乳源活性肽TDPLFKG及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了乳源活性肽TDPLFKG及其制备方法与应用。本发明专利技术首先提供一种小肽或其衍生物，其中所述小肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；SEQ ID NO.1：TDPLFKG。本发明专利技术的小肽为乳源活性肽，具有较好的抗氧化功效及调节免疫功效。效。

【技术实现步骤摘要】
乳源活性肽TDPLFKG及其制备方法与应用


[0001]本专利技术是关于一种活性肽及其制备方法与应用，具体而言，是关于一种乳源活性小肽TDPLFKG及其衍生物以及它们的制备方法与应用。

技术介绍

[0002]生物活性肽是指对生命体具有特定生理活性的肽，其中，乳蛋白是生物活性肽的重要来源之一。近年来，乳源活性肽已经成为人们耳熟能详的一个词语。一方面，乳源活性肽具有小片段、易吸收的特点；另一方面，其具有很多潜在的生物功能，所以引起人们越来越多的关注，成为科学研究的热点之一。很多乳源活性肽的有益效果也已经得到了很好的证明，包括抗菌、抗癌、降血压、降胆固醇、抗糖尿病、抗炎、抗抑郁等特性。当前最权威的乳源活性肽数据库BIOPEP
‑
UMW中已报告了4000多个不同的乳源活性肽。但是具有抗氧化或免疫调节功能的不同于现有多肽的新的乳源活性肽仍然是目前需要进一步研究的方向。

技术实现思路

[0003]本专利技术的一个目的在于提供乳源活性小肽及其衍生物。
[0004]本专利技术的另一目的在于提供所述小肽及其衍生物的制备方法。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供所述小肽及其衍生物的应用。
[0006]一方面，本专利技术提供一种小肽或其衍生物，其中所述小肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0007]SEQ ID NO.1：TDPLFKG。
[0008]本专利技术的小肽为活性肽，具有较好的抗氧化功效及调节免疫功效。
[0009]根据本专利技术的具体实施方案，所述衍生物为在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的侧链基团、氨基端或羧基端的基础上经羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化和/或糖基化修饰得到的衍生肽。优选地，所述衍生肽具有与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的小肽基本相同的生物活性(例如抗氧化和/或调节免疫功效)。
[0010]另一方面，本专利技术还提供了一种制备所述的小肽或其衍生物的方法，该方法包括：
[0011]通过微生物发酵的方法制备所述小肽或其衍生物；或者
[0012]通过基因工程的方法制备所述小肽或其衍生物(可以从细胞中通过分离纯化的方法直接获得)；或者
[0013]通过化学方法合成所述小肽或其衍生物。
[0014]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的一种制备所述的小肽或其衍生物的方法包括：
[0015]以含有乳蛋白的乳液为发酵底物，接种副干酪乳杆菌发酵，从发酵产物中分离获得本专利技术所述的小肽或其衍生物。
[0016]副干酪乳杆菌(Lactobacillus.paracasei)为革兰氏阳性菌，往往进行异型发酵，具有兼性厌氧、不运动、无芽孢的特点，形态为杆菌或长杆菌，单个或成对出现，宽度为2.0
～4.0μm，长度为0.8～1.0μm。本专利技术中，可利用副干酪乳杆菌发酵酶解乳蛋白生产所述小肽，还可选择性地进一步通过修饰获得所述小肽的衍生物。
[0017]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的制备所述的小肽或其衍生物的方法中，所述发酵底物中包括：3％～10％的牛乳浓缩蛋白以及1％～10％的乳糖。
[0018]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的制备所述的小肽或其衍生物的方法中，发酵条件为：30～45℃，接种量为1％～3％，种子液中菌数1.5
×
10
11
CFU/mL以上。
[0019]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的制备所述的小肽或其衍生物的方法中，所述副干酪乳杆菌包括副干酪乳杆菌K56。副干酪乳杆菌K56是CN107916236A的公开菌株，已被证明具有抗细菌、抗肥胖、抗氧化、调节血压、调节肠道菌群、调节免疫系统等功效。
[0020]采用副干酪乳杆菌K56菌株自然发酵生产乳源活性肽TDPLFKG，可提高所产生的目标小肽的浓度并降低生产成本。具体可按照以下方法进行：以牛乳浓缩蛋白为原料，使用副干酪乳杆菌发酵，然后采用膜技术进行浓缩，分离纯化，获得目标小肽。本专利技术中，可通过真空冷冻干燥技术或者低温喷雾干燥技术获得粉末形式的小肽成品。可通过UPLC
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MS检查肽的氨基酸序列。
[0021]在本专利技术的一些具体实施方案中，采用副干酪乳杆菌K56菌株自然发酵生产乳源活性肽TDPLFKG的方法包括：
[0022]将3～10％的乳浓缩蛋白与1～10％的乳糖溶于pH为7.0～8.0、温度为25～90℃的水溶液中，混匀，冷却至室温后得到乳浓缩蛋白溶液；
[0023]接种发酵菌种，发酵后得到发酵液；
[0024]对发酵液进行离心处理，收集上清液，然后采用截留分子量小于3KDa的膜进行超滤过滤，得到过滤后的发酵液；
[0025]从过滤后的发酵液中进一步分离纯化，获得目标小肽。
[0026]另一方面，本专利技术还提供了所述的小肽或其衍生物在制备具有抗氧化和/或免疫调节功效的组合物中的应用。
[0027]另一方面，本专利技术还提供了一种组合物，其包含本专利技术所述的小肽和/或其衍生物，还选择性地包含辅料。
[0028]根据本专利技术的具体实施方案，所述组合物为食品组合物、药品组合物或化妆品组合物。
[0029]本专利技术的乳源活性肽TDPLFKG的有益效果为：一方面，具有较高的抗氧化能力；另一方面，具有较好的免疫调节活性，可提高生命的质量。本专利技术的小肽及其衍生物对开发具有抗氧化功能、免疫调节功能的食品、保健品和药物具有十分重要的意义。
附图说明
[0030]图1为质荷比为454.732的片段的一级质谱图(m/z＝454.732)。
[0031]图2显示质荷比为454.732的片段的二级质谱图和多肽az、by断裂情况。
[0032]图3为乳源活性肽TDPLFKG体外消化产物分析饼状图。
具体实施方式
[0033]在进一步描述本专利技术具体实施方案之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下
述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。
[0034]当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。
[0035]除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：ALABORATORY MANUAL，Second 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小肽或其衍生物，其中所述小肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；SEQ ID NO.1：TDPLFKG。2.根据权利要求1所述的小肽或其衍生物，其中，所述衍生物为在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的侧链基团、氨基端或羧基端的基础上经羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化和/或糖基化修饰得到的衍生肽。3.一种制备权利要求1或2所述的小肽或其衍生物的方法，该方法包括：通过微生物发酵的方法制备所述小肽或其衍生物；或者通过基因工程的方法制备所述小肽或其衍生物；或者通过化学方法合成所述小肽或其衍生物。4.一种制备权利要求1或2所述的小肽或其衍生物的方法，该方法包括：以含有乳蛋白的乳液为发酵底物，接种副干酪乳杆菌发酵，从发酵产物中分离获得权利要求1所述的小肽或其衍生物。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：何剑，王彩云，张少辉，王娟，包萨日娜，韩仁娇，洪维鍊，马霞，孙婷，
申请(专利权)人：内蒙古乳业技术研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：