本发明专利技术涉及生物检测技术，具体地说涉及水稻细菌性谷枯病菌检测用培养基。本发明专利技术提供的水稻细菌性谷枯病菌检测用培养基，在水稻细菌性谷枯病菌生长或选择性分离培养基中添加水稻叶汁和胡萝卜汁中的至少一种。本发明专利技术采用的用于水稻细菌性谷枯病菌培养基，显著地提高了水稻细菌性谷枯病菌的检出率和检出速度，为菌种的复活培养和水稻材料的生物安全检疫提供了保证。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测技术，具体地说涉及水稻细菌性谷枯病菌检测用培养基。
技术介绍
水稻细菌性谷枯病(Bacterial grain rot of rice)是由颖壳伯克氏菌 (Burkholderiaglumae)引起，是近年来一种危害严重的水稻种传病害，它不但侵害谷粒，而 且还引起水稻秧苗腐烂，造成水稻的严重减产和损失。种子带菌是该病菌远距离传播的主 要途径，播种带菌病谷粒，遇有适宜的发病条件，如高温多日照，降雨量少易发病。病菌可通 过气孔和伤口侵入，病菌在植株体内繁殖，在细胞间扩散，引起叶鞘薄壁组织的分解。 1970年代后期由于推行机械化生产而进行大面积的工厂化育秧，导致B. glumae 引起的水稻苗腐病大流行，目前该病已成为日本水稻最严重的病害之一，并造成传播流行。 目前水稻细菌性谷枯病已经蔓延到印度尼西亚、泰国、越南、韩国、斯里兰卡、马来西亚、菲 律宾等东南亚国家及南美洲的哥伦比亚等国。非洲的坦桑尼亚及美国的路易安那洲相继报 告有该病发生。Shahjahan等报道该病在美国可导致15 80X的产量损失。我国台湾地 区1983年也有水稻细菌性谷枯病的发生报道并在病原及品种抗性方面做过一些研究。也 曾有报道我国贵州省有细菌性谷枯病的发生，但未得到进一步的证实。 日本、韩国、美国、越南等国已有多起细菌性谷枯病分离和危害的报道。日本和 韩国由于Burkholderia glumae对水稻的危害严重，在病原和危害发生等方面进行了较 多的石开究。1986年Tushima S. ， S. Wakimoto，等在Selective medium for detecting Pseudomonasglumae Kurita et Tabei， the causal bacterium of grain rot of rice 一文中报道研究了检测Burkholderia glumae的S-PG选择性培养基；2000年，Mitsuo K， Kiyotsugu. O等在New Selective Medium for Isolation of Burkholderia glumae from Rice Seeds—文中报道了研究用于分离Burkholderia glumae的CCNT选择性培养基；2004 年xianglong yuan等在Indentif ication of bacterial pathogens causing panicle blightof rice in louisiana—书中应用KBA培养基对水稻细菌性谷枯病菌进行分离培 养，并采用Biolog微生物鉴定系统、传统生化试验、致病性测定对谷枯病菌进行鉴定，罗金 燕等在水稻细菌性谷枯病病原菌分离鉴定一文中采用脂肪酸测定、Biolog微生物鉴定系统 以及RAPD-PCR等方法对水稻细菌性谷枯病菌进行了鉴定，刘友勋等在水稻细菌性条斑病 菌致病型鉴别品种的筛选一文中采用PSA培养基对植物病原菌进行了培养。但对于用于添 加至培养基中增快培养速度和增加检出率的增效因子并无相关报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供用于水稻细菌性谷枯病菌培养基中添加水稻叶汁(以下用D 表示)和胡萝卜汁(以下用C表示)中的至少一种，达到水稻细菌性谷枯病菌在培养基上 的生长速度加快和增加检出率。 本专利技术提供的水稻细菌性谷枯病菌检测用培养基，在水稻细菌性谷枯病菌生长或选择性分离培养基中添加水稻叶汁和胡萝卜汁中的至少一种。 本专利技术发现，通过加入水稻叶汁和胡萝卜汁中的至少一种，能增快水稻细菌性谷 枯病菌在培养基上的生长速度，提高检出率。 根据本专利技术的实施例，同时加入水稻叶汁和胡萝卜汁时，有增敏效果。 根据本专利技术的实施例优选的添加的水稻叶汁或/和胡萝卜汁的浓度是1-5% 。 添加的水稻叶汁或/和胡萝卜汁的终浓度大于上述浓度，并没有不利影响，同样具有增敏的作用，只是从实用的角度看，不需要更大的浓度。其中，上述浓度中又以2.5%为最佳。 水稻叶汁和胡萝卜汁的制备方法非常简单，即通过打碎水稻叶或胡萝卜后，经过过滤除菌后，即可得到水稻叶汁或胡萝卜汁。选择在4t:冷藏备用。当然，可以根据本专利技术的增效因子组装成培养基试剂盒，以方便使用。 本专利技术采用的用于水稻细菌性谷枯病菌培养基，显著地提高了水稻细菌性谷枯病菌的检出率和检出速度，为菌种的复活培养和水稻材料的生物安全检疫提供了保证。具体实施例方式下面实施例用于对本专利技术的进一步说明，但不用来限制本专利技术的范围。 实施例1 增效因子的提取和培养基制备。 水稻叶汁的制备取新鲜水稻叶剪碎后按照质量比1 : 2添加蒸馏水后榨汁机榨 汁，O. 45 ii m滤膜过滤除菌后4t:冷藏备用。以下简称D。 胡萝卜汁的制备直接将新鲜胡萝卜榨汁机榨汁后，0.45ym滤膜过滤除菌后4t: 冷藏备用。以下简称C。 PS液体培养基配方(生长培养基的一种) 酵母粉 lg 牛肉浸膏 3g 蛋白胨 5g 蔗糖 15g 蒸馏水 1L 以上成份充分混合后调节ra至7. 2，分装50mL每瓶，115"灭菌15min后备用。 向灭菌后的PS液体培养基(生长培养基)中添加D、C以及两者的混合物D+C(体 积比为2 : l)，制备成液体培养基。 向灭菌后温度为53t:左右的PSA平板中添加过滤除菌的D、 C以及两者的混合物 (体积比2 : 1)，倾注平板，表面晾干备用，PSA培养基在PS液体培养基中添加18g细菌琼 脂粉即可。 向灭菌后温度为53t:左右的S-PG选择性琼脂和CCNT选择性琼脂中添加过滤除菌 的D、C以及两者的混合物(体积比2 : l)，倾注平板，表面晾干备用。 水稻细菌性谷枯病菌鉴定方法 采用Biolog微生物鉴定系统方法进行水稻细菌性谷枯病菌的鉴定。本方法所使用的Biolog微生物鉴定仪型号为BIOLOG ELX808BLG，微生物鉴定板为biolog GN2鉴定板。将水稻细菌性谷枯病菌疑似菌落接种至Biolog鉴定系统专用BUG 平板培养基上进行富集培养，28 °C ± 1°C培养24小时后，并挑取BUG上的单个菌落再次转接 BUG培养基，使其性状充分表达以适合Biolog鉴定。用灭菌棉签挑取取BUG上二次培养的 菌落接种至GN/GP-IF接种液，并调节菌悬液浓度至目标浊度为52% ±2，并静止放置5分 钟。接种调节好菌浓度的接种液至GN2微生物鉴定板中，每孔接种菌液150 L。将接种完 成的微孔板放置于28°C ± 1°C中保湿培养24小时后使用Biolog微生物自动鉴定系统进行鉴定分析。 实施例2 增效因子在PSA摇瓶培养基中的增效作用。 用3mm接种环挑取将4t:保存4周的水稻细菌性谷枯病菌，在装有1ml灭菌PBS的 试管中涂抹均匀，取50 L接种至添加有终浓度为2. 5% (v/v)的实例1中不同植物提取物 的50ml PS液体培养基中，并接种未添加植物提取物的PS液体培养基做阳性对照(CK)，同 时以未接种水稻细菌性谷枯病菌的PS液体培养基作为阴性对照，28t: ±rC 180rpm振荡 培养，4小时后开始每1小时无菌条件下取菌液涂布5个PSA琼脂平板进行计数，液体培养 基继续培养，至菌液生长24小时，取平均值并记录试验结果。 取培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
水稻细菌性谷枯病菌的检测用培养基，其特征在于在水稻细菌性谷枯病菌生长或选择性分离培养基中添加水稻叶汁和胡萝卜汁中的至少一种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱金国，莫瑾，
申请(专利权)人：湖南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]
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