一种黑色素前体含量的测定方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种黑色素前体含量的测定方法及应用，该测定方法为高效液相色谱法，通过对植物或食用菌进行提取后，加入异抗坏血酸钠、酒精制备得到供试品，色谱条件设置为C18色谱柱，流动相为甲醇、乙腈、含有0.5％甲酸

【技术实现步骤摘要】
一种黑色素前体含量的测定方法及应用


[0001]本专利技术属于色谱
，具体涉及一种黑色素前体含量的测定方法及应用。

技术介绍

[0002]黑色素包括真黑色素和褐色素，两者都是由酪氨酸酶氧化酪氨酸形成的多巴醌转化而来的，其中，褐色素是在谷胱甘肽与半胱氨酸的参与下由多巴醌进一步转化而来；真黑色素则是通过5,6
‑
二羟基吲哚羧酸(5,6
‑
dihydroxyindole
‑2‑
carboxylic acid,DHICA)和5,6
‑
二羟基吲哚(5,6
‑
dihydroxyindole,DHI)两条途径合成。
[0003][0004]一些植物或食用菌类提取物中含有丰富的黑色素前体物质，对其中黑色素前体物质含量的检测，成为该类产品的生产和应用过程中的重要技术点。
[0005]与本专利技术最接近的实现方案为专利CN111089923A中提出了一种5,6
‑
二羟基吲哚羧酸的提取和检测方法，包括如下步骤：将动物组织置于离心管中，加入盐酸，匀浆，离心分离，取上清液，沉淀重复提取，合并两次所得上清液，再次离心分离，取上清液经过滤膜过滤，即得样品。利用C18色谱柱实施分离，并利用紫外可见吸收检测器进行定量分析；色谱条件为：流动相由甲醇、乙腈和0.3％～0.5％的甲酸水组成，三者的体积比为50∶15∶35；流速为0.8～1mL/min；柱温为30℃；检测波长为310nm；样品的进样量为15～20μL，该方法应用于动物组织中提取黑色素提取物质，由于液相检测精密度和灵敏度高等特性，该方法用于植物中该类物质的检测难以达到标准，因此该专利方法并不适用于植物对象。另外，金睿明等人研究了黑色素前体5,6
‑
二羟基吲哚的生物
‑
化学合成方法，其对该黑色素前体的合成产率进行了研究和对比，并进行了液相检测，但是该方法的研究对象并非为植物，因此，该方法并不适用于对于植物中的黑色素前体物质的生产和应用(金睿明,穆晓清,徐岩.生物
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化学法合成黑色素前体5,6
‑
二羟基吲哚[J].高等学校化学学报,2022(008):04)。
[0006]综上所述，基于目前现有技术中很少对黑色素前体物质及其含量检测方法的开发，尤其是对于植物或菌类中黑色素前体物质及其含量的测定方法，提供一种对植物或菌类提取物中黑色素前体含量的精确定量方法和低成本的开发方法，对黑色素前体及该类物质的生产和应用有显著的意义。

技术实现思路

[0007]针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种黑色素前体含量的测定方法及应用，本专利技术的测定方法对植物或食用菌中的黑色素前体物质的分离效果好，对该类物质的生产和应用具有重要的指导作用。
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种黑色素前体含量的测定方法，包括以下步骤：
[0009]S1、供试品制备
[0010]取植物或食用菌提取物，加入异抗坏血酸钠，摇匀得到混合液，然后向混合液中加入酒精，震荡混匀，室温静置，然后过滤，取滤液进行离心，取上清液备用；
[0011]S2、对照品制备
[0012]使用标准品为上海舒盟医药科技有限公司采购的5,6二羟基吲哚(DHI)标准品，以及5,6二羟基吲哚羧酸(DHICA)标准品，分别加入酒精溶解配置成浓度为1mg/ml的DHI以及浓度为1mg/ml的DHICA作为对照品，过滤，取上清液备用；
[0013]S3、高效液相色谱检测
[0014]所述高效液相色谱仪设置参数为：
[0015]检测样品：供试品、对照品
[0016]色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm；
[0017]流动相：甲醇、乙腈、含有0.5％甲酸的水溶液三者的体积比为30:10:60的混合液；
[0018]流速：1mL/min；
[0019]检测波长：300nm；
[0020]柱温：35℃
±
1℃；
[0021]进样量：5μL～7.5μL。
[0022]进一步地，所述步骤S1中植物或食用菌提取物的制备步骤为：将植物或食用菌洗净，预冷，捣碎，加入聚乙烯吡略烷酮，加入磷酸缓冲液匀浆、过滤，向浆液中加入硫酸铵，离心，取上清液再次加入硫酸铵，定容，保存备用。
[0023]进一步地，所述植物选自含有黑色素前体物质的蔬菜或水果，但不局限与于所述植物种类以及食用菌类。
[0024]进一步地，所述聚乙烯吡略烷酮的添加质量为植物的1～5％。
[0025]进一步地，所述磷酸缓冲液的添加量为100～200mL，浓度为0.1mol/L。
[0026]进一步地，所述硫酸铵的添加量为使得浆液饱和度控制在25～35％。
[0027]进一步地，所述离心转速为6000～10000r/min，离心时间5～15min。
[0028]进一步地，所述步骤S1中异抗坏血酸钠添加量为提取物质量的0.05～0.2％。
[0029]进一步地，所述步骤S1中酒精质量分数为95％，添加量为混合液体积的3～10倍。
[0030]进一步地，所述步骤S1中离心转速为3000～5000rpm，离心时间为5～15min。
[0031]第二方面，本专利技术还提供了一种所述的黑色素前体含量的测定方法在包括但不局
限于食品、化妆品、药品领域中的应用，如兽药、饲料等领域。
[0032]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0033](1)本专利技术开发出了针对植物或食用菌提取物中黑色素前体含量的测定方法，克服了目前现有技术中仅对动物组织中的黑色素前体的测定局限性，且本专利技术的测定方法通用于植物或食用菌提取物或产品。
[0034](2)本专利技术的测定方法中采用特定的前处理和液相检测的条件，显著提高了测定植物或食用菌提取物产品中的黑色素前体含量的精度和稳定性，且重复性高，分离效果好，对于该类物质的产品生产和应用有重要的指导作用。
附图说明
[0035]图1为5,6二羟基吲哚(DHI)对照品的高效液相色谱图。
[0036]图2为5,6二羟基吲哚羧酸(DHICA)对照品的高效液相色谱图。
[0037]图3为实施例1马铃薯提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0038]图4为实施例1马铃薯提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0039]图5为实施例2苹果提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0040]图6为实施例3蘑菇提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0041]图7为对比例1马铃薯提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0042]图8为对比例2马铃薯提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
[0043]图9为对比例3马铃薯提取物中黑色素前体含量的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0044]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黑色素前体含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、供试品制备取植物或食用菌提取物，加入异抗坏血酸钠，摇匀得到混合液，然后向混合液中加入酒精，震荡混匀，室温静置，然后过滤，取滤液进行离心，取上清液备用；S2、对照品制备称取5,6二羟基吲哚标准品和5,6二羟基吲哚羧酸标准品，加入酒精溶解，过滤，取上清液备用；S3、高效液相色谱检测所述高效液相色谱仪设置参数为：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇、乙腈、含有质量分数为0.5％甲酸的水溶液三者的体积比为30:10:60的混合液；流速：1mL/min；检测波长：300nm；柱温：35℃
±
1℃；进样量：5μL～7.5μL。2.根据权利要求1所述的黑色素前体含量的测定方法，其特征在于，所述步骤S1中植物或食用菌提取物的制备步骤为：取将植物或食用菌洗净，预冷，捣碎，加入聚乙烯吡略烷酮，加入磷酸缓冲液匀浆、过滤，向浆液中加入硫酸铵，离心，取上清液再次加入硫酸铵，定容，保存备用。3.根据权利要求2所述的黑色素前体含量的测定方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛俊，张然，钟佩群，
申请(专利权)人：珠海丝彩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：