新型冠状病毒疫苗中S蛋白含量的检测方法技术

本公开涉及新型冠状病毒疫苗中S蛋白含量的检测方法。本公开提供了一种用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的多肽，所述多肽包括如ASANLAATK(SEQ ID NO.:1)或ASANLAAIK(SEQ ID NO.:2)所示的氨基酸序列。本公开还提供了包括所述多肽的试剂盒，和用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的方法。毒S蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒疫苗中S蛋白含量的检测方法


[0001]本公开涉及新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)灭活疫苗的检测
具体涉及用于 SARS
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CoV
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2灭活疫苗的S蛋白含量检测的特征多肽，检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎(COVID
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19)是以严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS
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CoV
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2) 为病原体的疾病，可以引起人体急性呼吸道传染病。为了应对COVID
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19的传播，疫苗是一种有效方式，成为了全球药物研发的关注焦点。
[0003]灭活疫苗是针对传染性疾病的最有效的疫苗研发途径。目前，SARS
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CoV
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2病毒由原型株逐渐进化出多个主要变异株，包括Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron等。针对这些变异株的流行，正在研制和生产新一代的变异株疫苗，以及针对原型株和变异株的二价或多价疫苗。而对于灭活疫苗中不同毒株的有效抗原(免疫原)的含量，例如对SARS
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CoV
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2中的S蛋白和N蛋白的含量检测，对于疫苗评价有着十分重要的意义。
[0004]通常使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对疫苗的抗原含量进行定量，作为疫苗的关键评价指标之一。但由于原型株与变异株的病毒抗原表位差异不大，在评价包含原型株与变异株的二价或多价苗的抗原含量时，采用ELISA抗原检测系统无法分别准确定量原型株与变异株。因此，亟需建立一种能够对二价或多价疫苗或其中间品中的不同抗原分别进行准确定量的方法。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本公开提供了新型冠状病毒原型株和 Gamma株的特征肽段。本公开利用新型冠状病毒的S蛋白酶切后特征肽段序列，采用合成肽标准物质(PS)和稳定同位素标记肽内标(SIPS)完成定量分析，具备高通量的定量分析能力。通过加入SIPS，可以大大降低离子抑制、基质效应和样品前处理过程的误差造成的影响，得到更准确的定量结果。基于特征肽段，可以准确测定新型冠状病毒原型株和/或Gamma株的S蛋白的量。
[0006]根据本公开的一个方面，提供了一种用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的多肽。根据本公开的实施方式，所述多肽包括如ASANLAATK(SEQ ID NO.:1)所示的氨基酸序列。根据本公开的实施方式，所述多肽包括如ASANLAAIK(SEQ ID NO.:2)所示的氨基酸序列。
[0007]根据本公开的实施方式，所述多肽是未经标记的。
[0008]根据本公开的实施方式，所述多肽带有可检测的标记物。可检测的标记物是指，可以通过质谱、荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记物是本领域公知的，包括但不限于，同位素(例如，稳定同位素，如2H、
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C、
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N、
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O、
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O)、酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β
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半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶等)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明 (TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、 Alexa 750)、吖啶酯类
化合物、磁珠(例如，)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶等)，以及用于结合上述标记物修饰的亲和素 (例如，链霉亲和素)的生物素。
[0009]根据本公开的实施方式，所述多肽带有同位素标记。根据本公开的实施方式，所述多肽中的一个或多个氨基酸带有同位素标记物。所述同位素标记物优选选自2H、
13
C、
15
N、
17
O、
18
O及其任意组合。
[0010]根据本公开的实施方式，所述多肽的赖氨酸中的一个或多个原子被对应的同位素替换。根据具体的实施方式，包括氨基酸序列如ASANLAATK(SEQ ID NO.:1)所示的多肽的第9 位赖氨酸(K)带有同位素标记。根据具体的实施方式，包括氨基酸序列如ASANLAAIK (SEQ ID NO.:2)所示的多肽的第9位赖氨酸(K)带有同位素标记。例如赖氨酸上的C原子被替换成
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C，N原子被替换成
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N，H原子被替换成2H，O原子被替换成
17
O或
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O。
[0011]根据另一方面，提供了一种用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的试剂盒。
[0012]根据本公开的实施方式，所述试剂盒包括第一多肽，其包括如ASANLAATK(SEQ IDNO.:1)所示的氨基酸序列。根据一些实施方式，所述第一多肽可带有可检测的标记物。
[0013]根据本公开的实施方式，所述试剂盒包括第二多肽，其包括如ASANLAAIK(SEQ IDNO.:2)所示的氨基酸序列。根据一些实施方式，所述第二多肽可带有可检测的标记物。
[0014]根据本公开的实施方式，所述试剂盒包括：第一多肽，其包括如ASANLAATK(SEQ IDNO.:1)所示的氨基酸序列；和，第二多肽，其包括如ASANLAAIK(SEQ ID NO.:2)所示的氨基酸序列。根据一些实施方式，所述第一多肽可以带有可检测的标记物。根据一些实施方式，所述第二多肽可带有可检测的标记物。
[0015]根据本公开的实施方式，所述第一多肽和/或所述第二多肽中的一个或多个氨基酸带有同位素标记物。根据具体的实施方式，所述同位素标记物可以选自2H、
13
C、
15
N、
17
O、
18
O及其任意组合。
[0016]根据本公开的实施方式，所述第一多肽和/或所述第二多肽的赖氨酸中的一个或多个原子被对应的同位素替换。
[0017]根据本公开的实施方式，所述第一多肽用于测定新型冠状病毒原型株S蛋白的量。根据本公开的实施方式，所述新型冠状病毒原型株也被称为SARS
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CoV
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2或者2019
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nCoV。
[0018]根据本公开的实施方式，所述第二多肽用于测定新型冠状病毒Gamma株S蛋白的量。所述新型冠状病毒Gamma株是发现的病毒变种，编号为P.1，命名为新型冠状病毒Gamma株。
[0019]根据本公开的实施方式，所述试剂盒还包括变性剂、还原剂、烷基化试剂和蛋白酶中的一种或多种。
[0020]根据具体的实施方式，所述变性剂可以选自尿素、十二烷基磺酸钠、辛烷磺酸钠或 RapiGestSF溶液。
[0021]根据具体的实施方式，所述还原剂可以选自二硫苏糖醇、巯基乙醇或三(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的多肽，其特征在于，所述多肽包括如ASANLAATK(SEQ ID NO.:1)或ASANLAAIK(SEQ ID NO.:2)所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽是未经标记的或带有可检测的标记物，优选地，所述多肽中的一个或多个氨基酸带有同位素标记物，所述同位素标记物优选选自2H、
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C、
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N、
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O、
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O及其任意组合，优选地，所述多肽的赖氨酸中的一个或多个原子被对应的同位素替换。3.一种用于定量检测新型冠状病毒S蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：第一多肽，其包括如ASANLAATK(SEQ ID NO.:1)所示的氨基酸序列，和/或第二多肽，其包括如ASANLAAIK(SEQ ID NO.:2)所示的氨基酸序列；优选地，所述第一多肽和/或所述第二多肽中的一个或多个氨基酸带有可检测的标记物，所述可检测的标记物优选为同位素标记物，更优选选自2H、
13
C、
15
N、
17
O、
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O及其任意组合，优选地，所述第一多肽和/或所述第二多肽的赖氨酸中的一个或多个原子被对应的同位素替换。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一多肽用于测定新型冠状病毒2019
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nCoV株S蛋白的量，和/或所述第二多肽用于测定新型冠状病毒Gamma株S蛋白的量。5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括变性剂、还原剂、烷基化试剂和蛋白酶中的一种或多种，优选地，所述变性剂选自尿素、十二烷基磺酸钠、辛烷磺酸钠或RapiGestSF溶液；优选地，还原剂选自二硫苏糖醇、巯基乙醇或三(2

【专利技术属性】
技术研发人员：孙煌，胡雅灵，王琳，戈小琴，
申请(专利权)人：北京科兴中维生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：