牛乳房炎病原体多联检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了牛乳房炎病原体多联检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括扩增牛支原体、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌的5个基因位点的特异性引物及荧光探针。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：(1)本发明专利技术所述试剂盒基于Taqman法qPCR技术实现单样品多指标同时检测，简化实验操作步骤、提高检测通量，以满足多指标快速筛查及精准检测的迫切需求；(2)另外，实现高灵敏度、高特异性、高适应性和可靠性的目的，且无需培养细菌，直接用牛乳样品就可以进行鉴定，减少病原体鉴定所需的时间和费用；(3)所述试剂盒检测效率高、耗时短，2个小时左右即可实现在同一装置内同时检测5种常见牛乳房炎病原体。时检测5种常见牛乳房炎病原体。时检测5种常见牛乳房炎病原体。

【技术实现步骤摘要】
NO.16
‑
18。
[0007]优选的，所述试剂盒包含PCR反应液Ⅰ、PCR反应液Ⅱ和PCR反应液Ⅲ；其中，PCR反应液Ⅰ包括SEQ ID NO.1
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2、SEQ ID NO.4
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5所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.6所示的荧光探针；PCR反应液Ⅱ包括SEQ ID NO.7
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8、SEQ ID NO.10
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11所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12所示的荧光探针；PCR反应液Ⅲ包括SEQ ID NO.13
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14、SEQ ID NO.16
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17所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.18所示的荧光探针。
[0008]进一步的，检测过程中PCR反应液Ⅰ、PCR反应液Ⅱ和PCR反应液Ⅲ分别加入核酸检测壳体的不同的样品孔中。
[0009]优选的，所述特异性引物和荧光探针在扩增体系中的终浓度均为：0.2μM。
[0010]优选的，所述试剂盒包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛乳房炎病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增牛支原体、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和金黄色葡萄球菌的5个基因位点的特异性引物及荧光探针；其中，5个基因位点为：牛支原体的DPI基因、无乳链球菌的sip基因、停乳链球菌的isp基因、乳房链球菌的sodA基因，金黄色葡萄球菌的nur基因；以及猪内参基因ACTB基因的特异性引物和荧光探针。2.根据权利要求1所述的牛乳房炎病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述特异性引物及荧光探针序列如下：Mbo、SEQ ID NO.1
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3；Sag、SEQ ID NO.4
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6；Sdy、SEQ ID NO.7
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9；Sub、SEQ ID NO.10
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12；SA、SEQ ID NO.13
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15；Bov、SEQ ID NO.16
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18。3.根据权利要求1所述的牛乳房炎病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含PCR反应液Ⅰ、PCR反应液Ⅱ和PCR反应液Ⅲ；其中，PCR反应液Ⅰ包括SEQ ID NO.1
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2、SEQ ID NO.4
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5所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6所示的荧光探针；PCR反应液Ⅱ包括SEQ ID NO.7
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8、SEQ ID NO.10
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11所示的特异性引物，以及SEQ IDNO.9、SEQ ID NO.12所示的荧光探针；PCR反应液Ⅲ包括SEQ ID NO.13
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14、SEQ IDNO.16
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17所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.18所示的荧光探针。4.根据权利要求1所述的牛...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈舒婷，王冉，张莉莉，项春艳，刘梅，唐大运，王业清，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：