诊断急性川崎病的血液生物标志物和方法技术

本发明专利技术涉及一种在临床环境中用于诊断川崎病(KD)的血液生物标志物组合和表征方法。特别地，本发明专利技术请求保护利用生物标志物的组合和它们的体液浓度来得出KD得分，以协助诊断、风险评估以及KD的治疗/监测。更具体地说，这些用于表征生物标志物的试剂将被打包在一种试剂盒中，与测试系统（例如Luminex xMAP）一起使用，该测试系统测量生物标志物浓度以生成KD得分，可以用于区分KD和其他发热的儿科诊断。可以用于区分KD和其他发热的儿科诊断。可以用于区分KD和其他发热的儿科诊断。

【技术实现步骤摘要】
诊断急性川崎病的血液生物标志物和方法


[0001]本专利技术涉及一种在临床环境中用于诊断川崎病（KD）的生物标志物组合和表征方法。具体而言，本专利技术请求保护利用生物标志物的组合及其浓度来推导一个KD得分，以帮助诊断、风险评估以及KD的治疗/监测。更具体地，这些表征生物标志物的试剂将与测定系统（如Luminex xMAP）一起打包在一个试剂盒中，该系统测量生物标志物的浓度，生成可以用于区分KD和其他幼儿发热症状的KD得分。

技术介绍

[0002]川崎病（KD）是一种罕见的儿童急性炎症性疾病，与血管炎和持续发热相关。 KD是美国儿童获得性心脏病的主要原因，KD在发展中国家有明显增加的趋势。如果未能及早治疗，严重的并发症可能会发生，约25％的儿童会患冠状动脉损伤。KD死亡率很低，然而，由于受损动脉的血管重构，可以稍后发展狭窄病变。长期的结果研究表明，50％的患有KD初始冠状动脉瘤的儿童需要重新血管化手术或处于心肌梗死的高危风险之中。
[0003]KD的病因目前尚不清楚。然而，广泛认为它是特定遗传易感个体对感染因子异常持续的免疫反应。不幸的是，到目前为止尚未确定一致的感染因子，进一步增加了诊断难度。此外，还观察到不同的KD种族分布。 KD在白种人中显著较低，发病率为9
‑
17 / 100,000；KD在东亚的发病率最高，在5岁以下儿童中日本的发病率为265 / 100,000，其他亚洲国家的平均发病率为51
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194 / 100,000。
[0004]目前，KD 的诊断主要基于临床症状，没有可用的客观分子测试辅助该过程。由于 KD 与儿童常见的自限性发热疾病（如发热、皮疹、粘膜皮肤表现、淋巴结肿大和炎症）共享许多症状和特征，因此临床诊断很困难。大约有 15
‑
36.2％ 的 KD 病例被认为是不完全的 KD，不显示完全的临床特征，即根据美国心脏协会的标准，KD 临床表现超过四个 KD 临床症状，这显著地导致延迟诊断。KD 的延迟诊断会增加永久性心脏损伤和冠状动脉瘤的风险。对于表现出“不完全
”ꢀ
KD 的患者，并且不符合完整的临床诊断标准，诊断时间至关重要。发热开始十天内进行早期诊断和静脉免疫球蛋白（IVIG）治疗，可极大地减少冠状动脉疾病的发生率。
[0005]及时认识、诊断和治疗对许多临床医生来说常常是具有挑战性的。对于不熟悉或困惑于复杂临床算法的医生，按照已发布的指南根据持续发热和临床标准诊断 KD，KD 临床诊断通常会延迟。因此，迫切需要一种基于客观血液生物标志物的测试，以帮助医生识别不符合所有临床标准但需要治疗以防止心血管损害的 KD 患者。
[0006]我们研究了17种生物标志物，包括心肌功能或应激(NT
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proBNP、BNP、CK
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MB、Endocan
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1、PlGF、心肌肌钙蛋白1)，心脏缺血和斑块不稳定/破裂(FABP3和LIGHT(TNFSF14))，炎症(CXCL6、CXCL16、ST2(IL1RL1)、FABP4和Oncostatin M)、细胞生长和迁移(MMP
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8、MMP
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9、HGF和VEGFA)，这些生物标志物与KD的发展和诊断有关(图1)。我们使用Luminex的多重免疫测定平台测定了血浆样品中这些分子的浓度。然后基于能够区分KD和其他发热患者的关键生物标志物的血清浓度开发了一个KD诊断模型。

技术实现思路

[0007]本专利技术公开了利用血/血浆/血清蛋白生物标志物对 KD 进行诊断、风险评估和治疗监测的方法。特别地，专利技术人已经发现并启用了一组蛋白质生物标志物血液浓度来计算 KD 风险得分，可用于 KD 的诊断、风险评估和治疗监测，并区分 KD 和其他发热性疾病。这些生物标志物可以使用适当的检测系统（例如 Luminex 平台系统）的试剂盒来确定，以确定生物标志物的浓度，以推导可用于单独或与其他 KD 临床标准结合使用的 KD 得分，以确认 KD 的诊断。
[0008]蛋白质生物标志物的浓度，例如但不限于 NT
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proBNP、BNP、CK
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MB、Endocan
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1、PlGF、Cardiac Troponin 1、FABP3、LIGHT（TNFSF14）、CXCL6、CXCL16、ST2（IL1RL1）、FABP4 和 Oncostatin M、VEGFA、HGF、MMP
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8 和 MMP
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9，在血/血浆/血清中以组合形式出现，已被发现可以利用多重免疫测定系统（例如 Luminex）将 KD 患者与其他发热性患者区分开来，以准确测量血液生物标志物浓度以推导 KD 得分。这些生物标志物包括但不限于 NT
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proBNP、BNP、CK
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MB、Endocan
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1、PlGF、Cardiac Troponin 1、FABP3、LIGHT（TNFSF14）、CXCL6、CXCL16、ST2（IL1RL1）、FABP4 和 Oncostatin M、VEGFA、HGF、MMP
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8 和 MMP
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9，这些生物标志物已被发现与 KD 的发展和诊断有关（见图1）。
[0009]本专利技术公开了一种使用生物标志物的方法，其中包括生物标志物的完整蛋白质或其肽序列，包括但不限于NTproBNP、FABP4、MMP
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8、CXCL16、HGF、LIGHT、OSM和ST2。
[0010]在某些实施例中，使用这些生物标志物的组合来诊断KD。用于KD诊断的生物标志物组合可以包括至少2个生物标志物，最多包括上述8个生物标志物的全部组合。这将包括至少包含2、3、4、5、6、7和8个上述生物标志物的任何组合。较小的生物标志物组合足以区分KD和其他发热疾病，并且更经济实惠。然而，更大的组合可能会提供更详细的信息，并且可以用于不同区域人群的实践中。
[0011]在二进制得分系统中，基于计算KD得分的方法来区分患者和其他发热疾病。低的KD得分表明患者不太可能患有KD。高的KD得分表明患者很可能患有KD（确诊）。
[0012]本专利技术基于上述生物标志物和方法描述，计算一个KD得分，并确定患有KD的三个不同风险范围，以确定患有KD的风险。低于低得分截止值的低KD风险表明患者患KD的风险低。高于高得分截止值的高KD风险表明患者患KD的风险高。低和高KD得分截止值之间的得分表示中间的KD风险。
[0013]在某些情况下，临床参数与本文所述的生物标志物组合用于诊断KD。例如，本专利技术包括一种方法，用于确定患有5天连续发热的患者的KD得分。该方法包括按照患者的标准护理测量至少七项临床参数，包括发热持续时间、血红蛋白浓度、血液中C
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反应蛋白浓度、白细胞计数、百分比嗜酸性粒细胞、百分比单核细胞和百分比未成熟中性粒细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于测量选自以下生物标志物组的一种或多种川崎病生物标志物的量的检测试剂在制备用于确定受试者川崎病生物标志物水平呈现的试剂盒中的用途，其特征在于，所述确定受试者川崎病生物标志物水平呈现的方法包括：a. 评估来自受试者的样品中的一组川崎病生物标志物浓度，所述样品为血液、血清或血浆，以确定样品中每个川崎病生物标志物的水平；b. 基于组中每个川崎病生物标志物的水平获得川崎病生物标志物的水平表示；c. 其中，所述川崎病生物标志物组包括NT
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proBNP、BNP、CK
‑
MB、Endocan
‑
1、PlGF、心肌肌钙蛋白1、FABP3、LIGHT、CXCL6、CXCL16、ST2、FABP4、Oncostatin M、VEGFA、HGF、MMP
‑
8和MMP
‑
9中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，测量每个川崎病生物标志物的完整蛋白质或其肽序列、DNA、RNA水平。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP和FABP4。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4和MMP
‑
8。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8和CXCL16。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16和HGF。7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF和LIGHT。8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF、LIGHT和OSM。9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF、LIGHT、OSM和ST2。10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，进一步包括提供川崎病生物标志物水平呈现的报告。11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述川崎病生物标志物水平呈现导出川崎病得分，其中所述川崎病得分：a. 通过几何平均值、多元线性判别分析或分布式梯度提升决策树机器学习，从所测量的血液生物标志物的值导出；或b. 是每个生物标志物水平的乘积，归一化以适应0
‑
10的等级，通过以下公式导出：[生物标志物1]
×
[生物标志物2]
×
[生物标志物3]
×……×
[生物标志物n]/[标准化因子]
×ꢀ
10 =川崎病得分。12.用于测量选自以下生物标志物组的一种或多种川崎病生物标志物的量的检测试剂在制备用于对受试者提供川崎病诊断的试剂盒中的用途，其特征在于，所述用于对受试者提供川崎病诊断的方法包括获得来自受试者的样品的川崎病生物标志物的水平表示，所述川崎病生物标志物组包括NT
‑
proBNP、BNP、CK
‑
MB、Endocan
‑
1、PlGF、心肌肌钙蛋白1、FABP3、LIGHT、CXCL6、CXCL16、ST2、FABP4、Oncostatin M、VEGFA、HGF、MMP
‑
8和MMP
‑
9中的一种或多种。13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，测量每种川崎病生物标志物的完整蛋白
质或其肽序列、DNA、RNA水平。14.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP和FABP4。15.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4和MMP
‑
8。16.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8和CXCL16。17.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16和HGF。18.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF和LIGHT。19.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF、LIGHT和OSM。20.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8、CXCL16、HGF、LIGHT、OSM和ST2。21.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，进一步包括提供川崎病生物标志物水平呈现的报告。22.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述川崎病生物标志物呈现导出川崎病得分，其中所述川崎病得分：a. 通过几何平均值、多元线性判别分析或分布式梯度提升决策树机器学习，从所测量的血液生物标志物的值导出；或b. 每种生物标志物的水平的乘积，归一化以适应0
‑
10的等级，通过以下公式导出：[生物标志物1]
×
[生物标志物2]
×
[生物标志物3]
×……×
[生物标志物n]/[标准化因子]
×ꢀ
10 =川崎病得分；当没有足够的临床症状来确认川崎病诊断时，川崎病得分大于阈值，确认川崎病。23.用于测量选自以下生物标志物组的一种或多种川崎病生物标志物的量的检测试剂在制备用于受试者川崎病风险评估的试剂盒中的用途，其特征在于，所述用于受试者川崎病风险评估的方法，包括获得来自受试者的样品的川崎病生物标志物的水平表示，所述川崎病生物标志物组包括NT
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proBNP、BNP、CK
‑
MB、Endocan
‑
1、PlGF、心肌肌钙蛋白1、FABP3、LIGHT（TNFSF14）、CXCL6、CXCL16、ST2、FABP4、Oncostatin M、VEGFA、HGF、MMP
‑
8和MMP
‑
9中的一种或多种。24.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，测量每种川崎病生物标志物的完整蛋白质或其肽序列、DNA、RNA水平。25.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP和FABP4。26.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4和MMP
‑
8。27.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
‑
proBNP、FABP4、MMP
‑
8和CXCL16。28.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
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proBNP、FABP4、MMP
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8、CXCL16和HGF。29.根据权利要求23所述的用途，其特征在于，所述组包括NT
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proBNP、FABP4、MMP
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8、CXCL16、HGF和LIGHT。
30.根据权利要求23所述的用...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈利民，
申请(专利权)人：天津云检医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：