本发明专利技术提供一种对HPV18E6蛋白具有结合亲和力的多肽，以葡萄球菌A蛋白的Z结构域作为支架，将其表面氨基酸残基模拟抗体结合位点进行随机突变，通过噬菌体展示技术构建突变文库，以HPV18E6作为靶抗原对该文库进行亲和筛选，经过大量的筛选工作，最终获得了对于HPV18E6具有高度亲和力的多肽，经过深入的研究，本发明专利技术首次揭示了一种对HPV18的E6蛋白具有结合亲和力的多肽，此外本发明专利技术还提供了该多肽作为药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。
【技术实现步骤摘要】
一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽及其应用
[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体是一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽及其应用。
技术介绍
[0002]宫颈癌是全球女性第四大常见癌症，也是引起癌症死亡的第四大原因，2020年新增病例60.4万例，死亡病例34.2万例。宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染高度相关，其中最常见的是高危血清型别HPV16型和HPV18型，HPV16约占宫颈肿瘤的62 .6％，HPV18约与37%的宫颈腺癌、12%的宫颈鳞状细胞癌相关。
[0003]HPV是一种无包膜的双链DNA病毒，该病毒表达E1、E2、E4、E5、E6和E7等早期蛋白及主要和次要衣壳蛋白L1和L2等晚期蛋白，将病毒DNA整合到宿主基因组中进行病毒复制对于HPV诱导的致癌过程必不可少。病毒癌蛋白E6和E7引起的基因组不稳定可能是引发整合的关键因素，其加速了病毒基因组和宿主DNA双链断裂的发生。值得注意的是，HPV18E6作为一种非细胞癌蛋白，在正常细胞中不表达；E6蛋白主要通过与细胞泛素连接酶（E6AP）结合导致抑癌基因P53降解，阻滞细胞周期停滞或细胞凋亡，也会导致 DNA损伤增加和端粒酶活化有助于永生化和癌症发展。因此，HPV18E6癌蛋白是HPV18相关肿瘤分子诊断和靶向治疗的理想靶点之一。
[0004]目前，宫颈癌主要通过HPV DNA的检测来诊断分型，但其诊断特异性较差。早期宫颈癌预后良好，可以通过手术、放化疗或综合治疗方式治愈，晚期宫颈癌主要通过局部放化疗的治疗手段来提高患者的5年生存率。因此，特异性好的诊断方法及新的治疗方案的研究很有必要。
[0005]基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗HPV感染及其相关肿瘤的新药物或新方法，以改善目前临床现状。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽及其应用。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽，该多肽是以葡萄球菌A蛋白Z结构域的氨基酸序列作为骨架，进行12
‑
20个氨基酸变异后获得的多肽，所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2
‑
4任一所示。
[0008]在一个优选例中，所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽与HPV18E6蛋白相互作用的KD值为1
×
10
‑3M至1
×
10
‑6M。
[0009]在本专利技术的另一方面，提供HPV18E6的一种靶向性分子，所述的靶向性分子包括前面任一所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物，所述的偶联物包括但不限于：半胱氨酸残基，或多肽标签，或抑制HPV18E6的药物，或可检测标记物，该可检测标记物包括但不限于：荧光标记、酶、生物素或放射性同位素。
[0010]在本专利技术的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，其编码前面任一所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽。
[0011]在本专利技术的另一方面，提供一种多核苷酸，其编码所述的靶向HPV18E6的靶向性分子，且其中所述的偶联物是肽，所述的多肽标签包括但不限于：His标签，HA标签，Myc标签，Flag标签。
[0012]在本专利技术的另一方面，提供一种重组载体，该载体包含所述的多核苷酸。
[0013]在本专利技术的另一方面，提供一种宿主细胞，该宿主细胞包含所述的重组载体，或其包含有或基因组中整合有所述的多核苷酸。
[0014]在本专利技术的另一方面，提供所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽或所述的靶向HPV18E6的靶向性分子的用途，用于制备治疗HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤的药物；或用于制备检测HPV18E6病毒感染的检测试剂；或用于制备诊断HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤的诊断试剂。
[0015]在本专利技术的另一方面，所述的靶向HPV18E6的靶向性分子中，所述的偶联物是抑制HPV18E6病毒的药物或抗肿瘤药物，所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽或所述的靶向HPV18E6的靶向性分子用于治疗HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤。
[0016]在另一优选例中，所述的靶向HPV18E6的靶向性分子中，所述的偶联物是可检测标记物，如荧光标记或酶，所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽或所述的靶向HPV18E6的靶向性分子用于诊断HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤。
[0017]在本专利技术的另一方面，提供一种药物组合物，其包含前面所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽或所述的靶向HPV18E6的靶向性分子；和药学上可接受的载体。
[0018]在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤的药盒，所述的药盒中包括：所述的对HPV18E6蛋白的靶向性分子和检测靶向性分子的检测试剂，所述靶向性分子包括多肽标签或者可检测标记物。
[0019]在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断HPV18E6病毒感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤的药盒，所述的药盒中包括：所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽，或所述的靶向HPV18E6的靶向性分子，或所述的药物组合物。
[0020]在一个优选例中，还包括有对HPV18E7蛋白具结合亲和力的多肽。
[0021]在一个优选例中，所述HPV18E6表达阳性肿瘤包括：宫颈癌、头颈部肿瘤或外生殖器肿瘤。
[0022]本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而下面结合说明书附图和具体实施方式对本专利技术做进一步介绍。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，根据这些附图获得其他的附图仍属于本专利技术的范畴。
[0024]图1、各Z
HPV18E6
以及Z
WT
序列的对比；
图2、HPV18 E6重组蛋白的SDS
‑
PAGE检测和WesternBLot鉴定（A. HPV18E6重组蛋白质粒图谱；B. HPV18E6重组蛋白SDS
‑
PAGE凝胶电泳结果。M:ProteinMarker;1:E.coLi.BL21(DE3) ; 2:pET21a(+)/E.coLi.BL21(DE3) ; 3:pET21a(+) /HPV18E6/E.coLi.BL21(DE3)诱导前；4.pET21a(+)/HPV18E6/E.coLi.BL21(DE3)诱导后 ; 5.纯化后pET21a(+)/HPV18E本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽，其特征在于：所述多肽是以葡萄球菌A蛋白Z结构域的氨基酸序列作为骨架，进行12
‑
20个氨基酸变异后获得的多肽，所述多肽的氨基酸序列选自：SEQ ID NO：2
‑
4任一所示的序列。2.根据权利要求1所述的一种对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽与HPV18E6蛋白相互作用的KD值为1
×
10
‑3M至1
×
10
‑6M。3.一种靶向HPV18E6蛋白的靶向性分子，其特征在于，所述的靶向性分子包括权利要求1或2任一所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物，所述的偶联物包括：半胱氨酸残基，和/或多肽标签，和/或可检测标记物，和/或抑制HPV18E6病毒的药物，和/或抗肿瘤药物。4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，多核苷酸为编码权利要求1或2所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽的多核苷酸。5.一种多核苷酸，其编码所述的靶向HPV18E6的靶向性分子，且其中所述的偶联物是肽，肽为 His标签，或HA标签，或Myc标签，或Flag标签。6.一种重组载体，其特征在于，该载体包含权利要求4或5所述的多核苷酸。7.一种宿主细胞，其特征在于，该宿主细胞包含权利要求6所述的重组载体，或其包含有基因组中整合有权利要求4或5所述的多核苷酸。8.根据权利要求1所述的对HPV18E6蛋白具结合亲和力的多肽或权利要求3所述的一种靶向HPV18E6蛋白的靶向性分子的用途，其特征在于，用于制备治疗HPV18E6感染疾病或HPV18E6表达阳性肿瘤的药物；或用于制备检测HP...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽芳，朱珊丽，陈俊，李文姝，张静，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。