一种基于eDNA的浊水湖泊鱼类监测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于eDNA的浊水湖泊鱼类监测方法，包括以下步骤：(1)水环境样品采集；(2)水环境样品前处理；(3)eDNA富集；(4)eDNA提取与宏基因测序。本发明专利技术通过在浊水湖泊中沿样线连续采集水样，解决了定位样点采集导致的代表性不足的问题；水样在现场先利用较大孔径网筛预过滤将颗粒物单独分离出来，再利用蛋白酶K等试剂将颗粒物中的eDNA分离释放出来，最后再利用小孔径滤膜收集水环境中的总eDNA，以最大限度收集水环境中的eDNA，并解决浊水湖泊中颗粒物引起的eDNA富集困难问题。各步骤协同配合，使本发明专利技术的监测方法能实现较高的灵敏度，在浊水湖泊鱼类监测方面具有极大的应用潜力。应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种基于eDNA的浊水湖泊鱼类监测方法


[0001]本专利技术涉及水生生物多样性监测
，特别是涉及一种基于eDNA的浊水湖泊鱼类监测方法。

技术介绍

[0002]科学监测水生生物多样性，获得完善的基础资料信息是水生态及生物多样性保护的前提。传统生物多样性监测方法，需要物理捕获，这可能对栖息地造成干扰或破坏；并且物种多样性会受到系统分类鉴定的专业限制；此外，水环境中小型或稀有类群的生物难以被发现。
[0003]环境DNA(environmental DNA,eDNA)技术，作为近年来受到广泛关注的一种生物检测技术，是监测水生生物多样性的有效工具。eDNA是指生物遗留在环境中的DNA，可能来源于生物脱落的组织、黏液、分泌物、排泄物、血液和尸体等。eDNA技术作为非侵入性方法，对生物群落的干扰小，且物种可探测敏锐度高，克服了传统技术的一些缺陷与不足，是一种新兴的生态系统监测技术，具有广阔的应用前景。
[0004]在实际应用过程中，eDNA技术仍存在许多挑战。微孔滤膜是富集水体eDNA的主要方式，相较于大孔径滤膜高eDNA透过率，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于eDNA的浊水湖泊鱼类监测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)水环境样品采集：在湖泊中每隔500
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1500m设置样线，在每条样线上以400
‑
2000mL/min的流量连续采集表层水样，每500
‑
1000m的采样区间定义为一个采样点，每个采样点采集的水环境样品独立存放；(2)水环境样品前处理：将步骤(1)中采集到的水环境样品，在现场用网筛过滤，固体物用无菌离心管收集，并按1g:1mL:1mL的用量比添加氯化钠溶液与苯扎氯铵溶液，得到固体样本；过滤后的水样用无菌自封袋收集，并按用量比1ml：(0.2
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0.8)mg添加固体苯扎氯铵，得到液体样本；(3)eDNA富集：在步骤(2)中所述固体样本中加入蛋白酶K溶液，十二烷基硫酸钠溶液，乙二胺四乙酸溶液，混匀，45
‑
70℃振荡6
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12h，离心，保留上清液；将所述上清液与步骤(2)所述液体样本混匀，用滤膜过滤，截取水样中的eDNA至滤膜上；(4)eDNA提取与宏基因测序：采用eDNA抽提试剂盒按步骤提取滤膜上的eDNA，并检验提取的基因组eDNA浓度和质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙云川，蒋娟，郭金，蒋玄空，代亮亮，
申请(专利权)人：贵州省生物研究所，
类型：发明
国别省市：