烟酰胺单核苷酸延长CAR-T细胞寿命的用途制造技术

本发明专利技术一般涉及CAR

【技术实现步骤摘要】
烟酰胺单核苷酸延长CAR
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T细胞寿命的用途


[0001]本专利技术涉及CAR
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T细胞免疫疗法领域，具体地，本专利技术涉及具有增强的功效和寿命的CAR
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T细胞，烟酰胺单核苷酸增强CAR
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T细胞功效和寿命的用途。此外，本专利技术还涉及这些细胞以及烟酰胺单核苷酸在治疗肿瘤中的用途。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体 T (CAR
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T) 细胞疗法被认为是治疗复发或难治性肿瘤，特别是血液系统恶性肿瘤的有效解决方案。然而，用CAR
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T细胞疗法治疗肿瘤存在多重挑战，例如T细胞持久性差、细胞衰老、T细胞耗竭等，使得肿瘤的长期缓解仍不常见，并且多数患者容易复发。细胞衰老的特征是端粒酶长度减少、β
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半乳糖苷酶聚集和细胞凋亡增加。提高CAR
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T细胞的持久性对其体内功效至关重要，这是由CAR
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T细胞的增殖能力和细胞死亡共同决定的。
[0003]端粒是由数千个碱基的TTAGGG重复组成的核蛋白复合物，位于真核生物染色体的末端，可保护染色体的稳定性。端粒长度已被证明是衰老的一个重要特征。
[0004]细胞衰老是细胞周期调控下多基因参与的复杂的生理病理过程，衰老细胞有着显著的特性，其细胞通常体积变大，β
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半乳糖苷酶（SA
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β
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Gal）是典型的衰老生物标志物，其在衰老细胞中的表达明显增加。通过检测SA
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β
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gal可以在普通的光学显微镜下观测细胞或组织的衰老情况。细胞凋亡是细胞衰老的重要指标之一。
[0005]NMN（烟酰胺单核苷酸）是NAD+（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）的前体，是一种具有生物活性的核苷酸，由磷酸基团与含有核糖和烟酰胺的核苷反应形成。已知NMN可促进细胞NAD+的产生并抵消与组织NAD+水平下降相关的与年龄相关的病理，包括心血管疾病、神经退行性疾病、代谢疾病等。衰老与细胞NAD+耗竭有关，新证据表明，在小鼠中全身性NMN给药有效地增强了各种外周组织中NAD+的生物合成。NAD+在调节NAD+消耗酶
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sirtuins的活性方面也具有关键作用，这些酶与细胞衰老过程的调节有关。在老年小鼠中，通过NMN治疗增强NAD+生物合成可逆转多个器官中与年龄相关的功能障碍，包括眼睛、骨骼肌和外周动脉。
[0006]Sirtuins是一个进化上保守的NAD+依赖性去乙酰酶和ADP
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核糖基转移酶家族，在多种生物活动中发挥重要作用。但是，Sirtuins仅在存在于所有活细胞中的NAD+存在下才能发挥功能。哺乳动物Sirtuins家族成员共有7个(SIRT1
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7)，其主要具有去乙酰化酶的活性，可以使多种蛋白发生去乙酰化，进而参与DNA的损伤修复、基因的转录调控、细胞凋亡、代谢及衰老等诸多生物进程。其中，Sirt1是研究最深入的NAD+依赖性去乙酰酶，在广泛的生物事件中发挥关键作用，包括新陈代谢、免疫反应和衰老。Sirt1可调节多种细胞和有机体过程，包括新陈代谢和衰老。早期报告表明，Sirt1在许多正常和异常生理过程中发挥重要作用，例如热量限制相关的长寿、新陈代谢、DNA损伤反应 (DDR)、衰老和肿瘤发生。
[0007]T细胞是适应性免疫系统的一部分，其特点是能够发起对某些抗原高度特异性的免疫反应并导致免疫记忆的形成。T细胞亚群是T细胞分化的重要指标，其中T记忆干细胞（Tscm）代表一小群具有增强的增殖和分化特征的Tcm细胞，其具有优越的自我更新能力、长寿和增殖潜力，认为长期免疫的维持依赖于Tscm，这对癌症免疫治疗具有重要意义。中央记
忆型T细胞（Tcm）可以迅速触发效应功能，杀死受感染的细胞并分泌炎性细胞因子，在过继转移后在体内具有更好地抗肿瘤能力。在二次抗原暴露后，由于抗原特异性Tcm能够分化成效应T细胞，因此认为Tcm是维持和扩大T细胞免疫的主要介质。因此，增加Tscm和Tcm在CAR
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T细胞中的比例是增强抗原免疫反应的一个重要方面。
[0008]在目前的CAR
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T细胞疗法中，仍然迫切需要提高CAR
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T细胞的治疗效果，尤其是迫切需要提高对血液系统恶性肿瘤的治疗效果。本专利技术满足了这些需求。
[0009]在本专利技术中，申请人发现NMN可以通过上调 Sirt1 来促进CD19 CAR
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T细胞复壮和增殖，延长了CD19 CAR
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T细胞的寿命，同时维持了CD19 CAR
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T细胞的功能，从而在有利地提高了CAR
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T细胞在临床上的治疗功效。

技术实现思路

[0010]第一方面，本专利技术提供了一种延长CAR
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T细胞寿命、改善CAR
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T细胞增殖能力的方法，包括用NMN处理所述CAR
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T细胞。
[0011]在一个实施方案中，本专利技术提供了一种增加Tscm和Tcm在CAR
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T细胞中的比例的方法，包括用NMN处理所述CAR
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T细胞。
[0012]在一个实施方案中，所述NMN处理是指将NMN与所述CAR
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T细胞共孵育至少12、至少24、至少36、至少48小时。在一个具体的实施方案中，将NMN与所述CAR
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T细胞共孵育至少24小时。
[0013]在一个具体实施方案中，使用10μM
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1mM的NMN处理所述CAR
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T细胞。
[0014]在一个具体实施方案中，使用10μM
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100μM的NMN处理所述CAR
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T细胞。
[0015]在一个具体实施方案中，所述CAR
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T细胞来源于将接受使用基因修饰的T细胞治疗的受试者，或者来源于不同的受试者“衍生”或“获得”。
[0016]在一个具体实施方案中，所述CAR
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T细胞是CD19
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CAR
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T细胞。
[0017]第二方面，本专利技术提供了NMN在制备用于延长CAR
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T细胞寿命、改善CAR
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T细胞增殖能力、或提高Tscm和Tcm在CAR
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T细胞中的比例的药物中的用途。
[0018]在一个实施方案中，本专利技术提供了NMN在制备用于增强CAR
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T细胞免疫疗法疗效的药物中的用途。
[0019]在一个具体实施方案中，使用10μM
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1mM的NMN处理所述CAR
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T细胞。在一个具体实施方案中，使用10μM
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100μM的NMN处理所述CAR
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.NMN在制备用于延长CAR
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T细胞寿命、改善CAR
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T细胞增殖能力的药物中的用途。2.NMN在制备用于提高CAR
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T细胞中Tscm和Tcm比例的药物中的用途，其中所述Tscm和Tcm分别占CAR
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T细胞群的3.37%和0.9%。3.NMN在制备用于增强CAR
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T细胞免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晓松，白玥，
申请(专利权)人：卡瑞济北京生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：