麝香提取物及其增强CAR-T细胞疗效的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种麝香提取物，及其辅助和/或联合CAR

【技术实现步骤摘要】
麝香提取物及其增强CAR
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T细胞疗效的应用


[0001]本专利技术涉及细胞治疗领域。具体地，本专利技术涉及一种麝香提取物辅助和/或联合CAR
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T细胞治疗肿瘤的方法和相应的用途。

技术介绍

[0002]胶质母细胞瘤(Glioblastoma，GBM)是人类最常见、最具侵袭性的原发性恶性脑肿瘤，大多数病例恶性程度比较高。由于高发病率、高死亡率和低治愈率，GBM在世界范围内造成了巨大的社会和医疗负担，而且几乎无法用传统的治疗方法治愈，因此患者总体生存期很不理想。具体而言，目前现有的标准化治疗策略，是最大安全限度的手术切除肿瘤，术后同步放疗和化疗，以及随后六个月的替莫唑胺辅助化疗的标准治疗方案。然而，患者平均生存期仅为14.6个月。
[0003]因此，有必要开发治疗GBM的新方法，以改善GBM患者的预后。
[0004]嵌合抗原受体（Chimeric antigen receptor，CAR）是一种人工合成的分子，其通过特异性识别肿瘤细胞表面表达的抗原来引导经基因工程化以表达CAR的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞)清除肿瘤(Sampson JH, Choi BD, Sanchez
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Perez L等人, EGFRvIII mCAR
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modified T
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cell therapy cures mice with established intracerebralglioma and generates host immunity against tumor
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antigen loss. Clinical cancer research: an official journal of the American Association for Cancer Research. 2014; 20(4):972
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984)。例如，嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)是通过T细胞上的嵌合抗原受体(CAR)分子直接靶向肿瘤细胞的表面抗原，从而达到识别和杀伤肿瘤的目的，其中所述嵌合抗原受体的N端包含识别抗原的胞外域。当所述CAR
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T细胞针对的抗原阳性细胞存在时，CAR
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T细胞能识别并杀伤这些抗原阳性细胞。对于血液系统恶性肿瘤，CAR
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T细胞疗法已经得到了一些比较理想的效果，例如靶向CD19的CAR
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T细胞疗法已经治愈或近乎治愈了一些白血病或淋巴瘤患者。因此，人们积极地希望将其推广到实体瘤治疗领域，例如胶质瘤，但是经过多次尝试，仍然没有获得足够理想的结果。究其原因，可能与T细胞向肿瘤组织的迁移效率低、T细胞的存活及扩增不足、免疫抑制的肿瘤微环境等因素有关。此外，胶质瘤还可借助血脑屏障的保护，逃避CAR
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T细胞的杀伤作用。例如，如果将CAR
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T全身给药，能够通过血脑屏障到达肿瘤局部的细胞数量非常有限；而如果直接将CAR
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T细胞注射到脑脊液中，例如颅内注射或鞘内注射，则增大了实施难度，并带来了不必要的风险，例如颅内感染和中枢神经系统中的细胞因子风暴。
[0005]迫切地需要一种CAR
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T细胞的增效剂，尤其是对于靶向胶质瘤的CAR
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T细胞疗法。

技术实现思路

[0006]本专利技术利用麝香提取物，其中保留了麝香酮和麝香多肽等在内的多种关键活性成分，研究对CAR
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T类细胞的活性和入脑的作用。并出人意料地发现，麝香提取物具有增强CAR
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T细胞杀伤肿瘤的疗效的活性，并且具有增强CAR
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T细胞到达肿瘤区域（例如跨过血脑
屏障到达胶质瘤组织）能力的活性，后者可能是作为前者的一部分，也可能与前者是独立的关系。
[0007]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种麝香提取物，其特征在于，通过以下方式制备：将麝香粉末按每1mg麝香粉末溶于100μL溶剂的比例，溶于无菌PBS或DMSO中，超声1小时，随后离心取上清，即为麝香提取物。在一个具体的实施方案中，离心条件为12000rpm离心5min。在一个优选的实施方案中，取1mg 麝香粉末加入100 μL无菌PBS（或DMSO），常规用超声破碎仪设置90W功率进行超声1h；再取1 mg麝香粉末，加100 μL PBS，如前超声1h，随后12000rpm离心5min并合并上清提取液，即2 mg麝香粉末共得200 μL提取液。在一个具体的实施方案中，上清液中的麝香酮的含量不低于约20 μg/mL。在一个优选的实施方案中，上清液中的麝香酮的含量不低于约25 μg/mL、约30 μg/mL、约40 μg/mL或约50 μg/mL。
[0008]在第二个方面，本专利技术提供了本专利技术第一方面的麝香提取物的用途，用于制备CAR
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T细胞疗法的疗效增强剂。在一个具体的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对血液系统肿瘤。在另一个具体的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对实体瘤。在一个优选的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对胶质细胞瘤。在一个优选的实施方案中，所述CAR
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T细胞的嵌合抗原受体的靶分子是IL
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13Rα、EphA2或EGFRvIII（III型EGF缺失突变受体）。
[0009]在一些具体的实施方案中，所述疗效增强剂促进CAR
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T细胞分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞。在另一些具体的实施方案中，所述疗效增强剂增强CAR
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T细胞对靶细胞的直接杀伤作用。在一些优选的实施方案中，所述疗效增强剂增强CAR
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T细胞到达肿瘤区域的能力而作为疗效增强剂。在一些更优选的实施方案中，所述疗效增强剂促进CAR
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T细胞透过血脑屏障而使得更多CAR
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T细胞到达脑内肿瘤（例如，胶质细胞瘤）区域，即，所述疗效增强剂的作用至少包括增加透过血脑屏障的CAR
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T细胞的数量。在优选的实施方案中，所述疗效增强剂促进通过静脉、腹腔等全身性途径施用的CAR
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T细胞进入颅内，从而避免了直接颅内/脑室内给药的副作用和/或风险。
[0010]在第三个方面，本专利技术提供了一种组合物，其包含本专利技术第一方面的麝香提取物，所述组合物用作CAR
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T细胞疗法的疗效增强剂。在一个具体的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对血液系统肿瘤。在另一个具体的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对实体瘤。在一个优选的实施方案中，所述CAR
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T细胞疗法针对胶质细胞瘤。在一个优选的实施方案中，所述CAR
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T细胞的嵌合抗原受体的靶分子是IL
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种麝香提取物，其特征在于，通过以下方式制备：将麝香粉末按每1mg麝香粉末溶于100μL溶剂的比例，溶于无菌PBS或DMSO中，超声1小时，随后离心取上清，即为麝香提取物。2.如权利要求1所述的麝香提取物，其特征在于，其中麝香酮的含量不低于20μg/mL。3.权利要求1所述的麝香提取物的用途，其特征在于，用于制备CAR
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T细胞疗法的疗效增强剂。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述CAR
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T细胞疗法针对血液系统肿瘤。5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述CAR
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T细胞疗法针对实体瘤。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述实体瘤是胶质细胞瘤。7.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述CAR
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T细胞疗法针对胶质细胞瘤，并且所述疗效增强剂的作用至少包括增加透过...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟晓松，黄帅，
申请(专利权)人：卡瑞济北京生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：