一种活性牡丹肽及其作为抗氧化抗疲劳的制剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及牡丹肽技术领域，具体涉及一种活性牡丹肽及其作为抗氧化抗疲劳的制剂的应用。该牡丹肽，选自如SEQ ID NO.3所述的肽。该牡丹肽3能够阻止H2O2诱导线粒体产生ROS，减缓H2O2诱导的糖原和ATP下降，改善细胞线粒体膜电位和分支长度受到的损伤，从而提示本发明专利技术提供的肽3具有明显抵抗疲劳作用，具有应用于抗疲劳领域的应用前景。疲劳领域的应用前景。疲劳领域的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种活性牡丹肽及其作为抗氧化抗疲劳的制剂的应用


[0001]本专利技术涉及牡丹肽
，具体涉及一种活性牡丹肽及其作为抗氧化抗疲劳的制剂的应用。

技术介绍

[0002]牡丹芍药科芍药属植物，素有“百花之王”的美称。作为国花，牡丹已在中国栽培了1500多年，具有极其重要的观赏价值。随着牡丹栽培面积的扩大，不仅在菏泽、洛阳、亳州等地区种植，如今已广泛遍布于中国各地。牡丹除观赏、食用价值外，还具有活血化瘀和清热凉血等药用功效，于中国古代发现医学记载数十处。油用牡丹作为新兴的木本油料作物之一在我国被大力的推广和种植，截止2019年全国种植面积达230多万亩。其中，凤丹(Paeoniaostii“FengDan”)是油用牡丹品种中种植面积最广且油脂品质最好的品种。
[0003]牡丹籽多肽是牡丹籽蛋白酶解后的产物。研究表明，牡丹籽多肽具有抗氧化、降血压和降血糖等生物活性，在功能性产品开发及食品营养添加剂中具有重要的应用价值。牡丹籽多肽物能够作为牡丹籽蛋白的替代品，拥有更好的功能特性。然而，现有技术仅仅对牡丹籽多肽进行开发，对该材料的资源开放不够全面。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，通过对牡丹的一个品种，凤丹叶进行充分开发，提供了一种一种抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽及其制备方法。
[0005]本专利技术的目的是提供一种抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽，选自如SEQ ID NO.1～3任一所述的肽。
[0006]本专利技术的目的是还提供抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽胶囊，其包含如SEQ ID NO.1～3任一所述的肽。
[0007]本专利技术的目的是还所述的牡丹肽的制备方法，包括：
[0008]制备凤丹叶提取粗品；
[0009]根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品；
[0010]将所述牡丹蛋白品分别进行胃蛋白酶解、胰蛋白酶酶解和蜗牛酶酶解的步骤，得到酶解液，从所述酶解液中分离得到所述牡丹肽。
[0011]进一步地，“根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品”的步骤包括：
[0012]将所述凤丹叶粗品用PVPP和二氧化碳的混合物于液氮预冷的研钵中研磨成粉末；
[0013]将所述粉末加入BPP提取缓冲液中震荡提取，进行第一离心；
[0014]取所述第一离心的上清液与BPP提取缓冲液混合震荡提取，进行第二离心；
[0015]取所述第二离心的上清液与预冷的15％的聚丙烯酰胺水溶液混合，
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20℃冰箱中沉淀12h以上，进行第三离心；
[0016]取所述第三离心的沉淀物加入植物蛋白提取裂解液，放置于22℃恒温裂解2h以上，冷冻干燥，即可得到所述牡丹蛋白品。
[0017]进一步地，“胃蛋白酶酶解”的步骤包括：
[0018]将所述牡丹蛋白品混入至10倍重量的去离子水中，匀浆，调节pH至2.0，加入所述牡丹蛋白品重量1％的胃蛋白酶，于37℃酶解2h；迅速放入100℃水浴10min，使酶失活。所得酶解液4000rpm离心10min，取上清液。
[0019]进一步地，“胰蛋白酶酶解”的步骤包括：
[0020]将权利要求5所得的上清液用0.05M的氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入牡丹蛋白品重量1％的胰蛋白酶，于40℃酶解4h后，迅速放入100℃水浴10min，使酶失活。所得酶解液4000rpm离心10min，取上清液，滤纸滤过，微滤，滤液浓缩后，冷冻干燥。
[0021]进一步地，“蜗牛酶酶解”的步骤包括：
[0022]将权利要求6所得的冻干品混入至10倍质量的去离子水中，1000rpm匀浆1min后，用0.05M的盐酸溶液调节pH至6.2，加入牡丹蛋白品质量2.6％的蜗牛酶，于49℃酶解28h，迅速放入100℃水浴10min，使酶失活；所得酶解液8000rpm离心20min，上清液经0.45μm滤膜微滤后，收集滤液，依次过5kD、3kD和1kD的超滤膜，收集5kD～3kD、3kD～1kD和1kD的3个部分的滤液，适当浓缩，冷冻干燥，即得不同分子量段的牡丹肽。
[0023]进一步地，包括：
[0024]分别用pH为7.0的Tris
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HCl缓冲液配制权利要求2所述的牡丹肽溶液；
[0025]分别取所述牡丹肽溶液溶液100mL，与40mg/mL的海藻酸钠溶液混合，40℃、120rpm震荡水浴20min后，用5mL注射器吸取5mL混合溶液，滴入100mL、3.5mg/mL的氯化钙溶液中，恒温固化30min，固化结束后抽滤，沉淀置于45℃烘箱烘干，即为牡丹肽胶囊。
[0026]本专利技术的目的是还所述的牡丹肽在制备抗氧化抗疲劳的固体饮料及制剂中的应用。
[0027]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果之一：
[0028]本专利技术以凤丹油用牡丹苗叶为原材料，通过预处理和提取步骤，得到其中的初蛋白，再经进一步提取得到其蛋白品，最后经过酶解得到牡丹肽的固体粉末。并且分析得到这些牡丹肽的氨基酸序列。
[0029]另外，本专利技术还对这些牡丹肽的固体粉末的溶解性、乳化活性和乳液稳定性进行了研究发现，本专利技术提供的肽1～3具有更高的溶解性，更好的乳化活性和乳液稳定性。
[0030]另外，本专利技术还对这些牡丹肽细胞生物活性进行研究，发现含肽1～5的供试品溶液对C2C12细胞无细胞毒性；肽1～3能够恢复小鼠成肌细胞的体外抗氧化损伤，表明其具有抗氧化性能。肽1～3能够明显阻止H2O2诱导的C2C12细胞糖原和ATP含量下降，并且呈现明显的剂量效应。本专利技术提供的肽1～3能够提高肌肉的能量代谢，增强机体运动能力。由此表明，本专利技术提供的肽1～3能够阻止H2O2诱导线粒体产生ROS，减缓H2O2诱导的糖原和ATP下降，改善细胞线粒体膜电位和分支长度受到的损伤，从而提示本专利技术提供的肽1～3具有明显抵抗疲劳作用，具有应用于抗疲劳领域的应用前景。
[0031]另外，本专利技术还将这些牡丹肽的固体粉末制备成牡丹肽胶囊，测试了其在人工胃液和人工肠液中的释放效果。结果发现，肽1～3在牡丹肽胶囊中的释放较为持续，能够持续起到释放作用，这对于将牡丹肽胶囊作为一种抗氧化抗疲劳的制剂在体内持续起到生物活性具有极大的动力学作用。
附图说明
[0032]图1为肽1～5的溶解性结果图。
[0033]图2为不同浓度肽1～5的EA1结果图。
[0034]图3为不同浓度肽1～5的ESI结果图。
[0035]图4为不同浓度肽1～5以及模型组对C2C12细胞活力结果图。
[0036]图5为不同浓度肽1～5以及模型组对H2O2诱导的C2C12细胞活力结果图。
[0037]图6为不同浓度肽1～5以及模型组对H2O2诱导的C2C12细胞内ROS水平结果图。
[0038]图7为不同浓度肽1～5以及模型组对H2O2诱导的C2C12细胞内糖原含量结果图。
[0039]图8为不同浓度肽1～5以及模型组对H2O2诱导的C2C12细胞内ATP含量结果图。
[0040]图9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽，选自如SEQ ID NO.3所述的肽。2.根据要求1所述的牡丹肽，其特征在于，所述牡丹肽来源于凤丹油用牡丹苗(Paeoniaostii“FengDan”)叶。3.抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽胶囊，其包含如SEQ ID NO.1～3任一所述的至少两种肽。4.权利要求1所述的牡丹肽的制备方法，其特征在于，包括：制备凤丹叶提取粗品；根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品；将所述牡丹蛋白品分别进行胃蛋白酶解、胰蛋白酶酶解和蜗牛酶酶解的步骤，得到酶解液，从所述酶解液中分离得到所述牡丹肽。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，“根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品”的步骤包括：将所述凤丹叶粗品用PVPP和二氧化碳的混合物于液氮预冷的研钵中研磨成粉末；将所述粉末加入BPP提取缓冲液中震荡提取，进行第一离心；取所述第一离心的上清液与BPP提取缓冲液混合震荡提取，进行第二离心；取所述第二离心的上清液与预冷的15％的聚丙烯酰胺水溶液混合，
‑
20℃冰箱中沉淀12h以上，进行第三离心；取所述第三离心的沉淀物加入植物蛋白提取裂解液，放置于22℃恒温裂解2h以上，冷冻干燥，即可得到所述牡丹蛋白品。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，“胃蛋白酶酶解”的步骤包括：将所述牡丹蛋白品混入至10倍重量的去离子水中，匀浆，调节pH至2.0，加入所述牡丹蛋白品重量1％的胃蛋白酶，于37℃酶解2h；迅速放入100℃水浴10min，使酶失活。所得酶解液4000rpm离心10min，取上清液。7.根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：山东牡丹爱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：