EGFRvIII嵌合抗原受体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合EGFRvIII的新型嵌合抗原受体以及其用途。合抗原受体以及其用途。

【技术实现步骤摘要】
EGFRvIII嵌合抗原受体及其用途
[0001]本专利技术一般地涉及被工程化以表达EGFRvIII嵌合抗原受体(CAR)的T细胞用于治疗与EGFRvIII的表达相关的疾病的用途。
[0002]专利技术背景
[0003]胶质母细胞瘤(Glioblastoma，GBM)是人类最常见、最具侵袭性的原发性恶性脑肿瘤，大多数病例恶性程度比较高。由于高发病率、高死亡率和低治愈率，GBM在世界范围内造成了巨大的社会和医疗负担，而且几乎无法用传统的治疗方法治愈，因此患者总体生存期很不理想。具体而言，目前现有的标准化治疗策略，是最大安全限度的手术切除肿瘤，术后同步放疗和化疗，以及随后六个月的替莫唑胺辅助化疗的标准治疗方案。然而，患者平均生存期仅为14.6个月。
[0004]嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法是一种新兴的免疫疗法，可治疗包括胶质母细胞瘤在内的多种恶性肿瘤。表达GBM特异性嵌合抗原受体(CAR)的T细胞的免疫疗法提供了一个有希望的治疗平台，因为它有可能专门针对肿瘤组织，同时保留正常大脑。实体瘤免疫治疗面临的挑战包括正常细胞组织表达肿瘤靶抗原、血脑屏障等因素限制CAR
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T细胞向肿瘤部位的运输、以及CAR
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T细胞作用于肿瘤部位有时缺乏长期持久性。
[0005]有一些表达嵌合抗原受体(CAR)的转基因T细胞在临床前模型中一定程度上显示出治疗胶质瘤的效果，但早期临床测试显示抗胶质瘤活性有限，这些CAR
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T细胞针对的靶标是IL13受体亚单位α2(IL13Rα2)、HER2和EGFR变体III(EGFRvIII)或EPH受体A2(EphA2)。而我们尝试使用基于EGFRvIII的嵌合抗原受体构建体在免疫缺陷的正位胶质母细胞瘤小鼠模型中解决这些问题。
[0006]III型EGF缺失突变受体(EGFRvIII)在多种肿瘤类型中均有表达，包括多形性胶质母细胞瘤(GBM)，但在正常组织中很少观察到。EGFRvIII在24％至67％的GBM病例和存活患者中表达≥1年后，EGFRvIII的表达是一个独立的不良预后指标。
[0007]尽管中枢神经系统(CNS)通常被认为具有免疫屏障，但最近对恶性胶质瘤患者的疫苗研究取得了积极的结果。然而，依赖于完整的宿主免疫活性的疫苗效力，可能由于免疫抑制细胞因子的肿瘤表达以及化疗和放疗而受到全身免疫抑制。另一方面，用自体T细胞，特别是用嵌合抗原受体(CARs)转导的T细胞进行过继性细胞转移(ACT)治疗，在血液学癌症试验中显示出良好的前景。自2017年以来，以CD19为靶点的CAR
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T疗法已被FDA批准用于临床应用，这是癌症基因治疗领域的又一重大突破(https://www.fda.gov/)最近，首次通过嵌合抗原受体(CAR)将单剂量自体T细胞重新定向到EGFRvIII的人体内静脉输注研究报告，制造和输注CAR修饰的T细胞(CART)
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EGFRvIII细胞是可行和安全的，没有肿瘤外毒性或细胞因子释放综合征的证据。临床试验的一名患者在18个月的随访中有残留的稳定疾病。
[0008]我们构建了第三代嵌合抗原受体(CAR)T细胞，表达表皮生长因子受体EGFRvIII的肿瘤特异性突变和共刺激CD28BBζ内域，并在体外和体内评估了效应器功能。在细胞毒性试验中，CAR T细胞杀死EGFRvIII阳性细胞，与体外和体内未转化的T细胞相比，EGFRvIII阳性细胞促进CAR T细胞活化。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术针对EGFRvIII构建了第三代CAR。
[0011]因此，在一些方面，本专利技术涉及结合EGFRvIII的嵌合抗原受体，以及包含其的T细胞。
[0012]在一些方面本专利技术还涉及编码所述嵌合抗原受体的核酸、包含其的表达载体、病毒和T细胞。
[0013]本专利技术还涉及包含嵌合抗原受体的T细胞的用途，用于治疗肿瘤，优选地所述肿瘤高表达EGFRvIII，更优选地所述肿瘤是胶质瘤，最优选地所述肿瘤是胶质母细胞瘤。
[0014]在一些实施方案中，提供了一种分离的的嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体从其N端到C端包含顺序连接的：胞外结合区，铰链区/间隔区，跨膜区和包含共刺激结构域和刺激信号结构域的胞内信号区，其中所述胞外结合区结合EGFRvIII。
[0015]在一些实施方案中，所述胞外结合区包含重链可变区VH和/或轻链可变区VL，其中所述重链可变区包含互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些具体的实施方案中，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3是氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示或如与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列所示的重链可变区的3个互补决定区，和/或所述LCDR1、LCDR2和LCDR3是氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示或如与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列所示的轻链可变区的3个互补决定区。在一些具体的实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含与SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。在一些具体的实施方案中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含与SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6相比具有不超过3个氨基酸变化、不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的序列。
[0016]在一些实施方案中，所述胞外结合区包含重链可变区VH，所述VH包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0017]在一些实施方案中，所述胞外结合区包含轻链可变区VL，所述VL包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:8的序列或与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0018]在一些实施方案中，所述胞外结合区包含重链可变区VH和轻链可变区VL，其中所述VH包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，且所述VL包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:8的序列或与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0019]在一些实施方案中，所述结合EGFRvIII的胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离的嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体从其N端到C端包含顺序连接的：胞外结合区，铰链区/间隔区，跨膜区和包含共刺激结构域和刺激信号结构域的胞内信号区，其中所述胞外结合区结合EGFRvIII，优选地，胞外结合区包含重链可变区VH和/或轻链可变区VL，其中所述重链可变区包含互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，更优选地，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3是氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示或如与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列所示的重链可变区的3个互补决定区，和/或所述LCDR1、LCDR2和LCDR3是氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示或如与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列所示的轻链可变区的3个互补决定区，最优选地，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含与SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的序列。2.权利要求1的嵌合抗原受体，其中所述胞外结合区包含重链可变区VH和/或轻链可变区VL，所述VH包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；所述VL包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:8的序列或与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。3.如权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其中所述结合EGFRvIII的胞外结合区是抗体或其抗原结合片段，例如scFv，优选地所述scFv包含VH和VL，优选地，其中所述VH包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:7的序列或与SEQ ID NO:7具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，且所述VL包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：SEQ ID NO:8的序列或与SEQ ID NO:8具有80％、85％、90％、93％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，任选地，所述VH和VL之间通过接头连接，优选地，所述接头的序列是如SEQ ID NO:11或12所示的序列或与其具有至少80％同一性的序列。4.如权利要求1
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3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述的跨膜区包含CD28跨膜结构域，CD4跨膜结构域和/或CD8跨膜结构域，优选地，跨膜区包含如SEQ ID NO:15
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17任一项所示的序列或与其具有至少80％同一性的序列，任选地，所述跨膜区经由铰链区连接至胞外结合区。5.如权利要求1
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4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中，所述的胞内信号区包含CD3ζ的信号传导结构域和共刺激结构域，优选地，所述CD3ζ信号传导结构域包含SEQ ID NO:20所示的序列或与之具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列或由其组成，优选地，所述共刺激结构域是从4
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1BB(CD137)蛋白得到的功能性信号传导结构域，或从CD28蛋白得到的功能性信号传导结构域，或优选地，所述共刺激结构域包含源自CD28和4
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1BB的两者，优选地，所述4
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1BB(CD137)信号传导结构域包含SEQ ID NO:19所示的序列或与之具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基酸序列或由其组成，优选地，所述CD28信号传导结构域包含SEQ ID NO:18所示的序列或与之具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晓松，白玥，
申请(专利权)人：卡瑞济北京生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：