一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明专利技术提供了一种大肠杆菌基因工程菌，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waa(L

【技术实现步骤摘要】
一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法


[0001]本专利技术涉及一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法，属于基因工程和发酵工程


技术介绍

[0002]胞外多糖是通过微生物的代谢途径在相关细胞表面产生的一种多糖聚合物。克拉酸(CA)是一种由肠道细菌分泌的带负电荷的胞外多糖。据了解，在大肠杆菌K12中，CA合成的激活是由环境或内部条件的改变触发的，包括膜壁的组成和结构的改变。CA在细菌抵抗外界环境压力(氧化应激、低温、低pH值或渗透性休克)方面发挥了关键作用。此外，纯化的CA聚合物引起哺乳动物线粒体的改变并同时延长寿命，而且这些特征在物种间是保守的。这也使得CA在食品和医药行业受到越来越多的关注。此外，CA具有高分子量和表面多亲水基团，这有助于其良好的保水性和在化妆品中的广泛应用。同时，多糖的抗氧化性能扩大了CA的应用范围和研究潜力。
[0003]CA在多个应用领域有着广阔的前景，提高CA产率和揭示CA性质无疑将促进CA更广泛研究和应用。目前关于微生物发酵法生产克拉酸的报导相对较少，已发表的微生物发酵法生产克拉酸的相关研究主要集中于解除Rcs系统对cps基因簇的负调控以及维持低pH条件等。
[0004]通常情况下，大肠杆菌细胞膜变化会激活RCS系统的信号传递。大肠杆菌由细胞内膜和细胞外膜两层细胞膜组成。细胞内膜包裹着细胞质，主要由磷脂组成；细胞外膜由外叶的脂多糖(LPS)分子和内叶的磷脂组成，将细胞与周围环境隔离。大肠杆菌K
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12的LPS是由一个疏水的脂质A域和一个非重复性的核心寡糖组成，是细胞外膜的组成部分。目前关于细胞膜膜壁结构改造提高克拉酸的相关研究较少。根据我们之前报道，LPS的结构缺陷促进了CA的合成。此外暂无针对关于细胞内膜中磷脂的改造。克拉酸的应用前景广阔，因此通过膜壁结构改造构建高效生产克拉酸的大肠杆菌对于后续克拉酸的大规模工业化生产尤为必要。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种大肠杆菌基因工程菌，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，clsB和clsC中的一个或多个。
[0006]在本专利技术的一种实施方式中，所述脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ的NCBI登录号依次为948148，948147，948146，948145，948142，948143，948144，948150，948149，948155；所述lon的NCBI登录号为945085；所述hns的NCBI登录号为945829；所述clsA,clsB以及clsC的NCBI登录号依次为945821，
945409和66521438。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，命名为WWM11。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsB，命名为WWM12。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsC，命名为WWM13。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA和clsB，命名为WWM14。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA和clsC，命名为WWM15。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsB和clsC，命名为WWM16。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，clsB和clsC，命名为WWM17。
[0014]本专利技术还提供了一种重组大肠杆菌，所述重组大肠杆菌是上述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，clsB和clsC中的一个或多个。2.根据权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ的NCBI登录号依次为948148，948147，948146，948145，948142，948143，948144，948150，948149，948155；所述lon的NCBI登录号为945085；所述hns的NCBI登录号为945829；所述clsA,clsB以及clsC的NCBI登录号依次为945821，945409和66521438。3.根据权利要求1或2所述的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，命名为WWM11；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsB，命名为WWM12；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsC，命名为WWM13；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA和clsB，命名为WWM14；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA和clsC，命名为WWM15；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escherichia coli str K
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12MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsB和clsC，命名为WWM16；或所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌Escheric...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小元，吴佳欣，胡晓清，黄铭，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：