一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒制造技术

本申请公开了一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒，该试剂盒包括磁性微球，磁性微球包被有FCAR蛋白；抗人免疫球蛋白，抗人免疫球蛋白标记有化学发光物质。FCAR可以选择性结合带有IgA片段的IgA免疫复合物，因此，以其构建检测体系，当样品中含有对应的IgA免疫复合物时，磁性微球上的FCAR蛋白与IgA免疫复合物发生特异性结合，而抗人免疫球蛋白进一步与FCAR蛋白结合，从而可以直接根据化学发光物质的发光结果进行检测。该方法能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成对IgA免疫复合物的检测，这种检测试剂盒的检测灵敏度可以达到0.31ng/ml，相对于传统的IgA免疫复合物的检测方法灵敏度至少提高了10倍。物的检测方法灵敏度至少提高了10倍。物的检测方法灵敏度至少提高了10倍。

【技术实现步骤摘要】
一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒


[0001]本申请涉及免疫检测
，尤其是涉及一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒。

技术介绍

[0002]在人体自身免疫反应过程中，人体免疫球蛋白A(IgA)参与时，IgA与病原体结合启动免疫反应，下游抗体IgG与IgM，补体通路的C3补体等分子的参与形成IgA
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IgG，IgA
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IgM，IgA
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C3，IgA
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IgG
‑
IgM等，统称IgA复合物。在正常免疫反应过程中，这些结合了病原体的复合物一般被免疫系统清除，比如被巨噬细胞吞噬等。IgA免疫反应异常时，IgA复合物无法被免疫系统有效清除，使其在血液循环系统及泌尿系统长期滞留，从而导致两种疾病：IgA复合物在肾脏的沉积与滞留导致IgA肾病(IgA Nehphropathy，IgAN)；IgA复合物在血管的沉积导致紫癜，通常称为过敏性紫癜(Henoch
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Schonlein purpura，HSP)，或者IgA血管炎(IgAV)。
[0003]前期研究过程中已经发现，血清/血浆中的IgA免疫复合物的浓度与检测者罹患上述两种疾病有着密切的关联。因此，有望通过结合检测者上述样本中的IgA免疫复合物的浓度来对上述两种疾病进行更有效的诊断。对于IgA免疫复合物的测定，目前主要在实验室中开展了基于酶联免疫吸附法(ELISA)的相关实验，这种方法需要手动操作、过程繁琐、费力耗时，而且准确率因人而异难以保证。此外，在综合考虑实验成本时经济方面存在一定的不合理性。因而有必要提供一种能够有效解决上述问题的IgA免疫复合物的检测产品。

技术实现思路

[0004]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒，利用该试剂盒能够快速高效稳定准确地对IgA免疫复合物进行检测。
[0005]本申请的第一方面，提供一种基于化学发光法检测IgA免疫复合物的试剂盒，该试剂盒包括：
[0006]磁性微球，磁性微球包被有FCAR蛋白；
[0007]抗人免疫球蛋白，抗人免疫球蛋白标记有化学发光物质。
[0008]根据本申请实施例的试剂盒，至少具有如下有益效果：
[0009]FCAR为免疫球蛋白基因超家族成员，编码IgA Fc区受体，参与人体自身免疫反应。该蛋白可以选择性结合带有IgA片段的IgA免疫复合物，因此，以其构建检测体系，当样品中含有对应的IgA免疫复合物时，磁性微球上的FCAR蛋白与IgA免疫复合物发生特异性结合，而抗人免疫球蛋白进一步与FCAR蛋白结合，从而可以直接根据化学发光物质的发光结果进行检测。该方法能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成对IgA免疫复合物的检测，这种检测试剂盒的检测灵敏度可以达到0.5ng/ml，相对于传统的IgA免疫复合物的检测方法灵敏度至少提高了10倍。
[0010]以IgA慢性肾病为例，其诊断的金标准为肾穿刺，肾穿刺后进行的病理分析一方面通过显微镜评估组织切片上的病变形状与程度；另一方面进行组织切片免疫生化分析，通过荧光染色确定IgA复合物是否在组织切片上沉积，从而确诊IgA肾病。免疫系统的异常使IgA免疫复合物无法被免疫系统有效清除，导致其在肾脏沉积，引起肾脏局部免疫反应导致炎症。而这些无法被有效清除的IgA免疫复合物还一直在血液循环系统中流动，因而血液中的IgA免疫复合物异常升高为IgA肾病最直接的风险因素，有望通过对血清学IgA免疫复合物的检测来评估这一风险。
[0011]目前的酶联免疫吸附方法多以专用的微孔板作为包被用具和反应容器，在使用时只能分成若干批次或整板一次使用，无法进行独立、单人份的检测；而且在定量测定的所用的试剂种类繁多，加注试剂的操作也极为繁琐；检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确度；检测过程多采用手工操作，容易造成加量误差，准确度和精密度较差；而且存在着不够经济合理性的不足。综合上述因素，在本申请的实施方式中，开发了上述的化学发光检测IgA免疫复合物的试剂盒。
[0012]在本申请的一些实施方式中，化学发光物质选自吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺中的至少一种。可以理解的是，化学发光物质也可以是本领域所知的其它任一种可以实现化学发光的物质，例如，化学发光物质还可以是选自吖啶酯、吖啶酯衍生物、鲁米诺、鲁米诺衍生物、异鲁米诺、异鲁米诺衍生物中的至少一种。其中，吖啶酯衍生物可以是吖啶酯酸
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NHS酯、吖啶酸丙磺酸钠盐、9
‑
吖啶羧酸等其中至少一种，异鲁米诺衍生物可以是异鲁米诺(4
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氨基邻苯二甲酰肼)、N
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(4
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氨基丁基)
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N
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乙基异鲁米诺、N
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(6
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氨基已基)
‑
N
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乙基异鲁米诺、异硫氰酸异鲁米诺、N
‑
(4
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异硫氰基丁基)
‑
N
‑
乙基异鲁米诺等其中至少一种。
[0013]采用上述的化学发光物质进行直接化学发光，相比较酶促化学发光，具有比较明显的优势，主要表现在：对反应不需要催化剂，只要提供碱性环境即可进行；同时反应快速，对背景发光影响低，信噪比高，干扰因素较少；同时产品对试剂的稳定性好，可以两点或多点进行定标，反应体系简短，激发液成本相对低；此外，上述这些标记能够更容易地与蛋白质进行连接，而且连接后光子产率不会减少。
[0014]在本申请的一些实施方式中，化学发光物质选自吖啶酯或其衍生物中的至少一种。吖啶酯其同样具有上述这些化学发光物质的特性并且表现得更为优异，因而将其作为化学发光物质使用具有更突出的检测性能。采用吖啶酯等在检测时为直接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，反应过程不需要酶的参与，更加节约成本。而且，线性范围能达到0.3～500ng/ml，与传统的检测方法相比，其线性范围更宽，可以适应更大浓度范围内的直接检测。
[0015]在本申请的一些实施方式中，抗人免疫球蛋白与化学发光物质的质量比为40：(1～20)，例如可以是40：1、40：2、40：3、40：4、40：5、40：8、40：10、40：12、40：15、40：16、40：20。在其中一些实施方式中，抗人免疫球蛋白与化学发光物质的质量比为40：(1～10)、40：(1～5)、40：(1～2)、40：(2～20)、40：(5～20)、40：(8～20)。
[0016]在本申请的一些实施方式中，磁性微球为羧基化的磁性微球。在其它一些实施方式中，磁性微球也可以是甲苯酰化(Tosyl)的磁性微球，因而，磁性微球可以是羧基化的磁性微球、甲苯酰化的磁性微球中的至少一种。
[0017]在本申请的一些实施方式中，FCAR蛋白与磁性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测IgA免疫复合物的试剂盒，其特征在于，包括：磁性微球，所述磁性微球包被有FCAR蛋白；抗人免疫球蛋白，所述抗人免疫球蛋白标记有化学发光物质。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光物质选自吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺中的至少一种。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人免疫球蛋白与化学发光物质的质量比为40：(1～20)。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁性微球为羧基化的磁性微球。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述FCAR蛋白与所述磁性微球的质量比为1：(5～50)。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁性微球的粒径为0.01～2μm。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包...

【专利技术属性】
技术研发人员：方伟东，李荣华，李锐藩，
申请(专利权)人：深圳市陆为生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：