一种酵母发酵液中麦角甾醇的测定方法技术

本发明专利技术属于检测分析技术领域，涉及一种酵母发酵液中麦角甾醇的测定方法。所述方法包括如下步骤：(1)向所述酵母发酵液中加入萃取溶剂、以及内标，混匀；(2)依次进行旋涡震荡、超声、离心，取上层有机相待测；(3)利用气相色谱质谱联用技术对上述得到的有机相进行检测分析；其中，所述萃取溶剂为正丁醇；所述气相色谱所用的色谱柱为HP

【技术实现步骤摘要】
一种酵母发酵液中麦角甾醇的测定方法


[0001]本专利技术属于检测分析
，涉及一种酵母发酵液中麦角甾醇的测定方法。

技术介绍

[0002]中国白酒酿造过程是一个多菌种的混合发酵过程，据报道，在酱香型白酒酿造过程中发现的微生物有细菌、酵母菌和丝状真菌等，数量高达上千种。其中就有能产麦角甾醇的酵母菌、曲霉等菌株。麦角甾醇又称麦角固醇，可促进人体钙、磷吸收，还可用于“可的松”、“激素黄体酮”等产品的生产。目前，麦角甾醇工业化生产主要是微生物合成与化学合成。在化学合成途径上，因甾体化合物分子含有不对称中心,合成步骤多,难度大，成本高昂。所以国内外麦角甾醇的生产主要采用微生物发酵途径。我国研究麦角甾醇机能的时间较迟，生产工艺相对落后，年产量不能满足消费者的需求，而且我国对麦角甾醇的需求量呈逐年上升的趋势。
[0003]目前，已报到的提取分析麦角甾醇的方法有中国专利《CN112390842A》、《CN109633014A》等，但这些方法需经皂化加热回流、萃取、柱层析、衍生化、氮吹浓缩等，方法步骤繁琐、耗时，而且使用大量有机溶剂，废液处理会造成环保压力。《中国专利CN111870566A》报道了一种从酿酒酵母中提取麦角甾醇并用HPLC检测的方法，然而该方法需额外采购酿酒酵母菌，收集湿菌体后需离心、皂化、细胞破碎，再用外标法定量，提取和检测步骤繁琐、耗时长。
[0004]因此，本专利技术旨在提供一种对酵母发酵液中麦角甾醇进行快速测定的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种对酵母发酵液中麦角甾醇进行快速测定的方法。
[0006]一方面，本专利技术提供了一种酵母发酵液中麦角甾醇活性物质的测定方法，所述方法包括如下步骤：
[0007](1)向所述酵母发酵液中加入萃取溶剂、以及内标，混匀；
[0008](2)依次进行旋涡震荡、超声、离心，取上层有机相待测；
[0009](3)利用气相色谱质谱联用技术对上述得到的有机相进行检测分析；
[0010]其中，所述萃取溶剂为正丁醇；所述气相色谱所用的色谱柱为HP
‑
5毛细管色谱柱(30m
×
0.25mm，0.25μm)。
[0011]在一些实施方案中，以体积比计，所述萃取溶剂与所述酵母发酵液的添加比例为1
‑
5:5
‑
15；优选地，以体积比计，所述萃取溶剂与所述酵母发酵液的添加比例为3
‑
4:8
‑
12。
[0012]在一些实施方案中，所述酵母发酵液的添加量为8ml
‑
12ml；所述萃取溶剂的添加量为1
‑
3ml。
[0013]在一些实施方案中，所述旋涡振荡的时间为1
‑
10min；优选地，所述旋涡振荡的时间为1
‑
5min。
[0014]在一些实施方案中，所述超声的时间为5
‑
30min；优选地，所述超声的时间为10
‑
20min；优选地，所述超声的时间为12
‑
17min。
[0015]在一些实施方案中，所述离心的条件为：转速为4000
‑
8000r/min，离心2
‑
8min。
[0016]在一些实施方案中，所述色谱条件为：升温程序：50
‑
70℃保持8
‑
12min，18
‑
22℃/min升至250
‑
350℃，保持15
‑
25min；进样口温度250
‑
350℃，载气为氦气，流速0.5
‑
2.0mL/min，不分流进样，进样量0.5
‑
3μL。
[0017]在一些实施方案中，所述色谱条件为：升温程序：58
‑
62℃保持10min，20℃/min升至280
‑
320℃，保持18
‑
22min；进样口温度280
‑
310℃，载气为氦气，流速0.8
‑
1.2mL/min，不分流进样，进样量0.8
‑
1.2μL。
[0018]在一些实施方案中，所述质谱条件为：电子轰击电离源，电子能量为60
‑
80eV，离子源温度200
‑
250℃，四级杆温度120
‑
170℃，溶剂延迟：5.0min，采集模式为全扫描，扫描范围m/z 35～350amu。
[0019]在一些实施方案中，所述质谱条件为：电子轰击电离源，电子能量为70eV，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，溶剂延迟：5.0min，采集模式为全扫描，扫描范围m/z 35～350amu。
[0020]在一些实施方案中，所述酵母发酵液为将酵母菌株接种至液体培养基中发酵培养得到；所述酵母菌株分离至酒糟中。
[0021]在一些实施方案中，所述酵母菌株包括酿酒酵母和/或毕赤酵母。
[0022]在一些实施方案中，所述液体培养基为：葡萄糖10
‑
30g/L，蛋白胨15
‑
30g/L，酵母膏5
‑
15g/L，余量为超纯水，pH 3.2
±
0.5，该pH为自然pH，无需通过酸碱调配。
[0023]综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：
[0024](1)本专利技术提供了一种快速、准确测定酵母发酵液中麦角甾醇物质的方法。分析步骤简单，无需衍生，也不用加入强碱、强酸等腐蚀性液体，有效缩短了检测时间，且提高了方法的安全性、经济性、环保性。
[0025](2)所需样品量少：相较于现有技术，采用本专利技术所提供的方法，发酵液样品用量只需10mL，提取溶剂用量只需2mL，就可以达到较好的效果。
[0026](3)较短的分析时间：相较于现有技术，采用本专利技术所提供的方法，对发酵液样品样品中的麦角甾醇进行定性定量的过程耗时不到1h，大大缩短了分析时间。
[0027](4)更精简的前处理步骤：相较于现有技术公开的对样品中的麦角甾醇物质进行分析测定的方法中，大多需要采用皂化加热、衍生化处理才能达到相应的分析检测效果相比较，本专利技术采用了更简单的前处理步骤，无需皂化加热、也无需衍生化，更不用加入强碱、强酸等腐蚀性液体，却达到更好的检测精度，具有较好的灵敏度以及准确度，可以实现对较低目标物含量样品的分析检测。
[0028](5)相较于现有技术，本专利技术采用气相色谱质谱联用仪对前处理后的发酵液样品中的麦角甾醇进行检测分析的技术方案中，采用HP
‑
5色谱柱以及所使用的这些检测参数使得发酵液样品中麦角甾醇在气质分析中的分离度更好，且没有杂峰干扰，出峰时间也适中，便于分析，且经过前期的实验探索发现，选用的不同色谱柱或者选用不同的检测参数均会对最终发酵液中麦角本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酵母发酵液中麦角甾醇活性物质的测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)向所述酵母发酵液中加入萃取溶剂、以及内标，混匀；(2)依次进行旋涡震荡、超声、离心，取上层有机相待测；(3)利用气相色谱质谱联用技术对上述得到的有机相进行检测分析；其中，所述萃取溶剂为正丁醇；所述气相色谱所用的色谱柱为HP
‑
5毛细管色谱柱(30m
×
0.25mm，0.25μm)。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以体积比计，所述萃取溶剂与所述酵母发酵液的添加比例为1
‑
5:5
‑
15；优选地，以体积比计，所述萃取溶剂与所述酵母发酵液的添加比例为3
‑
4:8
‑
12。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母发酵液的添加量为8ml
‑
12ml；所述萃取溶剂的添加量为1
‑
3ml。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述旋涡振荡的时间为1
‑
10min；优选地，所述旋涡振荡的时间为1
‑
5min。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声的时间为5
‑
30min；优选地，所述超声的时间为10
‑
20min；优选地，所述超声的时间为12
‑
17min。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的条件为：转速为4000
‑
8000r/min，离心2
‑
8min。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱条件为：升温程序：50
‑
70℃保持8
‑
12min，18
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李永素，王莉，杨玉波，杨帆，王国峥，任清凡，汪婷婷，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：