用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法、试剂盒及应用技术

本申请实施例属于NGS测序技术领域，涉及一种用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法，包括选择鉴定的呼吸道感染病原体，基于呼吸道感染病原体设计对应的多重引物；将多重引物与对应的第一接头序列进行连接，构成多重扩增引物；将与多重扩增引物互补配对的第二接头序列、MGI barcode序列及MGI测序引物序列进行连接，得到二轮扩增引物；分别制备阴性标准品和阳性标准品；根据多重扩增引物和多重扩增试剂制备多重扩增体系；将多重扩增体系、二轮扩增引物、预先制备的二轮扩增试剂、阴性标准品和阳性标准品组装得到试剂盒。本申请还涉及一种用于检测下呼吸道感染的试剂盒及应用。本申请提供的技术方案能够提高病原体的检测效率，同时可以简化实验流程。时可以简化实验流程。时可以简化实验流程。

【技术实现步骤摘要】
用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法、试剂盒及应用


[0001]本申请涉及NGS测序
，更具体地，涉及一种用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]呼吸道感染由多种病原体引起，是全球发病和死亡的第二大常见病因，且目前由耐药细菌所致的感染数量显著增加。肺作为人体内部环境和外部环境之间的门户，是最易被病原体感染的部位。支气管肺炎、肺阻塞、肺脓肿、癌症等疾病容易导致肺部病原体感染，有报道称肺移植手术也有一定几率引起多药耐药细菌感染，是肺移植患者发病和死亡的一个主要原因。
[0003]抗生素是对抗病原体感染的有力工具，但是由于不合理的利用、甚至滥用抗生素导致了耐药病原体的产生和广泛传播，快速鉴定感染的病原体，有利于临床疾病的诊断和形成更合理的治疗方案。
[0004]中国细菌耐药检测网2021年公布，在临床分离得到的143051株分离菌中，来自呼吸道样本的分离菌占据最大比例，高达38.7％，而临床呼吸道样本分离菌主要有：肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法，其特征在于，包括：选择鉴定的呼吸道感染病原体，基于所述呼吸道感染病原体设计对应的多重引物；将所述多重引物与对应的第一接头序列进行连接，构成多重扩增引物；获取与所述多重扩增引物互补配对的第二接头序列、MGIbarcode序列以及MGI测序引物序列，将所述第二接头序列、所述MGIbarcode序列以及所述MGI测序引物序列进行连接，得到二轮扩增引物；分别制备阴性标准品和阳性标准品；根据所述多重扩增引物和多重扩增试剂制备多重扩增体系；将所述多重扩增体系、所述二轮扩增引物、预先制备的二轮扩增试剂、所述阴性标准品和所述阳性标准品组装，得到试剂盒。2.根据权利要求1所述的用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法，其特征在于，所述基于所述呼吸道感染病原体设计对应的多重引物的步骤包括：使用比对软件，对所述呼吸道感染病原体的物种参考基因组进行保守序列鉴定；将所述保守序列打断成序列片段，并对所述序列片段进行特异性序列的校验，得到校验结果；根据校验结果将除了所述呼吸道感染病原体对应的物种之外的其他微生物物种序列区域进行过滤，得到鉴定区域；根据所述鉴定区域制得特异性引物，并根据预配置的引物设计参数对所述特异性引物进行初步过滤，得到初步过滤引物；将所述初步过滤引物与预整理的非冗余呼吸道病原数据库与人源数据库进行比对，得到比对信息；将所述比对信息与所述特异性引物进行匹配，生成非特异性扩增信息；根据所述非特异性扩增信息过滤所述初步过滤引物，得到所述多重引物。3.根据权利要求1所述的用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法，其特征在于，所述阴性标准品采用如下制备方法：提取人类Hela细胞基因组DNA，使用荧光定量仪对所述Hela细胞基因组DNA进行浓度测定；选择双链DNA浓度大于预设阈值的所述Hela细胞基因组DNA进行DNA纯度分析；将DNA纯度满足预设范围的所述Hela细胞基因组DNA作为所述阴性标准品。4.根据权利要求1所述的用于检测下呼吸道感染的试剂盒制备方法，其特征在于，所述阳性标准品采用如下制备方法：提取多种所述呼吸道感染病原体的病原体基因组DNA，使用荧光定量仪对所述病原体基因组DNA进行浓度测定；选择双链DNA浓度大于所述预设阈值的所述病原体基因组DNA进行DNA纯度分析；将DNA纯度满足预设范围的各所述病原体基因组DNA按照等比例混合，制得所述阳性标准品。5.一种用于检测下呼吸道感染的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用如权利要求1至4中任...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，梁志坤，苏恬恬，吴轶兰，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：