脂联素检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种脂联素检测试剂盒，包括：试剂R1和试剂R2，试剂R1的成分包括：Tris缓冲液、聚乙二醇PEG

【技术实现步骤摘要】
脂联素检测试剂盒


[0001]本专利技术属于脂联素检测领域，特别涉及一种脂联素检测试剂盒。

技术介绍

[0002]近年来，糖尿病发病率呈“爆炸式”增长，高血糖影响全身多个器官的健康。由糖尿病引发的并发症是糖尿病病人最主要的死亡原因，并发症包括糖尿病视网膜病变(50％的失明由糖尿病引起)、心脑血管疾病(50％的心血管疾病由糖尿病引起)、糖尿病肾病(60％的肾功能衰竭由糖尿病引起)和糖尿病神经病变(30％的截肢是糖尿病造成)。糖尿病是一个终身疾病，目前医学水平无法根除治愈，需要终身治疗，通过使用降糖药控制血糖，延缓并发症的发生。
[0003]脂联素(Adiponectin/ADPN)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，由244个氨基酸组成，大量存在于血液循环中。脂联素作为一种胰岛素超敏化激素(AnInsulin
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sensitizingHormone)，可以加强胰岛素抑制糖原异生作用，从而抑制肝脏的糖生成，是机体的脂质代谢和血糖稳态的调控网络中的重要调节因子。另外，在动脉粥样硬化血管壁损伤的早期，脂联素还可以降低多种粘附分子(VCAM
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1、ICAM
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1、选择素
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E)在内皮细胞的表达。由此可见，脂联素水平能预示2型糖尿病和心血管疾病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。人血清/血浆中脂联素水平的下降，预示发生上述疾病的风险增加。
[0004]不同于血糖和糖化血红蛋白这两个糖尿病诊断指标，脂联素是一种可对2型糖尿病进行早期风险预测的新指标，通过脂联素可筛查出血糖尚且正常，但机体生理代谢已经出现异常的糖尿病高风险人群，脂联素可提前4
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7年筛查出处于前糖尿病期(可能血糖指标正常)的高风险人群。在糖尿病自然病程的可逆阶段，助力2型糖尿病的一级预防。脂联素可评估药物治疗对疾病的逆转效果；反映胰岛素抵抗(负相关)，辅助临床分型诊断，也可对胰岛素的应用提供指导。
[0005]综上所述，脂联素可独立于血糖检测，动态评估糖尿病的病情和预后，因此，提供一种有效的脂联素检测方法，对2型糖尿病进行早筛查、早发现、早干预至为重要。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提供一种基于胶乳增强免疫比浊法的脂联素检测试剂盒，用于体外定量测定人血清/血浆样本中脂联素的浓度。
[0007]本专利技术提供的脂联素检测试剂盒，包括：试剂R1和试剂R2。
[0008]试剂R1的成分包括：Tris缓冲液、聚乙二醇PEG
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6000、防腐剂；
[0009]试剂R2的成分包括：PBS缓冲液、牛血清白蛋白，偶联有抗人脂联素单抗的致敏胶乳微球、防腐剂。
[0010]本专利技术提供的脂联素检测试剂盒的工作原理如下：样本中的脂联素与试剂中的致敏乳胶微球接触，与抗人脂联素单抗发生抗原抗体反应，形成免疫复合物，产生一定浊度，
该浊度的高低与抗原的含量成正比，测定浊度并通过定标曲线可进行脂联素的定量测定。
[0011]根据本专利技术提供的一实施方式，试剂R1的pH为8.0
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9.0。
[0012]根据本专利技术提供的一实施方式，试剂R2的pH为7.0
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8.0。
[0013]根据本专利技术提供的一实施方式，试剂R1:试剂R2的加样量为160：40。
[0014]根据本专利技术提供的一实施方式，在700nm波长下测定浊度。
[0015]根据本专利技术提供的一实施方式，试剂R1搅拌时长不少于60min，试剂R2搅拌时长不少于20min
[0016]根据本专利技术提供的一实施方式，还包括多个校准品，校准品的成分包括：Tris
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PBS缓冲液、脂联素抗原、牛血清白蛋白和防腐剂。
[0017]根据本专利技术提供的一实施方式，还包括多个质控品，质控品的成分包括：脂联素抗原、小牛血清和防腐剂。
具体实施方式
[0018]下面将对本专利技术技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
[0019]本实施例提供的脂联素检测试剂盒，包括：试剂R1、试剂R2、校准品CAL1/CAL2/CAL3/CAL4/CAL5、质控品CON1/CON2。
[0020]试剂R1的成分包括：Tris缓冲液(100mmol/L)、聚乙二醇PEG
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6000、防腐剂；试剂R2的成分包括：PBS缓冲液(50mmol/L)、牛血清白蛋白，偶联有抗人脂联素单抗的致敏胶乳微球、防腐剂。
[0021]校准品的成分包括：Tris
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PBS缓冲液(50mmol/L)、脂联素抗原、牛血清白蛋白和防腐剂。
[0022]质控品的成分包括：脂联素抗原、小牛血清和防腐剂(0.1％)。
[0023]该脂联素检测试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法，原理如下：样本中的脂联素与试剂中的致敏乳胶微球接触，与抗人脂联素单抗发生抗原抗体反应，形成免疫复合物，产生一定浊度，该浊度的高低与抗原的含量成正比，测定浊度并通过定标曲线可进行脂联素的定量测定。
[0024]当交联有抗体的致敏乳胶微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。反应液散光性能或透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性,在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。胶乳增强免疫比浊法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定，抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤，能快速获得结果，省时省力。此外，胶乳增强免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了人为操作和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能更真实地反映被测物质的含量。
[0025]本实施例提供的检测试剂盒还进一步对以下参数进行了限定：
[0026]1、试剂R1的pH为8.0
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9.0，Tris缓冲液浓度为100mmol/L。
[0027]试剂R1是由含氯化钠、聚乙二醇PEG
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6000和防腐剂构成的Tris缓冲液。为了选择
脂联素的最适反应pH，采用一系列不同pH的试剂R1，配合R2与任选高、低脂联素活性血清各五例反应，结果如下：
[0028]表1：不同pH试剂R1的血清检测结果
[0029][0030]参照表1，随着试剂R1的pH逐渐提高，绝大部分血清的反应值随之提高，当pH＝8.0～9.0时，反应值呈现平台，此时高、低血清样本反应充分，之后血清的反应值随着pH的进一步升高而下降，说明pH过高与过低均不利于脂联素与抗脂联素抗体的反应，故从充分增大吸光度值的角度出发，将试剂R1的pH定为8.5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脂联素检测试剂盒，其特征在于，包括：试剂R1和试剂R2，试剂R1的成分包括：Tris缓冲液、聚乙二醇PEG
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6000、防腐剂；试剂R2的成分包括：PBS缓冲液、牛血清白蛋白，偶联有抗人脂联素单抗的致敏胶乳微球、防腐剂。2.根据权利要求1所述的脂联素检测试剂盒，其特征在于，试剂R1的pH为8.0
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9.0。3.根据权利要求1所述的脂联素检测试剂盒，其特征在于，试剂R2的pH为7.0
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8.0。4.根据权利要求1所述的脂联素检测试剂盒，其特征在于，试剂R1:试...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文，
申请(专利权)人：湖南新大陆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：