一种抑制WSSV感染的突触融合蛋白12及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抑制WSSV感染的突触融合蛋白12及其应用，编码抑制WSSV感染的突触融合蛋白12的基因Cq

【技术实现步骤摘要】
一种抑制WSSV感染的突触融合蛋白12及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种抑制WSSV感染的突触融合蛋白12及其应用。

技术介绍

[0002]白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是甲壳动物养殖过程中的危害极大的病毒性病原，其宿主范围广泛，感染对虾、螯虾及蟹类等甲壳类动物。WSSV毒力强，在对虾养殖过程中易爆发感染，导致对虾大量死亡，给水产养殖业带来极大的经济损失。因此，开展白斑病毒的防治研究对水产养殖业病毒性病害防控有重要的理论指导意义。
[0003]研究表明，自噬在WSSV感染过程有着重要的作用，如在病毒入胞过程中，自噬活性和WSSV入胞呈现正相关；而在WSSV复制及增殖阶段，自噬发挥抗病毒功能。在哺乳动物和果蝇中的研究发现，自噬体
‑
溶酶体融合过程主要由可溶性N
‑
乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N
‑
ethylmaleimide
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sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)复合物介导，位于自噬体的Qa
‑
SNARE蛋白突触融合蛋白17(Syntaxin17)与其伴侣分子Qbc
‑
SNARE蛋白突触体相关蛋白SNAP29和位于溶酶体上的R
‑
SNARE蛋白囊泡相关膜蛋白7/8(VAMP7/8)结合形成SNARE复合物，调控自噬体r/>‑
溶酶体膜融合，促进自噬溶酶体成熟。其中，自噬体Qa
‑
SNARE因子的Syntaxin17含有自噬体上的Qa型SNARE基序，在调控自噬体
‑
溶酶体膜融合过程中发挥至关重要的功能。此外，Syntaxin17的Qa
‑
SNARE基序还参与了与许多其他自噬相关蛋白的相互作用，如ATG14、TBK1和ATG8家族蛋白。然而，在螯虾中并未发现潜在的螯虾Syntaxin17基因，但鉴定出另一种螯虾Qa
‑
SNARE因子Syntaxin12可能是新颖的自噬体SNARE分子。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种抑制WSSV感染的突触融合蛋白12及其制备方法和应用。
[0005]为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种编码抑制WSSV感染的突触融合蛋白12的基因Cq
‑
Syx12，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]根据本专利技术实施例，基因Cq
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Syx12的ORF序列长858bp，该基因编码的Cq
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Syx12蛋白定位于自噬体并参与SNARE复合物组装。在Hpt细胞中抑制Cq
‑
Syx12基因表达后，自噬活性显著降低，病毒基因转录能力增强；由此说明，Cq
‑
Syx12基因可通过促进自噬活性显著抑制WSSV感染。
[0007]在本专利技术的第二个方面，本专利技术提出上述突触融合蛋白12，其氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。
[0008]在本专利技术的第三个方面，本专利技术提出上述突触融合蛋白12在制备抗动物WSSV感染的药物中的应用。
[0009]根据本专利技术实施例，抑制突触融合蛋白12的基因表达后，自噬活性显著降低，病毒
基因转录水平增强；由此说明，Cq
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Syx12基因可通过促进自噬活性显著抑制WSSV感染，以Syx12为靶点制备抗WSSV感染新药开发应用中具有很好的潜在应用前景。
[0010]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0011]图1为根据本专利技术实施例的Cq
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Syx12蛋白结构域预测；
[0012]图2为根据本专利技术实施例的Cq
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Syx12蛋白定位于自噬体的共聚焦显微镜观察图；
[0013]图3为根据本专利技术实施例的抗体检测Cq
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Syx12与Cq
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SNAP29、Cq
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VAMP7互作形成复合物；
[0014]图4为根据本专利技术实施例的Western blot检测图；
[0015]图5为根据本专利技术实施例的病毒基因VP28表达量。
具体实施方式
[0016]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的技术方案。应理解，本专利技术提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。
[0017]为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0018]本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得；涉及的实验如无特别说明，均为常规实验方法。
[0019]下面参考具体实施例，对本专利技术进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本专利技术。
[0020]实施例1红螯螯虾Cq
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Syx12基因克隆及蛋白结构域预测
[0021]根据实验室前期构建的红螯螯虾造血组织转录库已有的Cq
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Syx12基因ORF序列，设计特异性扩增引物进行PCR。上游引物F：5
’‑
ATGGCGTCAGGGTACTCACGT
‑3’
，下游引物R：5
’‑
TTACGTTTTTTTGCTAAAGTG
‑3’
。利用Max DNA Polymerase扩增基因序列，PCR反应体系配制如下：PrimeSTAR Max Premix 15μL；上游引物F(10μM)0.5μL；下游引物R(10μM)0.5μL；cDNA模板1μL；RNase
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Free H2O 13μL。PCR扩增程序：98℃预变性3min；98℃变性10s，55℃退火15s，72℃延伸10s，重复30个循环；72℃继续延伸10min。
[0022]回收PCR产物后将其与pMD18
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T载体连接，转化至大肠杆菌DH5α，挑取阳性单克隆菌测序，比对分析以确定所得Cq
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Syx12基因ORF本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码抑制WSSV感染的突触融合蛋白12的基因Cq
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Syx12，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.权利要求1所述的抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘海鹏，刘灵珂，简久婷，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：