一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒制造技术

本申请公开了一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒，该试剂盒包括第一试剂，包括第一缓冲液和第一增凝剂；第二试剂，包括第二缓冲液和链霉亲和素

【技术实现步骤摘要】
一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒


[0001]本申请涉及免疫检测
，尤其是涉及一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒。

技术介绍

[0002]在人体自身免疫反应过程中，人体免疫球蛋白A(IgA)参与时，IgA与病原体结合启动免疫反应，下游抗体IgG与IgM，补体通路的C3补体等分子的参与形成IgA
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IgG，IgA
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IgM，IgA
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C3，IgA
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IgG
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IgM等，统称IgA复合物。在正常免疫反应过程中，这些结合了病原体的复合物一般被免疫系统清除，比如被巨噬细胞吞噬等。IgA免疫反应异常时，IgA复合物无法被免疫系统有效清除，使其在血液循环系统及泌尿系统长期滞留，从而导致两种疾病：IgA复合物在肾脏的沉积与滞留导致IgA肾病(IgA Nehphropathy，IgAN)；IgA复合物在血管的沉积导致紫癜，通常称为过敏性紫癜(Henoch
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Schonlein purpura，HSP)，或者IgA血管炎(IgAV)。前期研究过程中已经发现，血清/血浆中的IgA免疫复合物的浓度与检测者罹患上述两种疾病有着密切的关联。因此，有望通过结合检测者上述样本中的IgA免疫复合物的浓度来对上述两种疾病进行更有效的诊断，但目前仍然缺乏对应的检测工具对样本中的IgA免疫复合物进行有效检测。

技术实现思路

[0003]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒。利用该试剂盒能够高效准确地对IgA免疫复合物进行检测。
[0004]本申请的第一方面，提供一种基于比浊法检测IgA免疫复合物的试剂盒，该试剂盒包括：
[0005]第一试剂，所述第一试剂包括第一缓冲液和第一增凝剂；
[0006]第二试剂，所述第二试剂包括第二缓冲液和链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白。
[0007]根据本申请实施例的试剂盒，至少具有如下有益效果：
[0008]FCAR为免疫球蛋白基因超家族成员，编码IgA Fc区受体，参与人体自身免疫反应。该蛋白可以选择性结合带有IgA片段的IgA免疫复合物，因此，以其构建检测体系，当样品中含有对应的IgA免疫复合物时，两者相互结合，并在第一增凝剂的作用下，从混合有第一试剂和第二试剂所组成的反应液的液相中析出，形成微粒，使液相出现浊度。而产生的浊度通常与样品中IgA免疫复合物的浓度相关，因而可以利用该试剂盒实现对IgA免疫复合物的快速高效检测。
[0009]在本申请的一些实施方式中，链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白为FCAR蛋白通过NHS
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Biotin的NHS基团与生物素(Biotin)发生偶联，并进一步与带有四个生物素结合位点的链酶亲和素非共价偶联，形成链酶亲和素
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生物素化FCAR蛋白。在其中一些实施方式中，FCAR蛋白为重组FCAR蛋白。例如，可以是人源重组FCAR蛋白，在一些实施方式中，也可以是
其它源性的重组FCAR蛋白。
[0010]在本申请的一些实施方式中，第一增凝剂选自聚乙二醇、葡聚糖中的至少一种。
[0011]在本申请的一些实施方式中，第一增凝剂为聚乙二醇。聚乙二醇是非离子性水溶性聚合物，易溶于水，可以优化第一试剂的粘度，同时提高FCAR蛋白与IgA免疫复合物的抗原抗体结合反应作用，进一步改善检测灵敏度。
[0012]在本申请的一些实施方式中，聚乙二醇的分子量为4000～20000。例如，可以是聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、聚乙二醇10000、聚乙二醇12000、聚乙二醇14000、聚乙二醇16000、聚乙二醇18000、聚乙二醇20000中的至少一种。
[0013]在本申请的一些实施方式中，第一增凝剂为聚乙二醇8000。
[0014]在本申请的一些实施方式中，第一试剂中第一增凝剂的浓度为0.5～10wt％。例如，可以是0.5wt％、1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％。在其中一些实施方式中，第一试剂中第一增凝剂的浓度为1～8wt％，2～6wt％，3～5wt％。
[0015]在本申请的一些实施方式中，第一缓冲液和第二缓冲液分别独立自选自Hepes缓冲液、Tris
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HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种。
[0016]在本申请的一些实施方式中，第一缓冲液和第二缓冲液的pH分别独立为7～9.5。例如，第一缓冲液和第二缓冲液的pH可以分别为7、7.5、8、8.5、9、9.5。
[0017]在本申请的一些实施方式中，第一缓冲液和第二缓冲液的浓度分别独立为25～500mmol/L。例如，第一缓冲液和第二缓冲液的浓度可以分别独立为25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L、125mmol/L、150mmol/L、175mmol/L、200mmol/L、225mmol/L、250mmol/L、275mmol/L、300mmol/L、325mmol/L、350mmol/L、375mmol/L、400mmol/L、425mmol/L、450mmol/L、475mmol/L、500mmol/L。在其中一些实施方式中，第一缓冲液和第二缓冲液的浓度分别独立为25～300mmol/L，25～200mmol/L，25～100mmol/L。
[0018]在本申请的一些实施方式中，链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白为微球修饰的链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白。
[0019]在本申请的一些实施方式中，链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白为聚苯乙烯微球修饰的链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白。
[0020]在本申请的一些实施方式中，聚苯乙烯微球包括羧基、氨基、酰肼、醛基、环氧基等其中至少一种表面官能团。在其中一些具体的实施方式中，聚苯乙烯微球表面包括羧基，其很容易被EDAC活化，并且能够快速与链霉亲和素连接包被。
[0021]在本申请的一些实施方式中，聚苯乙烯微球的直径为50～600nm。
[0022]在本申请的一些实施方式中，第一试剂还包括第一稳定剂、第一防腐剂、第一保护剂，所述第二试剂还包括第二稳定剂、第二防腐剂和第二保护剂。
[0023]其中，第一稳定剂和第二稳定剂是指可以保持试剂内的电荷平衡的试剂组分。第一防腐剂和第二防腐剂是指可以抑制试剂中包括细菌在内的微生物污染的试剂组分，以此使试剂具有防腐杀菌的作用，延长其使用期限。第一保护剂和第二保护剂是指可以起到保护FCAR蛋白的活性作用的试剂组分。
[0024]在本申请的一些实施方式中，第一稳定剂选自氯盐。
[0025]在本申请的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测IgA免疫复合物的试剂盒，其特征在于，包括：第一试剂，所述第一试剂包括第一缓冲液和第一增凝剂；第二试剂，所述第二试剂包括第二缓冲液和链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一增凝剂选自聚乙二醇、葡聚糖中的至少一种；优选地，所述聚乙二醇的分子量为4000～20000；优选地，所述第一增凝剂为聚乙二醇8000。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，第一缓冲液和第二缓冲液分别独立自选自Hepes缓冲液、Tris
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HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种；优选地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的pH分别独立为7～9.5；优选地，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的浓度分别独立为25～500mmol/L。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白为聚苯乙烯微球修饰的链霉亲和素
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生物素化FCAR蛋白。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：方伟东，李荣华，李锐藩，
申请(专利权)人：深圳市陆为生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：