生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用技术

本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，该菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。在本公开提供的技术方案中CpkA的羧基端带负电，而FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽。通过静电相互作用，CpkA和FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达。提高其可溶性表达。提高其可溶性表达。

【技术实现步骤摘要】
生产鲎凝血因子FG
β
＇的菌株、制备方法和应用


[0001]本公开涉及生物
，且更具体地，涉及一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]FG是一种具有独特结构的异源二聚体丝氨酸蛋白酶酶原，FG是由两个非共价结合的亚基α和β组成，当(1,3)
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β
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D
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葡聚糖存在的情况下，两个亚基被激活成为活性因子，FG被激活，启动鲎血细胞裂解物的凝血机制，因此鲎凝血因子FGβ在(1,3)
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β
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D
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葡聚糖的检测中具有重要意义，然而，目前鲎凝血因子FGβ在原核表达时，可溶性较差。

技术实现思路

[0003]本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，以解决现有技术中FGβ在原核表达时，可溶性较差的技术问题。
[0004]根据本公开的第一方面，提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；
[0005]所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
[0006]可选地，所述菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体；
[0007]所述第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇；
[0008]所述第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。
[0009]可选地，所述菌株为大肠杆菌工程菌。
[0010]可选地，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒。
[0011]可选地，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。
[0012]可选地，所述菌株为Escherichia Coli BL21。
[0013]可选地，所述第一重组表达载体为pET17b。
[0014]可选地，所述第二重组表达载体为pACYC。
[0015]根据本公开的第二方面，提供了一种如上述的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，包括以下步骤：
[0016]将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的；
[0017]将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体；
[0018]将所述第一重组表达载体和所述第二重组表达载体共转化到工程菌中，得到生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株。
[0019]根据本公开的第三方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇的制备方法，对上述的菌株加入IPTG同时诱导表达FGβ＇和CpkA两种蛋白，然后进行蛋白纯化，得到目的蛋白FGβ＇。
[0020]根据本公开的第四方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇，所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
[0021]根据本公开的第五方面，提供了一种如上述的鲎凝血因子FGβ＇在制备(1,3)
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β
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D
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葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
[0022]根据本公开的第六方面，提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含如上所述的鲎凝血因子FGβ＇。
[0023]可选地，所述重组表达载体为pET17b
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FGβ＇，所述pET17b
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FGβ＇的基因序列如SEQ ID NO:3所示。
[0024]与现有技术相比，本公开提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，至少包括以下有益效果：
[0025]本公开的菌株中共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。其中，CpkA的羧基端带负电，而FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽，通过静电相互作用，CpkA和FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达，降低鲎凝血因子FGβ的获取难度，有利于在(1,3)
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β
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D
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葡聚糖检测中的应用。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本的技术方案，下面将对本公开的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1是本公开一示例性实施例提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法的流程示意图；
[0028]图2是本公开一示例性实施例提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的过程中SDS
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PAGE蛋白质电泳图。
具体实施方式
[0029]下面将结合本中的附图，对本公开中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本公开一部分实施例，而不是全部实施例。基于本公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实施例保护的范围。
[0030]在本公开一示例性实施例中提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；
[0031]所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
[0032]具体地，鲎凝血因子FGβ的前导肽如SEQ ID NO:1所示，SEQ ID NO:1：ATGGATATCAGTTTCCTGGTTTTTATCACACTGTCTATGGCTCTCTTCTCGAGCAACGTGACAGGAACGTCAGTAACATCAAGGGTACGACGT。
[0033]带净正电荷的锚定肽如SEQ ID NO:2所示，SEQ ID NO:2：CGTGGTCGTCGTGGTGGT。锚定肽的氨基酸序列为RGRRGG。
[0034]CpkA是由548个氨基酸组成的分子伴侣素，适应低温，分子伴侣素是一大类能够识别并结合到不完整折叠或装配的多肽或蛋白质，并帮助其折叠成正确的空间结构的蛋白。分子伴侣素CpkA是从嗜热菌Thermococcus kodakarensis中提取发现的冷诱导型CpkA。
[0035]在本实施例提供的菌株中，CpkA的羧基端带负电，而鲎凝血因子FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽，通过静电相互作用，CpkA和鲎凝血因子FGβ＇结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，其特征在于：所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体；所述第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇；所述第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。3.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌工程菌；和/或，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒；和/或，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。4.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，所述菌株为Escherichia Coli BL21；和/或，所述第一重组表达载体为pET17b；和/或，所述第二重组表达载体为pACYC。5.一种如权利要求1至4中任一项所述的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：高乐，闫丹丹，张昊，宋禹，赵涛，
申请(专利权)人：科赫生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：