抗人CD3鼠单抗及兔单抗研发及稳转细胞株建立制造技术

本发明专利技术提供本发明专利技术提供一种抗人CD3抗体，其重链CDR区氨基酸序列选自SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
抗人CD3鼠单抗及兔单抗研发及稳转细胞株建立


[0001]本专利技术属于抗体领域，具体涉及一种抗人CD3鼠单抗及兔单抗蛋白序列测定及稳转细胞株建立。

技术介绍

[0002]CD(Cluster of Differentiation)：分化簇或分化群，也叫白细胞分化抗原，指的是不同谱系的白细胞在正常分化成熟的不同阶段及活化过程中，出现或消失的细胞表面标记。它们是细胞膜上的一类蛋白质或糖蛋白。在生理学上，CD分子有许多用途，通常用作细胞的重要受体或配体。不仅可作为表面标志用于细胞的鉴定和分离，还广泛参与细胞的生长、成熟、分化、发育、迁移、激活。
[0003]正常情况下，各淋巴细胞群相互协同作用，维系机体的正常生理免疫机能。当不同的亚群在数量上和功能上发生异常时，机体就可能导致免疫紊乱，出现一系列病理现象。如自身免疫性疾病(风湿性疾病等)、免疫缺陷性疾病(反复肺部和肠腔感染等)、变态反应性疾病(荨麻疹、过敏等)、再生障碍性贫血、病毒感染和恶性肿瘤等。通过利用抗CD分子进行检测可以对机体的异常进行监测，以便及时准确的进行确诊和治疗。
[0004]CD3是一种蛋白质复合物，是由五种肽链(CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、η链)组成的蛋白复合物结构，这五种肽链均为跨膜蛋白，通常在所有成熟T细胞的表面表达。它的主要功能是作为T细胞共同受体，促进细胞毒性T细胞(CD8+T细胞)和辅助T细胞(CD4+T细胞)的活化，并最终帮助形成获得性免疫反应。
[0005]CD3是检出末梢血中成熟T细胞的最好的标记。在流式细胞分析中，人CD3通常被用作将T细胞与其他淋巴细胞区分开来的谱系特异性标记物。CD3对T细胞的特异性与其在T细胞发育的所有阶段均可出现结合的特性，使其成为检测健康T细胞和T细胞癌(例如白血病、淋巴瘤)的理想标志物。在免疫组织化学研究中，CD3是组织切片中T细胞的免疫组化标志物。另一方面CD3单克隆抗体在脏器移植、骨髓移植时的免疫抑制疗法以及因重症自身免疫疾患时，以除去T细胞为目的的免疫调节疗法中被充分利用
[1]。其中最著名的就是奥昔组单抗，它被开发用于治疗1型糖尿病和自身免疫性疾病。
[0006]CD3单克隆抗体作为类免疫抑制剂，相比于甾体类激素等常规免疫抑制药物，具有毒副作用少、使用剂量小、维持时间长等优点，因此在临床，特别是在器官移植领域中得到了广泛的应用。目前抗CD3单克隆抗体在自身免疫性疾病治疗中的作用正得到越来越多的关注，已经获得了初步的进展
[2]。抗CD3单克隆抗体的独特性和众多优点将使之成为治疗器官移植和自身免疫性疾病更好的手段和方法。
[0007]利用杂交瘤的方式制备抗体时，由于杂交瘤不稳定，抗体基因容易丢失，此外，杂交瘤制备技术不会对目标抗体的基因序列及蛋白序列进行鉴定，不利于对目标抗体后续的生产，制备及研发工作。基因工程方法可以很好地解决杂交瘤方法中的问题，通过基因工程方法进行抗体的制备必需的条件是明确抗体的序列，因此，挖掘更适用于CD3检测的抗体是当前更为合适的研发方向。
[0008][1]Bommireddy R,Doetschman T.TGF
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β,T
‑
ceII toIerance and anti
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9.
[0009][2]HeroId KC,Hagopian W,Auger JA,et al.Anti
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CD3 monocIonaI antibody innew
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onset type 1diabetes meIIitu[s J].N Engl Med,2002,34(6 22):1692
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1698.

技术实现思路

[0010]为了解决上述问题，本专利技术发现了四种新的抗人CD3鼠单抗和兔单抗，并通过设计基因与蛋白序列，建立该基因的稳转CHO细胞株进行重组表达，经验证，表达纯化的抗体能够特异性识别人CD3抗原，抗体表达产量远高于传统的杂交瘤细胞制备抗体的产量。此外，将该抗体的小鼠IgG1置换成兔IgG，保留可变区不变，建立兔单抗的稳转CHO细胞株进行重组表达，经验证，表达纯化的抗体能够保持特异性识别人CD3抗原。
[0011]术语：
[0012]本专利技术中，CDR(complementarity
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determining regions，CDR)叫做互补决定区或互补决定簇。它位于免疫球蛋白的超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补。一般包括CDR1、CDR2、CDR3。
[0013]本专利技术中，可变区指免疫球蛋白轻链和重链靠近N端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区。
[0014]本专利技术中，重链指抗体中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；轻链指抗体中2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。
[0015]本专利技术中，相似性指同源蛋白质的氨基酸序列中一致性和可取代氨基酸所占的比例。
[0016]本专利技术中，单克隆抗体指由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。
[0017]本专利技术中，鼠源化抗体指将来源于免疫接种过的小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，得到的鼠杂交融合细胞分泌的抗体。
[0018]一方面，本专利技术提供了一种抗人CD3抗体。
[0019]所述的抗人CD3抗体包括重链和轻链，所述的重链包括重链链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2、LCDR3，其中：
[0020](1)HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
[0021](2)HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；
[0022](3)HCDR3为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；
[0023](4)LCDR1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；
[0024](5)LCDR2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列；
[0025](6)LCDR3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。
[0026]具体地，所述的抗人CD3抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.10或与SEQ ID NO.10具有80％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.11或与SEQ ID NO.11具有80％以上序列相似性的序列；所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸选自SEQ ID NO.12或与SEQ ID NO.12具有80％以上序列相似性的
序列；或所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD3抗体，其特征在于，包括重链和轻链，所述的重链包括重链可变区，所述的轻链包括轻链可变区；所述的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：(1)HCDR1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(2)HCDR2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；(3)HCDR3为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；(4)LCDR1为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；(5)LCDR2为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列；(6)LCDR3为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗人CD3抗体，其特征在于，所述的抗人CD3抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.10或与SEQ ID NO.10具有80％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.11或与SEQ ID NO.11具有80％以上序列相似性的序列；所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸为SEQ ID NO.12或与SEQ ID NO.12具有80％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸为SEQ ID NO.13或与SEQ ID NO.13具有80％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸为SEQ ID NO.14或与SEQ ID NO.14具有80％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体轻链可变区的氨基酸为SEQ ID NO.15或与SEQ ID NO.15具有80％以上序列相似性的序列。3.根据权利要求1所述的抗人CD3抗体，其特征在于，所述的抗人CD3抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO.16，或与SEQ ID NO.16具有65％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO.17，或与SEQ ID NO.17具有65％以上序列相似性的序列；或所述的抗人CD3抗体重...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，施嘉敏，褚冰儿，赵鑫萍，徐飞，张娅，褚建达，
申请(专利权)人：浙江正熙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：