一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物及试剂制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，具体公开了一种一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物及试剂。所述的用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其特征在于，包含检测肺炎链球菌的引物对SPN

【技术实现步骤摘要】
一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物及试剂


[0001]本专利技术涉及基因检测
，具体涉及一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物及试剂。

技术介绍

[0002]细菌性肺炎是世界范围内严重危害人类身体健康的感染性疾病，其症状重且病程长，患者病情反复，对其健康不利。尽早对疾病的病原学类型进行准确判断，对疾病的治疗意义重大。据文献报道，细菌性肺炎是临床常见的肺部感染疾病，临床可通过痰液细菌培养明确病原菌，了解患者的药敏情况，采取适宜的抗生素治疗，提高疾病治疗效果，但此种方式采集的多为自然咳痰，易采集到寄居在上呼吸道的正常菌群，进而影响培养结果的准确性，且痰培养的周期较长，无法为疾病的早期诊断提供有效依据，易延误病情的诊断及治疗的最佳时机，而只有准确区分细菌为病原菌或正常寄居菌群，才能准确诊断疾病。
[0003]肺炎链球菌(SPN)主要引起人类大叶性肺炎。部分正常人上呼吸道中携带有毒力的肺炎链球菌。由此可见呼吸道黏膜对肺炎链球菌存在很强的自然抵抗力。当出现某种降低这种抵抗功能的因素时，肺炎链球菌可引起感染。
①
呼吸道功能异常：病毒及其他感染性因子损伤呼吸道黏膜上皮细胞；某些异常因素(如过敏)导致黏液的过度分泌，使侵入的病原菌受到保护；各种原因导致的支气管阻塞及各种原因导致的纤毛功能损伤。
②
酒精及药物中毒：酒精及某些药物中毒可抑制吞噬细胞的活性及咳嗽反射，有利于病原菌的吸人。
③
循环系统功能异常及任何原因导致的肺充血、心功能衰竭。
④
其他：营养缺陷、体质虚弱、贫血、血清补体水平低下等。
[0004]百日咳鲍特菌(BP)为革兰染色阴性的短小杆菌，是人类百日咳的病原体。病人，尤其是症状轻微的非典型病人是重要的传染源。主要经飞沫传播。易感儿童接触病人后发病率接近90％，一岁以下患儿病死率高。本病病程较长，故名百日咳。在致病过程中，百日咳杆菌始终在纤毛上皮细胞表面，并不入血。
[0005]流感嗜血杆菌(Hi)是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。由流感嗜血杆菌自然产生的疾病只会在人类出现。在婴儿及孩童中，乙型流感嗜血杆菌会引致菌血病症及急性细菌性脑膜炎。偶尔地它会引致蜂窝组织炎、骨髓炎及关节感染。Hi肺炎通常发生于1岁左右儿童。大多数病人发病前有感冒，50％左右早期出现胸腔积液。菌血症和脓胸不常见。大部分受无荚膜菌株感染的成年人产生类似其他细菌性肺炎的支气管肺炎。
[0006]脑膜炎奈瑟菌(Nm)简称为脑膜炎球菌(meningococcus)，是流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)的病原菌。人类是脑膜炎奈瑟菌唯一的易感宿主。细菌由鼻咽部侵入机体，依靠菌毛的作用粘附于鼻咽部粘膜上皮细胞表面。多数人感染后表现为带菌状态或隐性感染，细菌仅在体内短暂停留后被机体清除。只有少数人发展成脑膜炎。6月～2岁年龄组婴儿免疫力最低，是脑膜炎奈瑟菌的易感人群。
[0007]嗜肺军团菌(Lp)是一种细胞兼性寄生的细菌，可入侵变形虫，或是人类的巨噬细胞内。轻症患者表现为流感样症状，并出现剧烈呕吐；重症可表现为军团菌肺炎。老年人和
免疫功能低下者为高危人群，一般起病较为缓慢，初期可有乏力不适、食欲不振，随后可以出现头痛、肌痛、寒战、高热，也有咽痛、流涕、畏光、干咳嗽、少痰或为脓性痰，也可有咯血，而胸痛较为常见，疼痛的性质较为剧烈。
[0008]卡他莫拉菌(MC)，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，而且其发病率逐年增加，尤其多见于慢性阻塞性肺病患者。
[0009]降钙素原(procalcitonin，PCT)是近年来被临床普遍认可的敏感指标，其可有效区分感染类型，评估患者感染严重程度，监测患者诊疗过程，但其对病原体的培养过程时间较长，等待结果的过程中病人的情况可能会继续恶化。
[0010]qPCR使用特异性引物，对样本进行扩增和鉴别，此方法快捷迅速，2小时左右即可得到检测结果，但是在未知病原体的情况下，只能使用大量不同的引物对其进行测试。此方法浪费试剂、时间和人力。
[0011]在一个PCR体系中，不同长度的产物对应着不同的延伸时间。较短长度的产物如果延伸时间过长容易引起发卡结构、引物二聚体、错配等问题，直接或间接导致测试不准确；较长长度的产物延伸时间过短则会导致扩增失败，无法正常检测到。在同一PCR体系中，同时加入多种引物，会引起引物之间形成二聚体，多聚体、引物和模板错配，甚至造成存在目标模板时，主产物为二聚体的情况。
[0012]由此可见，在同一PCR体系中，是否能够成功进行多重PCR检测，引物的选择十分关键。然而，现有技术并未公开同时对肺炎链球菌、百日咳鲍特菌、检测脑膜炎奈瑟菌、检测嗜肺军团菌、卡他莫拉菌等五种苛养菌进行多重PCR检测的方法。更未公开可用于同时对肺炎链球菌、百日咳鲍特菌、检测脑膜炎奈瑟菌、检测嗜肺军团菌、卡他莫拉菌等五种苛养菌进行多重PCR检测的引物。因此，提供一种可用于同时对肺炎链球菌、百日咳鲍特菌、检测脑膜炎奈瑟菌、检测嗜肺军团菌、卡他莫拉菌等五种苛养菌进行多重PCR检测的引物以及试剂具有重要的应用价值。

技术实现思路

[0013]为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本专利技术首先提供了一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物。
[0014]本专利技术的技术方案如下：
[0015]一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其包含检测肺炎链球菌的引物对SPN
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F和SPN
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R；检测百日咳鲍特菌的引物对BP
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F和BP
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R；检测脑膜炎奈瑟菌的引物对Nm
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F和Nm
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R；检测嗜肺军团菌的引物对Lp
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F和Lp
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R；以及检测卡他莫拉菌的引物对MC
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F和MC
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R。
[0016]本专利技术首次提供了一种可用于同时对肺炎链球菌、百日咳鲍特菌、检测脑膜炎奈瑟菌、检测嗜肺军团菌、卡他莫拉菌等五种苛养菌进行多重PCR检测的引物；其可用于同时对肺炎链球菌、百日咳鲍特菌、检测脑膜炎奈瑟菌、检测嗜肺军团菌、卡他莫拉菌等五种苛养菌进行多重PCR检测。
[0017]优选地，SPN
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F的序列为GGCAATGGACGGAAGT；SPN
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R的序列为TGTAGCCCAGGTCATAAGG。
[0018]优选地，BP
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F的序列为GTTCGGAAAGAAAGATGTGA；BP
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R的序列为CACTCTAGCCCGGTAGTTAA。
[0019]优选地，Nm
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F的序列为TCGGGAGCCGTAACAC；Nm
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R的序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其特征在于，包含检测肺炎链球菌的引物对SPN
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F和SPN
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R；检测百日咳鲍特菌的引物对BP
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F和BP
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R；检测脑膜炎奈瑟菌的引物对Nm
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F和Nm
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R；检测嗜肺军团菌的引物对Lp
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F和Lp
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R；以及检测卡他莫拉菌的引物对MC
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F和MC
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R。2.根据权利要求1所述的用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其特征在于，SPN
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F的序列为GGCAATGGACGGAAGT；SPN
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R的序列为TGTAGCCCAGGTCATAAGG。3.根据权利要求1所述的用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其特征在于，BP
‑
F的序列为GTTCGGAAAGAAAGATGTGA；BP
‑
R的序列为CACTCTAGCCCGGTAGTTAA。4.根据权利要求1所述的用于五种苛养菌的多重PCR检测的引物，其特征在于，Nm
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【专利技术属性】
技术研发人员：单小云，张诗航，杨卫仙，卢甜，朱以军，龚正华，
申请(专利权)人：金华市中心医院，
类型：发明
国别省市：