一种免疫球蛋白E的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，本发明专利技术采用理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的单克隆抗体7F10、11C5建立双抗体夹心ELISA法检测血清IgE，单克隆抗体7F10、11C5均为是高亲和力、高特异性的鼠源性单克隆抗体，建立的夹心法灵敏度高，成本低，为血清IgE的检测提供了快速高效的分析手段，为开发快速检测试剂盒奠定基础。检测试剂盒奠定基础。检测试剂盒奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫球蛋白E的检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，尤其涉及一种免疫球蛋白E的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]过敏性疾病是全球最常见的疾病之一，其疾病负担持续增加。对患者做出过敏诊断主要是建立在识别出引起过敏性疾病的致敏原(通常是一种致敏蛋白)的基础上。对致敏性生物源的鉴定可以追溯到100多年前，数十年来，通过皮肤试验及经口或黏膜的激发试验，证明了过敏原的原始提取物与临床的致敏作用相关。自1967年纯化出IgE以来，血清学检测已经成为评价过敏性疾病的常用方法。随着高性能IgE检测方法的引入，sIgE分析在简单定性分析的基础上，进展为可以提供相关定量信息的检测方法。在疾病管理过程中要确认患者的过敏状态以确定引发过敏症状的过敏原具体种类，从而获得准确的诊断，制定最佳的治疗方案。
[0003]血清总IgE水平一般用国际单位(IU)或ng表示，1IU＝2.4ng，相当于WHO标准冻干血清制剂0.00928mg内所含的IgE量。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带血IgE水平小于0.5IU/ml，出生后随年龄增长而逐渐升高，12岁时达成人水平。成人血清IgE水平约在20～200IU/ml之间，一般认为大于333IU/ml(800ng/ml)时为异常升高。
[0004]IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病时IgE升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达5000～20000ng/ml，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总IgE水平大于5000ng/ml的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。
[0005]IgE水平明显高于正常阈值，通常与过敏性疾病有关，但并不一定是过敏性疾病。相反，低值或正常值并不能排除存在IgE介导的疾病。因此，应结合临床病史和sIgE检测结果具体解读总IgE水平。目前，检测血清IgE的试剂主要以国外进口试剂为主，价格昂贵；国内检测血清IgE的产品较少，特异性差，限制了相关研究的进展。因此，需要一种特异性强、重复性高、成本低的检测IgE的试剂。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种免疫球蛋白E(IgE)的检测试剂盒。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，包括捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体由单克隆细胞株DQ产生，所述检测抗体由单克隆细胞株LMHL产生；其中，
[0008]单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464；
[0009]单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。
[0010]进一步地，所述检测试剂盒为双抗体夹心ELISA试剂盒。
[0011]进一步地，所述捕获抗体采用固相载体进行包被。
[0012]进一步地，所述固相载体为酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜中的至少一种。
[0013]进一步地，所述检测抗体采用检测标记进行标记。
[0014]进一步地，所述检测标记为胶体金标记、酶标记、生物素标记或荧光素标记中的至少一种。
[0015]进一步地，所述酶标记为辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
‑
半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶中的一种。
[0016]进一步地，所述检测试剂盒还包括阴性对照、阳性对照、终止液、显色液、酶联板、包被液、PBS
‑
T缓冲液、PBS缓冲液中的至少一种。
[0017]进一步地，所述显色液为TMB显色液。
[0018]进一步地，所述终止液为8～12％H2SO4。
[0019]进一步地，所述包被液为碳酸盐包被缓冲液。
[0020]进一步地，所述碳酸盐包被缓冲液的浓度为0.04～0.06M，pH为9.0～10.0。
[0021]在本专利技术中，单克隆抗体7F10为包被抗体，单克隆抗体11C5为检测抗体；检测抗体(单克隆抗体11C5)为辣根过氧化物酶所标记的抗体。酶标板上包被单克隆抗体7F10用于特异性捕获IgE蛋白，并以酶标板上酶标抗体11C5
‑
HRP与捕获的IgE结合，底物加入后被HRP酶催化并在450nm产生吸收值，根据P/N值判定结果，其中：若IgE被包被抗体7F10捕获并与酶标抗体11C5
‑
HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值(P/N≥2.1)，判定为阳性；若IgE浓度过低(P/N＜2.1)被判定为阴性。
[0022]借由上述方案，本专利技术至少具有以下优点：
[0023]本专利技术采用理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的单克隆抗体7F10、11C5建立双抗体夹心ELISA法检测血清IgE，单克隆抗体7F10、11C5均为是高亲和力、高特异性的鼠源性单克隆抗体，建立的夹心法灵敏度高，成本低，为血清IgE的检测提供了快速高效的分析手段，为开发快速检测试剂盒奠定基础。
[0024]生物材料样品保藏：
[0025]单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464。
[0026]单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。
附图说明
[0027]图1为IgE重组蛋白表达纯化后SDS
‑
PAGE鉴定图；
[0028]图2为单克隆抗体7F10和11C5纯化后SDS
‑
PAGE鉴定图；
[0029]图3为双抗体夹心法7F10
‑
11C5/HRP的检测标准曲线。
具体实施方式
[0030]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0031]所述单克隆细胞株DQ、LMHL的制备方法及筛选方法，可采用本领域常规方法。具体方法可包括以下步骤：
[0032]一、重组质粒构建
[0033]根据GenBank公开的IgE基因序列(其中抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫球蛋白E的检测试剂盒，其特征在于，包括捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体由单克隆细胞株DQ产生，所述检测抗体由单克隆细胞株LMHL产生；其中，单克隆细胞株DQ，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45464；单克隆细胞株LMHL，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2023年02月08日，保藏编号CGMCCNo.45460。2.根据权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒为双抗体夹心ELISA试剂盒。3.根据权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体采用固相载体进行包被。4.根据权利要求3所述检测试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，叶丽雅，匡华，徐丽广，孙茂忠，吴晓玲，刘丽强，郝昌龙，宋珊珊，胡拥明，吴爱红，胥欣欣，郭玲玲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：