用免疫检查点分子功能化的工程细胞及其应用制造技术

本文描述包含共价连接到细胞表面或连接到细胞表面的纳米颗粒的免疫检查点分子的功能化细胞，以及包含所述功能化细胞的组合物。还描述了包含功能化细胞和脱细胞胰腺来源蛋白的脱细胞胰腺细胞外基质。还描述了通过向受试者施用所述功能化细胞和脱细胞胰腺细胞外基质来治疗疾病的方法。还描述了制备本文所述的功能化细胞和脱细胞胰腺细胞外基质的方法。的功能化细胞和脱细胞胰腺细胞外基质的方法。的功能化细胞和脱细胞胰腺细胞外基质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用免疫检查点分子功能化的工程细胞及其应用
[0001]政府支持申明
[0002]本专利技术是由美国国立卫生研究院授予的CA198999号政府支持下完成的。政府在本专利技术中具有某些权利。
[0003]相关申请的交叉引用
[0004]本申请要求于2020年11月30日提交的美国临时专利申请序列号63/119,357的优先权，所述申请通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0005]免疫系统在耐受自身抗原以避免自身免疫的同时，对外来抗原进化出强劲的免疫应答
14,15
。调节性T(T
reg
)细胞调节体内平衡并且维持免疫耐受
28
。未能维持免疫耐受导致自身免疫性疾病的发展
14,29,30
。在不诱导全身免疫抑制的情况下调节自身反应性T细胞的能力表明了开发治疗自身免疫性疾病的新策略的主要挑战。
[0006]免疫检查点是免疫系统中的关键调节因子，有助于维持自我耐受性。
11
‑
15,37,38
例如，癌细胞通过刺激共抑制检查点分子来逃逸免疫监视，如活化T细胞中的程序性细胞死亡蛋白1(PD
‑
1)、细胞毒性T
‑
淋巴细胞相关蛋白4(CTLA
‑
4)和T细胞免疫球蛋白粘蛋白3(TIM
‑
3)信号。
11
‑
15
几项研究表明，β细胞中缺乏免疫检查点分子——如PD
‑
L1(PD
‑
>1的配体)，
5,16,17
CD86(活化T细胞中CTLA
‑
4的配体)，
18
和半乳糖凝集素
‑
9(Gal
‑
9，TIM
‑
3的配体)
19
与胰岛素依赖型糖尿病(也称为1型糖尿病，T1D)的发展有关。此外，研究发现共抑制性免疫检查点途径，如程序性细胞死亡受体1(PD1)
‑
PD配体1(PD
‑
L1)
37
‑
39
，和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA
‑
4)
‑
白细胞分化簇86(CD86)
37,38,40
直接调节髓鞘特异性诱导的T
reg
细胞
41
的发展和维持。
[0007]最近的研究表明，全身施用PD
‑
L1基因过表达的β细胞可以逆转体内早发性高血糖非肥胖糖尿病(NOD)小鼠。
5,16
然而，使用基因工程的β细胞需要大量的基因操作，这不仅昂贵且需要受到相当程度的监管。
[0008]在多发性硬化症(MS)的情况下，自身反应性T细胞攻击中枢神经系统(CNS)中的髓鞘，导致自身免疫性神经疾病多发性硬化症(MS)，其破坏大脑和外周系统之间的通信
29,31
。全世界至少有250万人受到MS的影响。大多数患者最初经历可逆性神经功能缺损发作，随后缓解，然后慢性神经功能恶化导致严重的、不可逆的功能障碍
31
。不幸的是，MS不能完全治愈，尽管可用的免疫调节疗法通过诱导抗原特异性免疫耐受降低了MS复发的频率和严重程度
32
‑
34
从而延缓功能障碍的积累。新的治疗策略包括诱导抗原特异性T
reg
细胞
35,36
，所述细胞抑制炎性病原体并且恢复外周免疫耐受而不引起全身免疫抑制。
[0009]仍然需要治疗剂来治疗或延迟自身免疫性疾病的发作，并且全身施用免疫检查点分子。

技术实现思路

[0010]本文提供了包含具有连接到表面的免疫检查点分子的功能化细胞的组合物以及
制备和使用所述组合物的方法。
[0011]在另一方面，本文描述的主题涉及一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子。
[0012]在另一方面，本文描述的主题涉及一种具有以下一般结构中之一的功能化细胞：
[0013][0014]或
[0015][0016]其中，x是从1至50的整数，并且其中y是从1至20的整数。
[0017]在另一方面，本文描述的主题涉及一种脱细胞胰腺细胞外基质，所述脱细胞胰腺细胞外基质包含功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；以及脱细胞胰腺来源蛋白。
[0018]在另一方面，本文描述的主题涉及药物组合物，所述药物组合物包含：一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；或脱细胞胰腺细胞外基质，所述脱细胞胰腺细胞外基质包含功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；和脱细胞胰腺来源蛋白；以及药学上可接受的赋形剂。
[0019]在另一方面，本文描述的主题涉及包含以下内容的疫苗：一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；或脱细胞胰腺细胞外基质，所述脱细胞胰腺细胞外基质包含功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；和脱细胞胰腺来源蛋白；以及药学上可接受的液体载体。
[0020]在另一方面，本文描述的主题涉及一种治疗或延迟受试者自身免疫性疾病发作的方法，所述方法包括向所述受试者施用：一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；脱细胞胰腺细胞外基质，所述脱细胞胰腺细胞外基质包含功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；以及脱细胞胰腺来源蛋白；或包含功能化细胞或脱细胞胰腺细胞外基质的药物组合物或疫苗。
[0021]在另一方面，本文描述的主题涉及一种逆转受试者中早发性1型糖尿病的方法，所
述方法包括向所述受试者施用：一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；脱细胞胰腺细胞外基质，所述脱细胞胰腺细胞外基质包含功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子；以及脱细胞胰腺来源蛋白；或包含功能化细胞或脱细胞胰腺细胞外基质的药物组合物或疫苗。
[0022]在另一方面，本文描述的主题涉及一种调节受试者中T
reg
:T
eff
的比率的方法，所述方法包括向所述受试者施用：一种功能化细胞，所述功能化细胞包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种功能化细胞，所述功能化细胞包含有包含修饰细胞表面的细胞，其中所述修饰细胞表面包含至少一种共价连接的免疫检查点分子。2.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述免疫检查点分子选自由以下组成的群组：PD
‑
L1、CD86、Gal
‑
9、PD
‑
L2、TIGIT、TIM
‑
1、TIM
‑
3、TNFR1、VISTA、BTLA、NKG2A、CTLA
‑
4、B7
‑
H3、B7
‑
H4、B7
‑
H5、B7
‑
H6、B7
‑
H7、ICOS、NKp30、LAG3、CD137和CD96。3.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述细胞是β细胞、施万细胞、少突胶质细胞、肺细胞、血小板、上皮细胞、肝细胞或滑膜细胞。4.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述至少一种共价连接的免疫检查点分子通过糖工程部分或通过硫醇
‑
马来酰亚胺缀合连接。5.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述至少一种共价连接的免疫检查点分子是免疫检查点分子功能化的纳米颗粒或聚合物。6.根据权利要求4所述的功能化细胞，其中所述糖工程部分包含甘露糖胺或半乳糖胺的酰胺的残基。7.根据权利要求6所述的功能化细胞，其中所述糖工程部分还包含共价连接到甘露糖胺或半乳糖胺的酰胺的所述残基上的叠氮化物、二苯并环辛炔或四嗪的残基。8.根据权利要求7所述的功能化细胞，其中所述二苯并环辛炔是DBCO。9.根据权利要求4、6、7或8所述的功能化细胞，其中所述糖工程部分还包含树状大分子、线性聚合物、纳米颗粒或Fc融合蛋白的残基。10.根据权利要求9所述的功能化细胞，其中所述树状大分子是多价树状大分子。11.根据权利要求10所述的功能化细胞，其中所述多价树状大分子是聚酰胺胺树状大分子。12.根据权利要求11所述的功能化细胞，其中所述聚酰胺胺树状大分子的MW为约500至约1,000,000。13.根据权利要求12所述的功能化细胞，其中所述聚酰胺胺树状大分子的MW为约25,000至约30,000。14.根据权利要求1所述的功能化细胞，每约100万个功能化细胞包含约0.5μg至约50.0μg所述至少一种共价连接的免疫检查点分子。15.根据权利要求1所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含至少一种PD
‑
L1、至少一种CD86和至少一种Gal
‑
9。16.根据权利要求1所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含至少一种PD
‑
L1和至少一种CD86。17.根据权利要求5所述的功能化细胞，所述功能化细胞具有下列结构之一：
18.根据权利要求17所述的功能化细胞，其中所述纳米颗粒包含运载物。19.根据权利要求18所述的功能化细胞，其中所述运载物是免疫抑制剂。20.根据权利要求19所述的功能化细胞，其中所述免疫抑制剂选自由以下组成的群组：来氟米特硫唑嘌呤、来那度胺、泊马度胺、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤和沙利度胺。21.根据权利要求2所述的功能化细胞，其中所述免疫检查点分子选自由以下组成的群组：PD
‑
L1、CD86和Gal
‑
9。22.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述细胞在生理条件下存活约1天至约7天。23.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述细胞在生理条件下存活约2天至约6天。24.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述细胞在生理条件下存活约3天至约4天。25.根据权利要求1所述的功能化细胞，其中所述细胞在生理条件下存活约5天至约21天。26.根据权利要求4所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含：具有以下结构的糖工程部分：(跨膜糖蛋白)
‑
(含叠氮化物分子的残基)
‑
(环辛炔的残基)
‑
(接头1)
‑
(功能化树状大分子的残基)
q
‑
(免疫检查点分子的残基)，其中，q是一或零；而且，破折号代表共价键。27.根据权利要求4所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含：具有以下结构的糖工程部分：(跨膜糖蛋白)
‑
(含环辛炔分子的残基)
‑
(叠氮化物的残基)
‑
(接头1)
‑
(功能化树状大分子的残基)
q
‑
(免疫检查点分子的残基)，其中，q是一或零；而且，破折号代表共价键。
28.根据权利要求26至27中任一项所述的功能化细胞，其中q是一。29.根据权利要求26至27中任一项所述的功能化细胞，其中q是零。30.根据权利要求4所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含：具有以下结构的糖工程部分：(跨膜糖蛋白)
‑
(含叠氮化物分子的残基)
‑
(环辛炔的残基)
‑
(接头1)
‑
(免疫检查点分子FcIg融合蛋白)，其中，破折号代表共价键。31.根据权利要求4所述的功能化细胞，所述功能化细胞包含：具有以下结构的糖工程部分：(跨膜糖蛋白)
‑
(含环辛炔分子的残基)
‑
(叠氮化物的残基)
‑
(接头1)
‑
(免疫检查点分子FcIg融合蛋白)，其中，破折号代表共价键。32.根据权利要求26所述的功能化细胞，其中所述功能化树状大分子的残基具有以下结构：
‑
(树状大分子)
‑
(接头2)
‑
(环辛炔的残基)
‑
(含叠氮化物分子的残基)
‑
。33.根据权利要求32所述的功能化细胞，其中所述接头2具有以下结构：其中，z是从0至10的整数。34.根据权利要求33所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：安德鲁，
申请(专利权)人：北卡罗来纳大学教堂山分校，
类型：发明
国别省市：