RNA编辑系统的抑制剂AcrIIIA1技术方案

本发明专利技术属于RNA编辑技术领域，具体为一种III

【技术实现步骤摘要】
RNA编辑系统的抑制剂AcrIIIA1
IPLA35
及其应用
[0001]本申请为申请日为2021年3月4日、申请号为202110241224.1且专利技术名称为“III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂AcrIIIA1及其应用”的中国专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于RNA编辑
，具体为一种III
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A型CRISPR
‑
Cas系统抑制剂AcrIIIA1
IPLA35
及其应用。

技术介绍

[0003]在过去的十年中微生物学最激动人心的发现之一是，类似于真核生物，细菌同样具有获得性免疫系统，打破了长久以来“获得性免疫是真核生物所特有的”定论。在外来入侵过程中，细菌已进化出一种新的特有的免疫防御系统，即CRISPR
‑
Cas系统(成簇规律间隔短回文重复序列及相关Cas蛋白)。CRISPR
‑
Cas系统通过捕获整合外源核酸片段，并在Cas蛋白和CRISPR RNAs(crRNA)的共同作用下保护细菌和古生菌免遭外来噬菌体、病毒和质粒的的入侵。CRISPR
‑
Cas系统已被开发用于基因编辑，应用于生物科学、医学诊断和作物育种等领域。但是由于Cas蛋白在完成对目标基因的编辑后持续激活，可导致在整个基因水平进行非特异性切割，从而造成未知后果。因此，合理控制CRISPR
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Cas的编辑活性，降低脱靶效应，是CRISPR
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Cas系统应用于基因编辑、生物治疗等迫切需要解决的科学问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂AcrIIIA1的同源蛋白AcrIIIA1
IPLA35
，本专利技术的目的之二在于提供一种含有AcrIIIA1的同源性蛋白AcrIIIA1
IPLA35
的试剂或组合物，本专利技术的目的之三在于提供所述试剂或组合物在制备抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统RNA编辑活性的药物中的应用。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]1、III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂AcrIIIA1，所述AcrIIIA1的氨基酸序列为SEQ ID NO:4。
[0006]作为优选的技术方案之一，所述AcrIIIA1的基因序列为S.argenteus 3688STDY6125118细菌中被III
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A型CRISPR
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Cas系统靶向识别的序列位点。
[0007]作为优选的技术方案之一，所述AcrIIIA1与AcrIIIA1的同源性蛋白的序列相比具有至少70％的序列同一性，并且具有与AcrIIIA1相同的生物学功能。
[0008]作为优选的技术方案之一，所述同源性蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:6，该同源蛋白为AcrIIIA1
IPLA35
。
[0009]作为优选的技术方案之一，所述AcrIIIA1或所述AcrIIIA1的同源性蛋白抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统切割RNA的活性。
[0010]2、含有AcrIIIA1和/或AcrIIIA1的同源性蛋白的试剂或组合物。
[0011]3、所述试剂或组合物在制备抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统RNA编辑活性的药物中
的应用。
[0012]本专利技术的有益效果在于：
[0013]本专利技术从Staphylococcus argenteus 3688STDY6125118细菌基因序列中筛选出抑制III
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A型CRISPR
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Cas基因编辑活性的III型抗CRISPR(Acr)抑制剂AcrIIIA1，在细菌和哺乳细胞中AcrIIIA1控制III
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A型CRISPR
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Cas基因编辑能力的“关闭”。此外，本专利技术还筛选出AcrIIIA1的同源性蛋白，并具有相同抑制效果，丰富了III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂的种类。AcrIIIA1抑制剂及其同源蛋白可以在时间或空间上控制III
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A型CRISPR
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Cas系统RNA编辑效率，提高III
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A型CRISPR
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Cas编辑技术在生物治疗、生物技术和农业等领域的安全性和实用性。
附图说明
[0014]图1为生物信息筛选与TXTL鉴定AcrIIIA基因。A为Staphylococcus argenteus3688STDY6125118含有自身crRNA识别的位点及候选AcrIIIA基因示意图；B为Transcription
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translation(TXTL)反应体系示意图；C、D为GFP荧光检测候选AcrIIIA基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统切割RNA的活性。
[0015]图2为AcrIIIA1和AcrIIIA2在细菌中抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统切割RNA的活性。A为MS2 RNA噬菌体感染宿主的噬菌斑实验的设计；B为噬菌斑实验验证候选基因orf1
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23基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统抵抗MS2 RNA噬菌体感染宿主；C为AcrIIIA1和AcrIIIA2基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统切割RNA的活性。
[0016]图3为哺乳细胞HEK293T中验证AcrIIIAs基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统编辑技术的活性。A为HEK293T细胞中建立检测AcrIIIAs基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统切割RNA活性的示意图；B为qRT
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PCR检测IAV病毒RNA表达水平评估AcrIIIA1和AcrIIIA2基因抑制III
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A型CRISPR
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Cas系统的活性效率；C为IAV病毒滴度评估AcrIIIA1和AcrIIIA2基因抑制III
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A型CRISPR
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Ca系统的活性效率。
[0017]图4为AcrIIIA1及同源性蛋白的系统进化树分析。
[0018]图5为AcrIIIA2及同源性蛋白的系统进化树分析。
[0019]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂AcrIIIA1的同源蛋白，其特征在于，所述AcrIIIA1与AcrIIIA1的同源性蛋白的序列相比具有至少70％的序列同一性，并且具有与AcrIIIA1相同的生物学功能，所述同源性蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:6。2.如权利要求1所述的III
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A型CRISPR
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Cas系统抑制剂AcrIIIA1的同源蛋白，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：林平，蒋建新，吴敏，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：