细胞更好的感染能力，具有剂量低、感染力强、安全性好的优点。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0007]第一方面，本专利技术筛选了一种具有T细胞靶向性的异源肽，所述异源肽的氨基酸序列为如SEQ ID No.1
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5中任一所示的序列。
[0008]本专利技术筛选包含所述异源肽的AAV衣壳蛋白突变体所构建得到的重组腺相关病毒载体靶向静息或激活T细胞的效率高，具有剂量低、感染力强、安全性好的优点。作为本专利技术所述的异源肽的优选实施方式，所述异源肽的核苷酸序列为如SEQ ID No.6
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10中任一所示的序列。
[0009]第二方面，本专利技术提供了一种具有T细胞靶向性的AAV衣壳蛋白突变体，包括所述的异源肽。
[0010]本专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体无需整合基因组，所构建得到的重组腺相关病毒感染激活的T细胞可实现快速感染和回输，减少不必要的质检和体外停留时间；本发
明所筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体构建得到的重组腺相关病毒载体感染刺激因子刺激后的T细胞，也具有非常优异的表现。使用本专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体感染静息或激活T细胞具有巨大的临床价值和商业应用场景。
[0011]作为本专利技术所述的AAV衣壳蛋白突变体的优选实施方式，由所述异源肽插入或置换AAV衣壳蛋白的5
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20个氨基酸而得。
[0012]作为本专利技术所述的AAV衣壳蛋白突变体的优选实施方式，所述异源肽的插入位点位于AAV衣壳蛋白氨基酸588和589之间。
[0013]作为本专利技术所述的AAV衣壳蛋白突变体的优选实施方式，其氨基酸序列为如SEQ ID No.11
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SEQ ID No.15中任一所示的序列。
[0014]作为本专利技术所述的AAV衣壳蛋白突变体的优选实施方式，其核苷酸序列为如SEQ ID No.16
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SEQ ID No.20中任一所示的序列。
[0015]第三方面，本专利技术提供一种具有T细胞靶向性的重组腺相关病毒，包括所述的AAV衣壳蛋白突变体。
[0016]本专利技术的重组腺相关病毒载体
[0017]对静息或激活T细胞更好的感染能力，且具有剂量低、感染力强、安全性好的优点。尤其是未激活的T细胞感染可以实现当天收集细胞当天感染，当天回输的优点，极大降低了制备成本，可减少对T细胞活性的影响。
[0018]作为本专利技术所述的重组腺相关病毒的优选实施方式，还包括异源目的基因。
[0019]作为本专利技术所述的重组腺相关病毒的优选实施方式，所述异源目的基因编码干扰RNA、适配体、内切核酸酶、指导RNA中任一种基因产物。
[0020]第四方面，本专利技术将所述的异源肽、所述的AAV衣壳蛋白突变体、所述的重组腺相关病毒在制备用于将基因产物递送至受试者细胞的药物中应用。
[0021]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述细胞为免疫细胞。
[0022]第五方面，本专利技术将所述的异源肽、所述的AAV衣壳蛋白突变体、
[0023]所述的重组腺相关病毒在感染静息或激活T细胞中应用。
[0024]第六方面，本专利技术将所述的异源肽、所述的AAV衣壳蛋白突变体、所述的重组腺相关病毒在制备肿瘤免疫治疗药物中应用。
[0025]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述免疫治疗包括CAR
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T疗法或TCR
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T疗法。
[0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0027]本专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体构建得到的重组腺相关病毒载体靶向T细胞的效率高，具有剂量低、感染力强、安全性好的优点。本专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体无需整合基因组，所构建得到的重组腺相关病毒感染激活的T细胞可实现快速感染和回输，减少不必要的质检和体外停留时间；本专利技术所筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体构建得到的重组腺相关病毒载体感染刺激因子刺激后的T细胞，也具有非常优异的表现。使用本专利技术筛选所得的AAV衣壳蛋白突变体感染静息或激活T细胞具有巨大的临床价值和商业应用场景。
附图说明
[0028]图1为荧光显微镜检测不同rAAV病毒体感染静息T细胞的eGFP荧光强度(72h)；A为rAAV6病毒，B
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F为AAV6衣壳蛋白突变体病毒1
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5。
[0029]图2为荧光显微镜检测不同rAAV病毒体感染静息T细胞的eGFP荧光强度(96h)；A为rAAV6病毒，B
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F为AAV6衣壳蛋白突变体病毒1
‑
5。
[0030]图3为RT
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qPCR检测AAV6衣壳蛋白突变体病毒1
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5感染静息T细胞72h后eGFP mRNA的相对强度。
[0031]图4为流式细胞仪检测不同rAAV病毒体感染静息T细胞96h后表达eGFP荧光细胞百分比及强度；A为空白对照，B和C为对照rAAV6病毒，D
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H为AAV6衣壳蛋白突变体病毒1
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5，H为各组eGFP阳性细胞比例统计柱状图。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有T细胞靶向性的AAV衣壳蛋白突变体，其特征在于，包括异源肽；所述异源肽的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述异源肽的插入位点位于AAV衣壳蛋白氨基酸588和589之间。2.根据权利要求1所述的AAV衣壳蛋白突变体，其特征在于，所述AAV衣壳蛋白突变体氨基酸序列如SEQ ID No.12所示。3.一种编码具有T细胞靶向性的AAV衣壳蛋白突变体的核酸，其特征在于，包括异源肽；所述异源肽的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.17所示。5.一种具有T细胞靶向性的重组腺相关病毒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的A...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊颖，李华鹏，卜晔，钟育健，代志勇，檀克勤，张有为，
申请(专利权)人：广州派真生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：