一种毛囊修复蛋白组合物及其制备方法和其应用技术

本发明专利技术涉及一种毛囊修复蛋白组合物，其制备包括如下步骤：在细胞蛋白提取物中加入20U/mL

【技术实现步骤摘要】
一种毛囊修复蛋白组合物及其制备方法和其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种毛囊修复蛋白组合物及其制备方法和其应用。

技术介绍

[0002]头发茂密是身体健康和毛发健康的重要标志。毛囊健康是毛发健康的基础，保持毛囊健康的关键在于激活头皮系统内的毛囊基质细胞。毛囊经历着生长期、退行期、休止期的周期性生长循环。毛囊的周期性变化与毛囊基质细胞的周期性分裂、增殖、分化等密切相关。高活性的毛囊基质细胞持续释放大量的毛囊基质细胞生长因子，促进毛囊细胞进入自我修复、成长、分裂和头发生长的良性循环。
[0003]现代人受生活忙碌、工作压力、环境污染等因素的影响，出现头发易断裂、提早老化、脱发严重、毛发再生障碍等问题，严重影响个人形象，甚至造成心理疾病。
[0004]毛发疾病包括患者出现少毛、多毛、毛发分布异常、毛发密度异常、毛发直径异常、毛发色素异常、毛干异常等生理或病理表现。脱发包括生理性脱发和病理性脱发。生理性脱发包括自然脱发、季节性脱发、婴儿脱发、老年性脱发和产后脱发等。病理性脱发包括非瘢痕性脱发和瘢痕性脱发。非瘢痕性脱发包括雄激素性秃发(占比约95％)、斑秃(占比约4％)、梅毒性脱发、拔毛癖、休止期脱发、生长期脱发、牵拉性脱发、机械性脱发、秃发性毛囊炎、脓肿性穿凿性毛囊炎、先天性少毛症等。祛除非瘢痕性脱发的致病因素后，则毛发重新长出。瘢痕性脱发会永久性地破坏毛囊，导致永久性脱发，病因包括外伤、感染、炎症性皮肤病(如盘型红斑狼疮、毛发扁平苔藓等)、头皮扁平苔癣、头皮盘状红斑狼疮、放射性脱发、女性纤维性脱发、头皮烧烫伤等。
[0005]病理性脱发患者出现头发异常、过度脱落而导致发量明显减少。常见的脱发病因包括雄激素过多、遗传、压力过大、怀孕、疾病、药物、损伤等。自身免疫病、甲状腺疾病、红斑狼疮、糖尿病、铁缺乏、进食障碍和贫血等疾病，导致体内激素水平变化而加重脱发。抗肿瘤药物、血液稀释剂、降压药物、避孕药物、烧伤、各种损伤、X射线辐射等导致暂时性脱发。
[0006]脂溢性脱发(雄激素性脱发，AGA)以头皮油脂过量溢出、头发逐渐变细、变软、变少等为主要表现的毛发疾病，可伴有头皮瘙痒、头皮屑和瘙痒等，是一种具有遗传因素参与的且依赖雄激素作用导致的进行性毛囊病变。我国AGA患者总数超过1亿，男性患病率(20.2％)多于女性(5.1％)。
[0007]细胞是生命活动的基本单位和机体健康的基础。当机体的氧化还原平衡遭到破坏时，会引起氧化还原信号和控制的中断，引发氧化应激损伤而产生多种疾病。已有研究表明，毛囊干细胞的数量及活性、毛囊的再生能力等因素与头发脱落直接关联。毛囊干细胞的数量及活性降低导致毛囊细胞分化能力减弱而影响毛发的再生循环，导致毛囊闭合而形成永久性脱发。治疗脱发的主要方法包括洗疗护理、药物治疗、激光生发、植发等。洗疗护理主要以生发液或生发剂等外用产品刺激头皮并促进头皮血液循环，促进头部供血、头部营养和头发生长，但存在生发及防脱发不佳，且对受损毛囊、休眠毛囊无效等缺陷。药物治疗包
括口服药物(如非那雄胺、螺内酯、VB2、VB6、丹参酮胶囊、复方甘草酸苷片、白芍总苷胶囊等)和外用药物(如米诺地尔溶液、哈西奈德溶液、二硫化硒洗剂等)，但存在治疗脱发效果不佳、副作用较大、药物依赖性等缺陷。激光生发利用波长为670nm的低能量激光照射，增强细胞活性、加速血液微循环、增加头部供血及营养等，促进头发汲取营养成分，提高毛母细胞及毛囊干细胞活力，加速蛋白质的合成、激活毛囊等功效，但存在生发缓慢且价格昂贵等缺陷。植发需要手术选取患者后枕部及两颞部毛囊作为发源，将采集的毛囊分离成单株毛囊或多株毛囊后，再通过精细的显微外科手术把单株毛囊或多株毛囊移植到需要移植的脱发部位，使得新移植的单株毛囊或多株毛囊在新的植发部位存活和生长，进而修补局部毛发的分布及分布密度。虽然植发技术可解决毛囊完全闭合问题，但存在受可移植部位及毛囊资源有限的限制，且植发手术比较痛苦、存在感染风险、新移植毛囊存活率没有保障、无法解决受损毛囊修复问题、移植手术部位留下疤痕而影响美观、价格昂贵等缺陷。为此，临床急需生发效果和防脱发效果更佳、疗效确切、安全有效的生发组合物。
[0008]细胞及微生物受到外界刺激及外源应激物(包括冷、热、酸、碱、电流、辐射、化学物质等)应激诱导时会因应激反应而诱导细胞及微生物产生应激蛋白。文献1(New limonophyllines A
‑
Cfrom the stem of Atalantia monophylla and cytotoxicity against cholangiocarcinoma and HepG2 cell lines，Arch.Pharm.Res.(2018)41:431
–
437)公开了从芸香科植物(Atalantia monophylla)提取制得的化合物1
‑
16具有抑制肿瘤细胞生长等活性。
[0009]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有自我复制和多向分化潜能，广泛存在于骨髓、脂肪、滑膜、牙髓、羊水、胎盘、脐带、胚胎、脐带血、羊膜、外周血、肌肉、尿液等组织，具有来源广泛、无需配型、感染率低、分化潜能强、增殖能力强、采集方便等特点，可产生干细胞生长因子(SCF)、神经生长因子(NGF)、白介素
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6(IL
‑
6)、白介素
‑
7(IL
‑
7)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)等活性因子，参与调节细胞生长、细胞凋亡、细胞分化、抗病毒、免疫成熟等过程，可用于免疫调节、组织修复及治疗急性肺损伤、重症肺炎、急性呼吸窘迫综合征等疾病。但MSCs产品需在其生产、储运和应用等环节采用冷藏方式，且其细胞活力保持≤12h，而限制其治疗应用。为此，需要开发安全有效的毛囊修复药物以满足临床需求。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于提供一种毛囊修复蛋白组合物，其制备包括下述步骤：
[0011](1)在本专利技术的细胞蛋白提取物中加入20U/mL
‑
35U/mL的核酸酶或全能核酸酶的任一种或其组合，将其置于37℃
±
1℃条件下酶解15min
‑
40min，制得酶解液；
[0012](2)在2℃
‑
8℃条件下，将步骤(1)制得的酶解液用洗脱溶剂配置成5
‑
15mg/ml，过色谱柱，洗脱流速为0.1
‑
1ml/min，监测并收集紫外波长为280nm的洗脱部位，其中，洗脱溶剂由50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)中含300mmol/L氯化钠组成。
[0013]本专利技术的优选技术方案中，所述蛋白提取物的制备包括如下步骤：
[0014]S
‑
1:将密度为5.0
×
106个/mL
‑
1.0
×
107个/mL的间充本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毛囊修复蛋白组合物，其制备包括下述步骤：(1)在细胞蛋白提取物中加入20U/mL
‑
35U/mL的核酸酶或全能核酸酶的任一种或其组合，将其置于37℃
±
1℃条件下酶解15min
‑
40min，制得酶解液；(2)在2℃
‑
8℃条件下，将步骤(1)制得的酶解液用洗脱溶剂配置成5
‑
15mg/ml，过色谱柱，洗脱流速为0.1
‑
1ml/min，监测并收集紫外波长为280nm的洗脱部位，其中，洗脱溶剂由50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)中含300mmol/L氯化钠组成。2.如权利要求1所述的毛囊修复蛋白组合物，所述细胞蛋白提取物的制备包括如下步骤：S
‑
1:将密度为5.0
×
106个/mL
‑
1.0
×
107个/mL的间充质传代细胞置于含有DMEM/F12 40
‑
50％、RPMI 1640 40
‑
50％、牛血清蛋白(BSA)0.1
‑
2％、表皮细胞生长因子(EGF)1
‑
15ug/mL、成纤维细胞生长因子(FGF)1
‑
15ug/mL、胰岛素转铁蛋白1
‑
15ug/mL、复方氨基酸(18AA)0.01
‑
0.1％和2
‑
10μmol/L应激物的培养基中，再将其置于37.0℃
±
0.5℃、5％
±
1.0％CO2条件下培养10
‑
60min后，分离，洗涤，收集细胞，其中，所述的应激物选自化合物1
‑
16的任一种或其组合，
S
‑
2:将收集细胞按照密度为5.0
×
106个/mL
‑
5.0
×
107个/mL分散于溶剂中，再将其置于2℃
‑
8℃条件下超声处理，制得细胞裂解液，其中，所述溶剂选自选...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宇，高文勇，陈琳，李建军，
申请(专利权)人：北京达尔文细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：