一种参与利普斯他汀及其结构类似物合成的基因簇及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种参与利普斯他汀及其结构类似物合成的基因簇及其应用，该基因簇共包括bkdA2，bkdB2，bkdC2三个结构基因以及一个bkdR转录调控基因。敲除毒三素链霉菌中所述基因簇任意一个或多个基因，可显著提高结构类似物RRT0.90的发酵水平。增强转录调控基因bkdR的表达，则可有效提高利普斯他汀的发酵效价。本发明专利技术为深入研究利普斯他汀及其结构类物的生物合成机理提供了直接依据，为开发更有效的奥利司他衍生物奠定了基础。本发明专利技术构建的利普斯他汀工程菌株能直接应用于奥利司他的发酵生产，可降低生产成本，提高经济效益。提高经济效益。提高经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种参与利普斯他汀及其结构类似物合成的基因簇及其应用


[0001]本专利技术属于工业微生物基因资源挖掘与遗传育种领域，具体涉及毒三素链霉中与利普斯他汀及其结构类似物合成有关的支链α酮酸脱氢酶复合物编码基因簇及其应用。

技术介绍

[0002]利普斯他汀是由毒三素链霉菌(Streptomyces toxytricini)发酵产生的一种特异性肠胃道脂肪酶抑制剂，其分子结构中含有两个脂肪酸长链、一个反式中心β内酯环和一个氨基酸侧链。利普斯他汀的氢化还原产物奥利司他化学性质更加稳定，由罗氏公司开发成体重控制药物于1999年获批上市，至今已有超过20年的安全有效使用历史，是目前全球唯一的OTC减重药和非中枢神经作用减重药，也是唯一可用于12岁以上青少年肥胖症治疗的减重药。
[0003]利普斯他汀作为微生物次级代谢产物，在发酵过程中会产生一些与其结构和理化性质相近的结构类似物，现已报道的大多数利普斯他汀结构类似物均具有相同的天然β内酯骨架结构，仅在脂肪酸长链上有所不同，主要表现在其两条长链脂肪酸中含有一条末端单甲基化的异式或反异式脂肪酸，甲基位于脂肪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种参与利普斯他汀及其结构类似物合成的基因簇，其特征在于，所述基因簇由bkdA2、bkdB2、bkdC2和bkdR四个基因组成；所述基因bkdA2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述基因bkdB2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述基因bkdC2的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述基因bkdR的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述利普斯他汀结构类似物的结构如下所示：2.根据权利要求1所述的基因簇，其特征进一步在于，所述基因bkdA2的核苷酸序列编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；所述基因bkdB2的核苷酸序列编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；所述基因bkdC2的核苷酸序列编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.7所示；所述基因bkdR的核苷酸序列编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。3.一种工程菌，其特征在于，以毒三素链霉菌Streptomyces toxytricini为出发菌株，对如权利要求1所述的基因簇中的bkdA2、bkdB2、bkdC2和bkdR基因中的任意一个、任意两个、任意三个或全部四个基因进行敲除得到。4.一种工程菌，其特征在于，以毒三素链霉菌Streptomyces toxytricini为出发菌株，对如权利要求1所述的基因簇中的bkdR基因进行过量表达得到。5.如权利要求3或权利要求4所述的工程菌，其特征进一步在于，所述毒三素链霉菌Streptomyces toxytricini包括毒三素链霉菌AP617
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N12CA。6.一种权利要求3所述的工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以毒三素链霉菌基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得目的基因的同源重组左臂片段和右臂片段，将左臂片段和右臂片段插入到质粒多克隆位点上，获得目的基因敲除质粒；所述目的基因是bkdA2B2C2基因簇中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李辉，彭滢，李剑，刘彤，胥龙奇，邓志强，方志锴，
申请(专利权)人：大邦湖南生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：