PD-L1蛋白抗体、试剂盒和用途制造技术

本发明专利技术属于分子免疫学领域。具体地，涉及一种特异性靶向PD

【技术实现步骤摘要】
PD
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L1蛋白抗体、试剂盒和用途


[0001]本专利技术属于分子免疫学领域。具体地，涉及一种特异性靶向PD
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L1蛋白的抗体，及包括该抗体试剂盒以及其用途。

技术介绍

[0002]PD
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1是表达在活化的T细胞，B细胞，巨噬细胞，调节性T细胞(Tregs)和自然杀伤性(NK)细胞上的抑制受体。它有两个结合配体
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正常细胞上表达的PD
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L1和PDL
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2(B7家族)，PD
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1与任一配体的结合均会抑制T细胞活性，诱导T细胞耐受，抑制增殖，降低T细胞的免疫反应并诱导细胞死亡，从而阻止免疫细胞活化杀伤正常细胞。恶性肿瘤利用了这一机制，它在表面大量表达PD
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L1/2，减少T细胞激活和抗原特异性T细胞免疫应答，从而绕过免疫监视。因此，阻断PD
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1和PD
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L1/2的结合，就能够激活T细胞的杀伤功能，从而杀伤肿瘤细胞。FDA批准了首个抗PD
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1单克隆抗体Keytruda，紧接着批准nivolumab，成为恶性肿瘤当之无愧的明星产品。至2021年已有近10种抗
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PD
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1和抗PD
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L1的抗体药物走向临床。与治疗癌症的其他方法相比，免疫治疗最大的优势就是它借助的是免疫系统的能力，除了比放射、化疗、手术等传统方法更加安全以外，它还能对特定的肿瘤形成适应性和特异性，形成类似抗原的持久记忆力，这对于防止肿瘤复发有重要的意义。
[0003]然而目前免疫治疗仍然面临难题，主要包括：(1)抗PD
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1/L1治疗诱导的免疫相关不良事件(irAEs)，例如脑膜神经根炎，多发性神经根炎，心律不齐等。有报道称PD
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1抑制剂pembrolizumab引起心肌炎和急性心力衰竭。(2)非特异性生物标志物，PD
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L1的表达是一种经过验证且重要的预测生物标志物。然而仅此是不够的，仅凭此不足以确定哪些患者可以接受PD
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1/L1阻断治疗。肿瘤表达最高水平的PD
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L1/2是对治疗最好的应答这一假说也尚未得到肯定。而目前临床普遍采用的是以PD
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L1的表达水平作为筛选患者的生物学标志物，完全无法满足临床需求。研究证实，PD
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L1表达水平作为预测抗PD
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1/L1治疗敏感性的指标，预测效力不足60％，高PD
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L1表达的患者部分对抗PD
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1/L1治疗无效甚至促进肿瘤进展。此外，MSI和dMMR被认为是抗PD
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1/L1抗体反应的预测性生物标志物，然而，这也是不够的，因为它们在许多癌症中经常被观察到，缺乏特异性。(3)PD
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1抑制剂的成本效益，从经济角度看，PD
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1阻断单一疗法通常比其他免疫疗法和常规癌症疗法更昂贵，患者经济压力巨大。基于以上原因，筛选出可能对抗PD
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1/L1治疗有效的人群尤为重要，可以减少患者不必要的治疗和承受副作用的风险，减轻患者经济负担。
[0004]因此，本领域需要一种产品，其能够作为一种新型的免疫检查点抑制剂，并且灵敏度高特异性好，为癌症的检测和/或治疗提供更多额外的选择。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种分离的PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。轻链可变区的互
补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。
[0006]本专利技术通过杂交瘤技术筛选到一株抗PD
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L1蛋白特异性的杂交瘤，制备小鼠腹水并纯化抗体，得到能够特异性结合PD
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L1蛋白的鼠源性单克隆抗体(mAb)，该抗体对PD
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L1蛋白具有较高的亲和力，同时具有靶向PD
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L1蛋白的能力。其Kd值为1.15*10
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10
M。
[0007]优选地，所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的重链可变区FR1
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FR4具有如SEQ ID NO.4～7所示的氨基酸序列。轻链可变区FR1
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FR4具有如SEQ ID NO.12～15所示的氨基酸序列。
[0008]优选地，所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的重链可变区具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。轻链可变区具有如SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。
[0009]进一步优选地，所述抗PD
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L1蛋白抗体为鼠源单克隆抗体。
[0010]本专利技术中，所述抗原结合片段可选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异抗体或多特异抗体。
[0011]本专利技术提供含有所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的双特异抗体或多特异抗体。
[0012]基于上述抗体，本专利技术提供一种核酸分子，其编码所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段。
[0013]根据上述提供的抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列，本领域技术人员可以确定编码所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的核酸分子的核苷酸序列，并根据宿主细胞的密码子偏好性选择不同的核酸分子的核苷酸序列。
[0014]本专利技术还提供一种生物材料，其含有编码所述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的核酸分子，所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。
[0015]以上所述的表达盒是指将所述核酸分子的上游或下游连接用于转录、翻译的调控元件得到的重组核酸分子。
[0016]以上所述的载体是指可将核酸分子插入其中的一种核酸运载工具，包括但不限于质粒、人工染色体、噬菌体、动物病毒等，可以为表达载体，也可以为克隆载体或非复制型载体。
[0017]以上所述的宿主细胞可以为微生物细胞(如：大肠杆菌、酵母细胞等)或动物细胞(如：昆虫细胞、CHO细胞、BHK细胞，HEK293细胞等用于表达、制备抗体的细胞)，其中，动物细胞为不能够繁殖成为动物个体的细胞。
[0018]基于上述抗PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段的功能，本专利技术提供所述抗PD
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；轻链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的分离的PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其重链可变区FR1
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FR4具有如SEQ ID NO.4～7所示的氨基酸序列，轻链可变区FR1
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FR4具有如SEQ ID NO.12～15所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的分离的PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，轻链可变区具有如SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。4.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1～3中任一项所述的分离的PD
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L1蛋白抗体或其抗原结合片段。5.生物材料，其特征在于，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王桂华，黄昌胜，李润清，华紫秀，李娜，王学齐，
申请(专利权)人：武汉百英诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：