一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法技术

本发明专利技术涉及多肽纯化技术领域，公开了一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，步骤为：1）将卡贝缩宫素线性肽粗品进行阳离子交换层析，收集含线性肽洗脱流份；2）向步骤1）收集的含线性肽洗脱流份中加入沉淀剂，收集沉淀物；3）将沉淀物进行凝胶过滤层析，收集含线性肽的洗脱流份；4）将步骤3）收集的含线性肽的洗脱流份进行环化处理，得到卡贝缩宫素粗品溶液；5）将卡贝缩宫素粗品溶液采用反相制备液相色谱法进行纯化，收集含卡贝缩宫素的洗脱流份；6）对步骤5）收集的含卡贝缩宫素的洗脱流份进行转盐处理，得到醋酸卡贝缩宫素中间体；7）将醋酸卡贝缩宫素中间体进行旋蒸、纳滤、冻干处理，得到醋酸卡贝缩宫素纯品。本发明专利技术制备的醋酸卡贝缩宫素纯度能够达到99.9%以上，收率能够达到90.8%。收率能够达到90.8%。

【技术实现步骤摘要】
一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法


[0001]本专利技术涉及多肽纯化
，具体涉及一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法。

技术介绍

[0002]醋酸卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物，对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用，其临床和药理特性与天然产生的催产素类似。其化学结构简式如下：
[0003][0004]像催产素一样，醋酸卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血；而且在产后的早期给予醋酸卡贝缩宫素也可以促进子宫的恢复。
[0005]醋酸卡贝缩宫素结构与天然催产素的结构不同之处是其N
‑
端的环状结构：天然催产素是通过两个半胱氨酸的侧链巯基形成二硫键成环，而醋酸卡贝缩宫素将N
‑
末端的半胱酸用丁酸替代后与另一个半胱氨酸的侧链巯基形成硫醚键成环，因为硫醚键比二硫键更稳定，不易被酶降解，所以，醋酸卡贝缩宫素比天然催产素更稳定，生物活性更强。
[0006]醋酸卡贝缩宫素通常采用固相多肽合成法合成，即通过固相多肽合成法合成卡贝缩宫素线性肽，然后将醋酸卡贝缩宫素线性肽经环化处理，得到醋酸卡贝缩宫素。如中国专利CN200910106889.0公布了一种固相制备卡贝缩宫素的方法，该方案通过固相合成法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，得到卡贝缩宫素前体肽
‑
氨基树脂；用三苯基膦钯脱掉半胱氨酸侧链烯丙基保护基，加入有机碱，氯化锂，环化，裂解，纯化、冻干得到精卡贝缩宫素。
[0007]目前关于醋酸卡贝缩宫素分离纯化方面的研究报道相对较少，醋酸卡贝缩宫素的纯度最高水平也未超过99.5％，而单一杂质的含量最低仍有0.2％，工艺水平的原因限制我国醋酸卡贝缩宫素产品品质难以有一个较明显的提升，目前急需要对纯化精制工艺进行改进，以期提高产品的整体品质。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的旨在提供一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法。
[0009]为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]本专利技术第一方面提供了一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：
[0011](1)将合成的卡贝缩宫素线性肽粗品溶解，得到线性肽粗品溶液，将线性肽粗品溶液pH调节为酸性后进行阳离子交换层析处理，收集含线性肽的洗脱流份；
[0012](2)向步骤(1)收集的含线性肽的洗脱流份中加入醚类沉淀剂，固液分离，收集沉淀物；
[0013](3)将步骤(2)得到的沉淀物溶解后进行凝胶过滤层析，收集含线性肽的洗脱流份；
[0014](4)将步骤(3)收集的含线性肽的洗脱流份pH调节为碱性后进行环化处理，得到卡贝缩宫素粗品溶液；
[0015](5)将所述卡贝缩宫素粗品溶液pH调节为酸性，然后采用反相制备液相色谱法进行纯化，收集含卡贝缩宫素的洗脱流份；
[0016](6)对步骤(5)收集的含卡贝缩宫素的洗脱流份进行转盐处理，得到醋酸卡贝缩宫素中间体；
[0017](7)将步骤(6)制得的醋酸卡贝缩宫素中间体依次进行旋蒸、纳滤、滤膜过滤、冻干处理，得到醋酸卡贝缩宫素纯品。
[0018]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(1)中，阳离子交换层析的具体操作为：将线性肽粗品溶液上样至阳离子交换层析柱，上样结束后直接采用平衡液对阳离子层析柱进行洗脱，收集含线性肽的洗脱流份；所述平衡液为0.1mol/L的乙酸溶液。
[0019]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(1)中，所述线性肽粗品溶液的电导率为1.5ms/cm，线性肽粗品溶液pH为4.0
±
0.1。
[0020]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，所述凝胶过滤层析采用的层析基质为Sephadex G
‑
15，流动相为1wt％氯化钠溶液，所述氯化钠溶液的pH为4.0
±
0.1。
[0021]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(5)中，所述反相制备液相色谱法的色谱条件为：流动相为甲醇和乙酸的混合水溶液，流动相中甲醇的浓度为体积分数18％，乙酸的体积分数为0.5％；色谱柱为：反相C18色谱柱；检测波长为220nm。更加优选地，所述色谱柱为SMB200
‑
10反相C18色谱柱。
[0022]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(6)中所述转盐处理的具体操作为：将步骤(5)收集的含卡贝缩宫素的洗脱流份上样至转盐色谱柱，然后依次采用洗涤液A、洗涤液B对转盐色谱柱进行洗涤，洗涤结束后采用洗脱液进行洗脱，洗脱同时进行检测，收集含醋酸卡贝缩宫素中间体的流份。
[0023]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，所述转盐色谱柱为反相C18色谱柱；所述洗涤液A为pH 2.8～3.2的0.1mol/L乙酸铵溶液；洗涤液B为乙酸、乙腈的混合水溶液，洗涤液B中乙酸的体积分数为0.5％，乙腈的体积分数为8％；所述洗脱液为乙酸和乙腈的混合水溶液，洗脱液中乙酸的体积分数为0.5％，乙腈的体积分数为50％；检测波长为220nm。更加优选地，所述色谱柱为SMB200
‑
10反相C18色谱柱。
[0024]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(7)中所述冻干处理的具体操作为：将滤膜过滤处理后的醋酸卡贝缩宫素预冻至
‑
50℃～
‑
40℃，保温处理2～3h；升温至
‑
38℃～
‑
35℃，保温处理2～3h；升温至
‑
25℃～
‑
20℃，保温处理7～10h；升温至
‑
15℃～
‑
5℃，保温处理9～12h；升温至
‑
3℃～3℃，保温处理9～12h；升温至8℃～12℃，保温处理9～12h；升温至28℃～32℃，保温处理1～3h。更加优选地，步骤(7)中所述冻干处理的具体操作为：将滤膜过滤处理后的醋酸卡贝缩宫素预冻至
‑
45℃保温处理2h；升温至
‑
38℃保温处理2h；升温至
‑
20℃保温处理8h；升温至
‑
10℃保温处理10h；升温至0℃保温处理10h；升温至10
℃保温处理10h；升温至30℃保温处理2h。
[0025]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(2)中，所述醚类沉淀剂为叔丁基甲基醚。
[0026]根据上述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，优选地，步骤(4)中，采用氢氧化钠将步骤(3)收集的含线性肽的洗脱流份pH调节为11.0...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将合成的卡贝缩宫素线性肽粗品溶解，得到线性肽粗品溶液，将线性肽粗品溶液pH调节为酸性后进行阳离子交换层析处理，收集含线性肽的洗脱流份；（2）向步骤（1）收集的含线性肽的洗脱流份中加入醚类沉淀剂，固液分离，收集沉淀物；（3）将步骤（2）得到的沉淀物溶解后进行凝胶过滤层析，收集含线性肽的洗脱流份；（4）将步骤（3）收集的含线性肽的洗脱流份pH调节为碱性后进行环化处理，得到卡贝缩宫素粗品溶液；（5）将所述卡贝缩宫素粗品溶液pH调节为酸性，然后采用反相制备液相色谱法进行纯化，收集含卡贝缩宫素的洗脱流份；（6）对步骤（5）收集的含卡贝缩宫素的洗脱流份进行转盐处理，得到醋酸卡贝缩宫素中间体；（7）将步骤（6）制得的醋酸卡贝缩宫素中间体进行旋蒸、纳滤、滤膜过滤、冻干处理，得到醋酸卡贝缩宫素纯品。2.根据权利要求1所述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，其特征在于，步骤（1）中，阳离子交换层析的具体操作为：将线性肽粗品溶液上样至阳离子交换层析柱，上样结束后直接采用平衡液对阳离子层析柱进行洗脱，收集含线性肽的洗脱流份；所述平衡液为0.1mol/L的乙酸溶液。3. 根据权利要求2所述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，其特征在于，步骤（1）中，所述阳离子交换层析采用的层析基质为SP
‑
Sepharose Fast Flow，所述线性肽粗品溶液的电导率为1.5 ms/cm，线性肽粗品溶液pH为4.0
±
0.1。4. 根据权利要求1～3任一所述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，其特征在于，所述凝胶过滤层析采用的层析基质为Sephadex G
‑
15，流动相为pH 4.0
±
0.1的1wt%氯化钠溶液。5.根据权利要求4所述的醋酸卡贝缩宫素的纯化方法，其特征在于，步骤（5）中，所述反相制备液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为的反相C18色谱柱；流动相为甲醇和乙酸的混合水溶液，流动相中甲醇的体积分数为18%，乙酸的体...

【专利技术属性】
技术研发人员：余彬，郑扶桑，赵文蒙，石小伟，宋祺，王萍，杜丽娟，
申请(专利权)人：河南美森药业有限公司，
类型：发明
国别省市：