用于选择高质量干细胞的标记物，以及使用其选择高质量干细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于评估干细胞质量的组合物和试剂盒，以及用于产生干细胞的方法，并且可以提供用于预防或治疗免疫相关疾病的细胞治疗产品和组合物。疗产品和组合物。疗产品和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择高质量干细胞的标记物，以及使用其选择高质量干细胞的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于筛选高质量干细胞的细胞表面标记蛋白及利用该标记蛋白筛选高质量干细胞的方法。

技术介绍

[0002]干细胞是未分化的细胞，其具有自我更新和分化成各种类型人体细胞的能力。当干细胞被用作治疗剂时，它们被认为通过五个主要机制提供抗炎作用和介导修复：将受损组织恢复到正常状态，募集组织生长所需的细胞例如内皮祖细胞，通过瘢痕形成的组织重塑、细胞凋亡抑制、和组织分化。
[0003]此外，已知干细胞由于其表面表达的MHC分子数量相对较少而具有低免疫原性。还发现干细胞分泌趋化因子来逃避免疫反应并促进新组织的耐受性。这允许在没有高免疫排斥风险的情况下进行同种异体治疗。一些干细胞的效力可能会受到递送方法的影响。
[0004]干细胞包括可以由人类胚胎制成的胚胎干细胞和成体干细胞，例如不断产生血细胞的骨髓细胞。胚胎干细胞可以分化成构成人体的所有细胞和组织，但由于伦理原因其使用受到限制，而成体干细胞是从脐带血或成人骨髓和血液中提取，分为间充质干细胞和造血干细胞细胞。
[0005]其中，间充质干细胞(MSCs)是存在于包括骨髓在内的全身的干细胞，其能够分化成各种细胞谱系，例如脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞。由于Alexander A.Maximow(1874
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1928)发现间充质中存在可分化为血细胞的祖细胞，间充质干细胞首先由Alexander J.Friedenstein(1924
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1998)在1976年从骨髓基质分离被命名为成纤维细胞前体。20世纪90年代，许多研究人员发现间充质干细胞具有分化成软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞等的能力，“间充质干细胞”一词开始被使用。从那时起，间充质干细胞已从许多物种中分离出来，包括人类、小鼠、大鼠、狗、山羊、兔子和猫。
[0006]在使用间充质干细胞的细胞治疗技术中，重要的是只使用高纯度和高质量的细胞。该治疗技术已被尝试用于治疗疑难杂症，例如各种炎症性疾病。因此，需要用于评估用于间充质干细胞治疗产品的间充质干细胞性能的标记物。

技术实现思路

[0007]技术问题
[0008]本专利技术的一个目的是提供一种用于评估干细胞质量的组合物和试剂盒。
[0009]本专利技术的另一个目的是提供一种选择可用作细胞治疗产品的活化干细胞的方法。
[0010]本专利技术的又一个目的是提供一种用于预防或治疗免疫相关疾病的细胞治疗产品和组合物，其包含通过本专利技术的方法选择的干细胞。
[0011]然而，本专利技术所要达到的目的并不局限于上述目的，本领域技术人员将从以下描述中清楚地理解本文未提及的其他目的。
[0012]技术方案
[0013]在下文中，将参考附图来描述在此描述的各种实施方案。在以下描述中，阐述了许多具体细节，例如具体配置、组成、和过程等，以提供对本专利技术的透彻理解。然而，某些实施方案可以在没有这些具体细节中的一个或多个的情况下实施，或者与其他已知的方法和配置相结合。在其他情况下，没有特别详细地描述已知的过程和制备技术以避免不必要地模糊本专利技术。本说明书通篇对“一个实施方案”或“一实施方案”的引用意味着结合该实施方案描述的特定特征、构造、组成或特性包括在本专利技术的至少一个实施方案中。因此，本说明书通篇各处出现的短语“在一个实施方案中”或“一实施方案”不一定指代本专利技术的相同实施方案。此外，在一个或多个实施方案中，可以以任何合适的方式组合特定特征、构造、组成、或特性。除非在本说明书另有说明，本说明书中使用的所有科学技术术语与本专利技术所属
的技术人员所普遍理解的含义相同。
[0014]根据本专利技术的一个实施方案，提供了一种用于评估干细胞质量的组合物，所述组合物包含用于测量CD71(分化簇，Cluster of Differentiation 71)蛋白或其编码基因的表达水平的试剂。
[0015]在本专利技术中，所述“CD71蛋白”也称为转铁蛋白受体(TFRC)，所述CD71蛋白与转铁蛋白相互作用，该转铁蛋白结合流过血细胞的铁，通过称为受体介导的转铁蛋白内吞作用的过程为细胞提供铁。CD71蛋白可由SEQ ID NO:1代表。编码CD71蛋白的基因位于人类的3号染色体和小鼠的16号染色体上。
[0016]在本专利技术中，用于测量CD71蛋白表达水平的试剂可以包括选自，与该蛋白特异性结合的抗体、寡肽、配体、肽核酸(PNA)、和适配体之一，但不限于此。
[0017]在本专利技术中，所述“抗体”是指与抗原特异性结合并引起抗原抗体反应的物质。为了本专利技术的目的，所述抗体是指特异性结合CD71蛋白的抗体。
[0018]本专利技术的抗体的实例包括所有的多克隆抗体、单克隆抗体、和重组抗体。使用本领域熟知的技术可以容易地生产此抗体。例如，可以通过本领域公知的方法生产多克隆抗体，其包括通过将蛋白质的抗原注射到动物体内并从所述动物采集血液来获得含有所述抗体的血清的过程。这种多克隆抗体可以从任何动物产生，例如山羊、兔、绵羊、猴子、马、猪、牛、狗等。此外，可以使用本领域熟知的杂交瘤方法(参见Kohler和Milstein(1976)European Journal of Immunology 6:511
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519)或噬菌体抗体库技术(参见Clackson等人，Nature,352:624
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628,1991；Marks等人，J.Mol.Biol.,222:58,1
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597,1991)。可以使用凝胶电泳、透析、盐沉淀、离子交换层析、或亲和层析等方法分离和纯化通过上述方法产生的抗体。此外，本专利技术所述抗体的实例不仅包括具有两条全长轻链和两条全长重链的完整形式，还包括抗体分子的功能片段。“抗体分子的功能片段”是指至少具有抗原结合功能的片段，其实例包括Fab、F(ab')、F(ab')2和Fv。
[0019]在本专利技术中，“PNA(Peptide Nucleic Acid，肽核酸)”是指人工合成的DNA或类RNA聚合物，其由丹麦的哥本哈根大学的Nielsen、Egholm、Berg和Buchardt教授于1991年首先提出。DNA具有磷酸核糖骨架，但PNA具有通过肽键连接的重复N
‑
(2
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氨基乙基)
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甘氨酸骨架，因此对DNA或RNA的结合亲和力显著增加，稳定性也显著提高。因此，PNA用于分子生物学、诊断分析、和反义治疗。PNA详细公开在文献[Nielsen PE、Egholm M、Berg RH、Buchardt O(1991年12月).“用胸腺嘧啶取代的聚酰胺通过链置换对DNA进行序列选择性识别
(Sequence
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selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine
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substituted polyamide)”。科学254本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于评价干细胞质量的组合物，所述组合物含有用于测量CD71(分化簇71)蛋白质或编码所述蛋白质的基因的表达水平的试剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，当所述CD71蛋白或编码所述蛋白的基因的表达水平低于对照时，所述干细胞被判定为高质量。3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述干细胞是间充质干细胞(MSC)。4.一种干细胞品质评价试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1
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3任一项所述的干细胞品质评价组合物。5.一种活化干细胞的筛选方法，所述方法包括以下步骤：获得干细胞；和测量所述干细胞中CD71(分化簇71)蛋白或编码该蛋白的基因的表达水平。6.根据权利要求5所述的方法，其中，当所述干细胞中CD71蛋白或编码所述蛋白的基因的表达水平低于对照时，则判定所述干细胞为高质量干细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其中被判定为高质量的活化干细胞是CD71
低
表型干细胞。8.根据权利要求5所述的方法，其进一步包括测量干细胞的氧化应激的步骤。9.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜欣濉，慎志雄，姜惠远，金慧美，李起伯，全合尼，
申请(专利权)人：塞尔吐温株式会社，
类型：发明
国别省市：