用于治疗阿兹海默症的医药组合物制造技术

本发明专利技术提供一种用于治疗阿兹海默症的医药组合物，其至少包含有细胞外囊泡，且所述细胞外囊泡的制备方法如下：第一培养步骤：将脂肪间质干细胞以6,000～15,000个细胞/cm2的细胞密度在一第一培养基中扩增培养，直到所述脂肪间质干细胞的扩增数量为培养前的90％以上；第二培养步骤：将扩增后的所述脂肪间质干细胞以10,000～100,000个细胞/cm2的细胞密度在一第二培养基中培养20～30小时；细胞外囊泡分离步骤：收集所述培养液并利用切向流过滤法(TFF)或超滤法从所述培养液中分离出所述细胞外囊泡。外囊泡。外囊泡。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗阿兹海默症的医药组合物


[0001]本专利技术关于一种用于治疗阿兹海默症的医药组合物，特别是关于一种具有能够高度表达脑啡肽酶、miR
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29a、及/或miR
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29b的表现型间质干细胞及/或所述高表现型间质干细胞所衍生的细胞外囊泡的医药组合物。

技术介绍

[0002]类淀粉蛋白沉积(amyloidosis)是一种后天或遗传性疾病，由各种组织中β折迭纤维状蛋白聚集体(beta
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sheet fibrillar protein)的异常沉积引起。类淀粉蛋白沉积(amyloidosis)分类为原发型淀粉样变(Primary amyloidosis,AL)、次要型淀粉样变(Secondary amyloidosis,AA)、遗传性淀粉样变(Hereditary amyloidosis,ATTR)、原发型淀粉样变(AL amyloidosis)。这种疾病可以是局部的或全身性的，淀粉样蛋白(amyloid)在神经、肝脏、肾脏、脾脏和血管等不同器官中积聚，引起不同临床症状，包含家族性淀粉样多发性神经病(familial amyloid polyneuropathy)、腱鞘炎(tenosynovitis)、家族性淀粉样变性(familial amyloidosis)、颅神经疾病(cranial nerve disease)、遗传性脑出血(hereditary cerebral hemorrhage)、遗传性海绵状脑病(heredity spongiform encephalopathy)、肾病(chronic dialysis disease)、耳聋、荀氏麻疹、四肢痛、心肌病、皮肤锯齿症、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)、骨髓瘤依赖性淀粉样变性(myelomatosis dependency amyloidosis)、Tiroidina骨髓癌(Tiroidina bone marrow cancer)、早期/非遗传/遗传阿兹海默症(Alzheimer
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s disease,AD)、帕金森氏症(Parkinson
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s disease)、亨丁顿氏舞蹈症(Huntington
’
s disease)、库贾氏症(Creutzfeldt
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Jakob disease)、大脑类淀粉血管病变(Cerebral Amyloid Angiopathy)、包涵体肌炎(inclusion body myositis)、黄斑变性(macular degeneration)、轻度认知障碍或轻度或中度认知障碍(mild cognitive damage or mild or moderate cognitive impairment)、与年龄相关的认知退化(the cognitive deterioration relevant with the age)、唐氏综合症(Down's syndrome)、糖尿病(diabetes)、血管性痴呆(vascular dementia)、老年性痴呆(senile dementia)、AA型淀粉样变性(AA amyloidosis)、AL型淀粉样变性(AL amyloidosis)、血液透析相关性淀粉样变性或遗传性脑出血(hemodialysis
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associated amyloidosis or heredity cerebral hemorrhage)等。
[0003]阿兹海默症(Alzheimer
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s disease,AD)是一种最常见的神经退行性疾病会导致一系列表型，包括记忆力减退和其他认知障碍，最终甚至会导致死亡。2020年全球约有5,000万人受到痴呆症的影响，预计于2050年将影响1.35亿人。阿兹海默症主要病理特征是细胞外淀粉样蛋白(beta amyloid,Aβ)斑块聚集和细胞内Tau蛋白过度磷酸化形成神经原缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)，导致突触丧失(synaptic loss)、皮质(cortex)和海马体神经元(hippocampus)通讯中断以及神经元死亡，进而影响记忆和学习能力受损。目前尚无有效的治疗手段或药物能够抑制淀粉样蛋白沉积(Aβdeposition)、神经元死亡及记忆
力减退和认知障碍。
[0004]现今以减少神经炎症(reducing neuroinflammation)、氧化压力(oxidative stress)或给予生长因子来调节小胶质细胞(microglia)功能进行神经保护(neuroprotection)。然而，这些策略未能同时发挥神经保护和神经发生诱导功效(neurogenesis
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inductive efficacy)。此外，血脑屏障(blood
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brain barrier,BBB)会阻碍神经保护剂(neuroprotective agents)进入中枢神经系统(central nervous system,CNS)。近年研究发现间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)为治疗中枢神经系统疾病新选择。MSCs可以归巢于损伤区域，并能分化为功能细胞直接替换受损细胞。同时，MSCs具有易于分离(isolation)和扩增(expansion)、自我更新(self
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renew)、多向分化(multilineage differentiation)、低免疫原性(low immunogenicity)和免疫调节(immunoregulation)的特性；此外，MSCs移植已被证明可以减缓肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)病程(disease progression)进展，因此，推断MSCs具有治疗神经退行性疾病的潜力。
[0005]然而，MSCs的应用仍然主要受到它们从循环中快速清除以及损伤部位恶劣的微环境阻碍其生存的限制，进而发现MSCs移植只能发挥短期作用，再加上，MSCs的副作用(side effect)和安全性仍然具争议。目前研究显示MSCs主要是通过旁分泌效应(paracrine effect)发挥修复作用。MSCs会分泌多种生长因子、蛋白质、细胞激素(Cytokine)脂质讯号分子(signaling lipids)、mRNA和小分子核糖核酸(microRNA,miRNA)等生物活性分子，经由细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)携带至目标细胞(target cells)。EVs是细胞与细胞间通讯(intercellular communication)的重要媒介，并参与调控生理过程和疾病的发生。与MSCs相比，MSCs衍生的EVs(MSCs
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derived EVs)不具有功能性的核心(functional nucle本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗阿兹海默症的医药组合物，其特征在于，至少包含有细胞外囊泡，且所述细胞外囊泡的制备方法如下：第一培养步骤：将脂肪间质干细胞以6,000～15,000个细胞/cm2的细胞密度在一第一培养基中扩增培养，直到所述脂肪间质干细胞的扩增数量为培养前的90％以上；第二培养步骤：将扩增后的所述脂肪间质干细胞以10,000～100,000个细胞/cm2的细胞密度在一第二培养基中培养20～30小时；细胞外囊泡分离步骤：收集所述培养液并利用切向流过滤法(TFF)或超滤法从所述培养液中分离出所述细胞外囊泡；其中所述第一培养基包含有胎牛血清、N
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乙酰半胱氨酸、抗坏血酸磷酸酯镁和Keratinocyte
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SFM培养基；以及所述第二培养基包含有N
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乙酰半胱氨酸、抗坏血酸磷酸酯镁和Keratinocyte
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SFM培养基。2.根据权利要求1所述的治疗阿兹海默症的医药组合物，其特征在于，在所述第二培养步骤之后进一步包含有：基因转染步骤：将所述脂肪干细胞铺展在3D NEP硅芯片表面上，待细胞贴附后，使用电穿孔系统以使用25
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150V的方波脉冲电场、10ms的持续时间脉冲5
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15次的条件经由纳米通道处理或将预先添加在PBS缓冲液中的质体注入单个细胞中，培养20～30小时后进行所述细胞外囊泡分离步骤。3.根据权利要求2所述的治疗阿兹海默症的医药组合物，其特征在于，所述质体在PBS缓冲液中的浓度为在400～600ng/ml之间。4.根据权利要求1所述的治疗阿兹海默症的医药组合物，其特征在于，所述细胞外囊泡高度表达脑啡肽酶。5.根据权利要求2所述的治疗阿兹海默症的医药组合物，其特征在于，所述细胞外囊泡高度表达脑...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄奇英，蔡侑珍，庄明熙，林珀丞，
申请(专利权)人：黄奇英，
类型：发明
国别省市：