能够结合ROR2的抗体以及结合ROR2和CD3的双特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合ROR2的抗体，包括结合ROR2和CD3的双特异性抗体。本发明专利技术还提供了包含该抗体的药物组合物，以及该抗体用于治疗和诊断程序，特别是在癌症疗法中的用途。特别是在癌症疗法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】能够结合ROR2的抗体以及结合ROR2和CD3的双特异性抗体


[0001]本专利技术涉及结合ROR2的抗体，包括结合ROR2和CD3的双特异性抗体。本专利技术还提供了包含该抗体的药物组合物，以及该抗体用于治疗和诊断程序，特别是在癌症疗法中的用途。

技术介绍

[0002]ROR2(受体酪氨酸激酶样孤儿受体2，NTRKR2，神经营养性酪氨酸激酶受体相关蛋白2)是单次I型跨膜糖蛋白，属于酪氨酸蛋白激酶家族的ROR亚家族。ROR2是在调节骨骼和神经元发育、细胞迁移和细胞极性中很重要的酪氨酸激酶受体，部分地经由其在非经典Wnt5a信号转导途径中的提议作用(Oishi 2003,Genes to cells 8:6450654)。它含有FZ(卷曲蛋白)结构域、Ig(免疫球蛋白)样C2型结构域，以及胞外区的kringle结构域和胞质区的蛋白激酶结构域(Masiakowski和Carroll 1992,J Biol Chem 267:26181
‑
90)。
[0003]在正常人成体组织中，ROR2表达非常有限(仅在月经周期期间的子宫中、损伤后修复期间的脑中、在骨形成期间的骨中，以及在肠中作为肠道稳态的一部分(Debebe和Rathmell 2015,Pharmcol&Therap 150:143
‑
148；Endo 2017,Dev Dyn 247:24
‑
32))，然而，ROR2表达存在于多种癌组织，包括肉瘤、子宫、胰腺、黑素瘤、肾细胞癌、前列腺癌、结肠直肠癌、头颈部鳞状细胞癌、间质瘤和乳腺癌组织中的人肿瘤细胞上(综述于Debebe和Rathmell 2015,Pharmcol&Therap 150:143
‑
148)。
[0004]因此，ROR2靶向被提出用于治疗癌症。例如，ROR2特异性抗体药物缀合物CAB
‑
ROR2
‑
ADC/BA3021正处在用于实体瘤和软组织肉瘤的癌症疗法的开发当中(Sharp等人,Proceedings of the AACR Annual Meeting 2018；Cancer Res 78(13增刊):摘要833)。而且，针对ROR2的嵌合抗原受体(CAR)T细胞正处于肾癌中的开发当中(ssociation for Cancer Immunotherapy(CIMT)2019Annual Meeting,摘要123).
[0005]还致力于将T细胞靶向ROR2。已经描述了基于人源化ROR2兔抗体的scFv
‑
Fc形式的双特异性ROR2/CD3，其在肿瘤细胞系中展现出T细胞的细胞毒性(Goydel等人,2020,J Biol Chem 295:5995
‑
6006)。
[0006]虽然已取得了一些进展，但仍然需要开发出靶向ROR2的基于抗体的癌症疗法，这种疗法对于人类使用(如用于治疗癌症)有效且安全。
[0007]本专利技术的目的是提供包含至少一个能够结合人ROR2的抗原结合区的抗体。本专利技术的另一个目的是提供包含两个能够结合人ROR2的抗原结合区的抗体。另一个目的是提供能够结合人ROR2和人CD3(如人CD3ε(epsilon))的双特异性抗体。另一个目的是提供IgG形式(如人IgG1形式)的CD3xROR2双特异性抗体。另一个目的是提供IgG1形式的CD3xROR2双特异性抗体，其中Fc区是惰性的。另一目的是提供血浆半衰期在常规人IgG1抗体范围内的CD3xROR2双特异性抗体。另一目的是提供有效且安全地用于治疗癌症的ROR2抗体和/或CD3xROR2双特异性抗体。

技术实现思路

[0008]在一个主要方面，本专利技术涉及ROR2结合抗体，特别是包含至少一个能够结合人ROR2的抗原结合区的抗体，其中所述抗体包含分别具有如SEQ ID NO:3、4和5中所示的序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO:7、8和9中所示的序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。
[0009]在另一方面，抗体可特别地为双特异性抗体，该双特异性抗体包含能够结合人ROR2的第一抗原结合区，其中所述抗体包含分别具有如SEQ ID NO:3、4和5中所示的序列的VH区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO:7、8和9中所示的序列的VL区CDR1、CDR2和CDR3；并且包含能够结合人CD3如人CD3ε(epsilon)，如SEQ ID NO:21中所指定的人CD3ε(epsilon)的第二抗原结合区。
[0010]在另一方面，本专利技术涉及一种双特异性抗体，该双特异性抗体包含如本文所述的能够结合人ROR2的第一抗原结合区以及能够结合人CD3的第二抗原结合区，该第二抗原结合区包含分别具有如SEQ ID NO:23、24和25中所示的序列的VH区CDR1、CDR2和CDR3以及分别具有如SEQ ID NO:27、GTN和28中所示的序列的VL区CDR1、CDR2和CDR3。
[0011]在另一方面，本专利技术涉及一种核酸构建体，该核酸构建体包含：
[0012]a)编码如本文所定义的包含能够结合ROR2的抗原结合区的抗体的重链序列的核酸序列，和/或
[0013]b)编码如本文所定义的包含能够结合ROR2的抗原结合区的抗体的轻链序列的核酸序列。
[0014]在另一方面，本专利技术涉及一种表达载体，该表达载体包含：
[0015]a)编码如本文所定义的包含能够结合ROR2的抗原结合区的抗体的重链序列的核酸序列，和/或
[0016]b)编码如本文所定义的包含能够结合ROR2的抗原结合区的抗体的轻链序列的核酸序列。
[0017]在另一方面，本专利技术涉及一种细胞，该细胞包含如本文所定义的核酸构建体或表达载体。
[0018]在另一方面，本专利技术涉及一种组合物，该组合物包含根据本文的任何方面或实施方案的抗体。
[0019]在另一方面，本专利技术涉及一种药物组合物，该药物组合物包含根据本文的任何方面或实施方案的抗体以及药学上可接受的载剂。
[0020]在另一方面，本专利技术涉及一种根据本文的任何方面或实施方案的抗体，该抗体用作药物，如用于治疗疾病。
[0021]在另一方面，本专利技术涉及一种治疗疾病或病症的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给药根据本文的任何方面或实施方案的抗体、组合物或药物组合物。
[0022]在一个方面，本专利技术涉及一种产生根据本文的任何方面或实施方案的抗体的方法，该方法包括在培养基中以及适于产生抗体的条件下培养重组宿主细胞。
[0023]在另一方面，本专利技术涉及一种试剂盒，该试剂盒包含如本文所定义的抗体；以及所述试剂盒的使用说明书。
[0024]以下更详细地描述了本专利技术的这些及其它方面和实施方案。
附图说明
[0025]图1.通过流式细胞术测定的根据本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗体，其包含至少一个能够结合人ROR2的抗原结合区，其中所述抗体包含分别具有如SEQ ID NO:3、4和5中所示的序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO:7、8和9中所示的序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含两个能够结合人ROR2的抗原结合区，其中所述抗体包含分别具有如SEQ ID NO:3、4和5中所示的序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO:7、8和9中所示的序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3。3.根据权利要求1或2中任一项所述的抗体，其中所述抗体从包含具有SEQ ID NO:2中所示的序列的VH区和/或具有SEQ ID NO:6中所示的序列的VL区的抗体人源化。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有选自下组的序列的VH区：a.如SEQ ID NO:10中所示的VH区(HC1)；b.如SEQ ID NO:11中所示的VH区(HC2)；c.如SEQ ID NO:12中所示的VH区(HC3)；d.如SEQ ID NO:13中所示的VH区(HC4)；e.如SEQ ID NO:14中所示的VH区(HC5)；f.如SEQ ID NO:15中所示的VH区(HC6)；g.如SEQ ID NO:16中所示的VH区(HC7)，或h.与SEQ ID NO:10、11、12、13、14、15或16的序列中的任一者具有至少90％序列同一性的VH区。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的VH区。6.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有选自下组的序列的VL区：a.如SEQ ID NO:17中所示的VL区(LC1)；b.如SEQ ID NO:18中所示的VL区(LC2)；c.如SEQ ID NO:19中所示的VL区(LC3)；d.如SEQ ID NO:20中所示的VL区(LC4)，或e.与SEQ ID NO:17、18、19或20的序列中的任一者具有至少90％序列同一性的VL区。7.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:19中所示的序列的VL区。8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有选自下组的序列的VH和VL区：a.具有SEQ ID NO.10的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；b.具有SEQ ID NO.10的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；c.具有SEQ ID NO.10的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；d.具有SEQ ID NO.10的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；e.具有SEQ ID NO.11的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；f.具有SEQ ID NO.11的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；
g.具有SEQ ID NO.11的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；h.具有SEQ ID NO.11的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；i.具有SEQ ID NO.12的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；j.具有SEQ ID NO.12的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；k.具有SEQ ID NO.12的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；l.具有SEQ ID NO.12的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；m.具有SEQ ID NO.13的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；n.具有SEQ ID NO.13的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；o.具有SEQ ID NO.13的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；p.具有SEQ ID NO.13的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；q.具有SEQ ID NO.14的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；r.具有SEQ ID NO.14的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；s.具有SEQ ID NO.14的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；t.具有SEQ ID NO.14的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；u.具有SEQ ID NO.15的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；v.具有SEQ ID NO.15的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；w.具有SEQ ID NO.15的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；x.具有SEQ ID NO.15的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区；y.具有SEQ ID NO.16的序列的VH区和具有SEQ ID NO.17的序列的VL区；z.具有SEQ ID NO.16的序列的VH区和具有SEQ ID NO.18的序列的VL区；aa.具有SEQ ID NO.16的序列的VH区和具有SEQ ID NO.19的序列的VL区；以及bb.具有SEQ ID NO.16的序列的VH区和具有SEQ ID NO.20的序列的VL区。9.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:13和19的序列的VH和VL区。10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述VH和VL区是人源化的。11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述重链恒定区是人IgG1。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述轻链恒定区是人κ。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全长抗体，如全长IgG1抗体。14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是单价抗体。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是二价抗体。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是单特异性抗体。17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是双特异性抗体。18.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述人ROR2是SEQ ID NO.1的人ROR2。19.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体能够结合人ROR2的Kringle结构域。20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合人ROR2上的表位或抗体结合区，所述表位或抗体结合区涉及人ROR2的位置322处的氨基酸残基，编号是指其在
NO:29中所示的VH序列以及如SEQ ID NO:30中所示的VL序列的抗原结合区的抗体具有更低的人CD3ε结合亲和力，优选地其中所述亲和力低至少5倍，如低至少10倍，例如低至少20倍、低至少30倍、低至少40倍、低至少45倍或如低至少50倍，如低至少54倍。33.根据权利要求26至32中任一项所述的抗体，其中所述结合CD3的抗原结合区以200
‑
1000nM范围内，如300
‑
1000nM范围内、400
‑
1000nM范围内、500
‑
1000nM范围内、300
‑
900nM范围内、400
‑
900nM范围内、400
‑
700nM范围内、500
‑
900nM范围内、500
‑
800nM范围内、500
‑
700nM范围内、600
‑
1000nM范围内、600
‑
900nM范围内、600
‑
800nM范围内、或如600
‑
700nM范围内的平衡解离常数K
D
结合。34.根据权利要求26至31中任一项所述的抗体，其中所述结合CD3的抗原结合区以1
‑
100nM范围内，如5
‑
100nM范围内、10
‑
100nM范围内、1
‑
80nM范围内、1
‑
60nM范围内、1
‑
40nM范围内、1
‑
20nM范围内、5
‑
80nM范围内、5
‑
60nM范围内、5
‑
40nM范围内、5
‑
20nM范围内、10
‑
80nM范围内、10
‑
60nM范围内、10
‑
40nM范围内、或如10
‑
20nM范围内的平衡解离常数K
D
结合。35.根据权利要求26至34中任一项所述的抗体，其中所述结合CD3的抗原结合区包含含有CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列的重链可变(VH)区，所述重链可变(VH)区当与包含SEQ ID NO:29中所示的序列的重链可变(VH)区相比时在CDR序列之一中具有氨基酸置换，所述置换处于选自下组的位置：T31、N57、H101、G105、S110和Y114，所述位置根据SEQ ID NO:29的序列进行编号；并且所述野生型轻链可变(VL)区包含分别在SEQ ID NO:27、GTN和SEQ ID NO:28中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列。36.根据权利要求26至35中任一项所述的抗体，其中所述结合CD3的抗原结合区的重链可变(VH)区的CDR1、CDR2和CDR3当与SEQ ID NO:29中所示的序列的CDR1、CDR2和CDR3相比时总共包含至多1、2、3、4或5个氨基酸置换。37.根据权利要求26至35中任一项所述的抗体，其中所述结合CD3的抗原结合区在VH区中包含选自下组的突变：T31M、T31P、N57E、H101G、H101N、G105P、S110A、S110G、Y114M、Y114R、Y114V。38.根据权利要求25至36中任一项所述的抗体，其中所述能够结合CD3的抗原结合区包含含有分别具有如SEQ ID NO:23、24和31中所示的序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区(VH)，以及含有分别具有如SEQ ID NO:27中所示的序列、序列GTN以及如SEQ ID NO:28中所示的序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区(VL)。39.根据权利要求26、27、29至38中任一项所述的抗体，其中所述能够结合CD3的抗原结合区包含含有SEQ ID NO:32中所示的序列的重链可变区(VH)以及含有SEQ ID NO:30中所示的序列的轻链可变区(VL)。40.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是包含能够结合人ROR2的第一抗原结合区和能够结合人CD3的第二结合区的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合区包含：分别具有如SEQ ID NO:3、4和5中所示的序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3，以及分别具有如SEQ ID NO:7、8和9中所示的序列的轻链可变(VL)区CDR1、CDR2和CDR3；并且所述第二抗原结合区包含：分别具有如NO.:23、24和25中所示的序列的重链可变(VH)区CDR1、CDR2和CDR3；[抗CD3
(SP34/人源化SP34，WO2015001085(Genmab))
‑
VH CDR序列]，以及包含分别为SEQ ID NO:27、GTN和28的CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区(VL)。41.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其是包含能够结合人ROR2的第一抗原结合区和能够结合人CD3的第二结合区的双特异性抗体，其中所述第一抗原结合区包含：分别具有如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：健玛保，
类型：发明
国别省市：