一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及DNA提取领域，具体而言，涉及一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法，可用于常规PCR扩增和荧光定量PCR。本发明专利技术提供的全血基因组DNA快提取试剂盒，包括独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B；所述红细胞裂解液包括如下组分：浓度为155mM的NH4Cl，浓度为12mM的NaHCO3，和浓度为0.1mM EDTA；所述Solution A包括如下组分：浓度为0.2M的NaOH；所述Solution B包括如下组分：浓度为1M pH 7.8的Tris

【技术实现步骤摘要】
一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及DNA提取领域，具体而言，涉及一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法，可用于常规PCR扩增和荧光定量PCR。

技术介绍

[0002]随着分子生物学技术快速发展，基因组水平上的研究已成为研究热点。分子生物学中很多实验都涉及到基因组DNA提取，基因组DNA提取作为分子实验中最基础的实验之一，常规PCR扩增、荧光定量PCR和文库构建等实验都需要提取DNA，随着现代诊断技术和精准医疗的蓬勃发展，需要处理的样品量日益增多，因此高效DNA提取方法成为相关研究领域的迫切需求。
[0003]目前基因组DNA提取的方法有很多种，例如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法和磁珠法，每种方法各有优缺点。并且市面上全血DNA提取试剂盒种类繁多，但目前的全血DNA提取试剂盒提取时存在诸多缺点，样本处理时间长、提取过程复杂和样本量多的时候相对成本比较高。
[0004]基因组DNA提取的步骤主要分为裂解、DNA与磁珠或者吸附柱结合、清洗和洗脱四个环节，清洗步骤作为核酸纯化过程中非常重要的环节，清洗的效果会直接影响提取的效率与纯度。目前核酸提取过程中最常用的清洗方法多为乙醇清洗，DNA在乙醇中的溶解度较低，经过不同含量的乙醇清洗后，可除去残留的蛋白与盐离子，从而得到高纯度的DNA。在清洗环节中，市场上常见的提取试剂清洗液多为两种，第一种清洗液为高浓度的胍盐与乙醇，用于除去残留的蛋白质和盐类，第二种为75％～85％乙醇溶液，用于除去残留的盐类，对核酸进一步纯化。
[0005]市场上常用的基因组DNA提取步骤比较多，都需要吸附柱或者磁珠，提取过程相对比较复杂，全血投入量比较多，急需一种实验操作简单、快速、成本低和提取效率高的提取方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种全血基因组DNA快提取试剂盒及其使用方法，旨在解决现有技术中DNA提取操作方法复杂、步骤多和用时长，全血投入量只需20μl，且省去蛋白酶k、吸附柱和磁珠等试剂耗材，很大程度上降低成本和简化实验流程。
[0007]本专利技术中，解决技术问题的技术方案如下：
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种全血基因组DNA快提取试剂盒。
[0009]所述的全血DNA快提取试剂盒，包括独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B；
[0010]所述红细胞裂解液包括如下组分：浓度为155mM的NH4Cl，浓度为12mM的NaHCO3，和浓度为0.1mM EDTA；
[0011]所述Solution A包括如下组分：浓度为0.2M的NaOH；
[0012]所述Solution B包括如下组分：浓度为1M pH 7.8的Tris
‑
HCl。
[0013]优选的，所述的全血DNA快提取试剂盒中，检测试剂由独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B组成；
[0014]所述的红细胞裂解液由如下组分组成：155mM NH4Cl，12mM NaHCO3和0.1mM EDTA。
[0015]优选的，所述的Solution A为0.2M NaOH。
[0016]优选的，所述的Solution B为1M pH 7.8Tris
‑
HCl。
[0017]在本专利技术的第二方面，提供了一种全血基因组DNA快提取试剂盒的使用方法。
[0018]所述全血基因组DNA快提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
[0019](1)准备1.5ml EP管，加入20μl全血；
[0020](2)加入1ml红细胞裂解液，颠倒数次离心管混匀，置于离心机中7000转离心30s，移弃上清；
[0021](3)重复步骤(2)一次；
[0022](4)将EP管放置振荡器上振荡数秒；
[0023](5)加200μl Solution A，振荡5秒；
[0024](6)加入40μl Solution B，混匀，即得最终DNA。
[0025]在本专利技术的第三方面，提供了利用第一方面所述全血基因组DNA快提取试剂盒或利用第二方面所述方法提取的DNA进行PCR的方法，具体如下：
[0026]将DNA样本稀释到30ng/μl，选用EZ#1为Taq酶；
[0027]引物如下：
[0028]C
‑
F:CATCTGGACTCTTCTTCTCATGCC
[0029]C
‑
R:GAGCTCAAACACCCAGCAAGAAG
[0030]反应体系和扩增程序如下：
[0031][0032][0033]在本专利技术的第四方面，提供了利用第一方面所述全血基因组DNA快提取试剂盒或利用第二方面所述方法提取的DNA进行荧光定量PCR的方法，具体如下：
[0034]将DNA样本稀释到30ng/μl，选择EZ#3为Taq酶。
[0035]引物如下：
[0036]Q
‑
F:GAACTCTTGTGCTCACGCTGCT
[0037]Q
‑
R:ACTGCAGAAAGGAAGTGTGCCAA
[0038]探针为：Q
‑
QF:5'
‑
FAM
‑
AAGGGACCAACAGGCAGTCTTCGT
‑
3'
‑
MGB
[0039]扩增体系和扩增程序如下：
[0040][0041][0042][0043]本专利技术具有如下技术效果：
[0044]与现有技术相比，本专利技术提供的全血基因组DNA快提取试剂盒在室温条件下储存和操作，无需特殊条件，其使用方法简单，组分简单，不需要蛋白酶处理、过柱纯化和测浓度，全血投入量只需要20μl，单个样本的整个提取过程5min左右即可完成，提取后的DNA在使用特定的DNA聚合酶情况下可直接进行PCR扩增和荧光定量PCR。
附图说明
[0045]图1为使用EZ#1酶扩增a1,a2,a3和b样本电泳图。
[0046]图2为使用Taq HS DNA Polymerase酶扩增a1,a2,a3和b样本电泳图。
[0047]图3为使用EZ#3酶扩增a1,a2,a3和b样本荧光曲线图。
[0048]图4为使用Taq HS DNA Polymerase酶扩增a1,a2,a3和b样本荧光曲线图。
具体实施方式
[0049]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清晰明了，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0050]EZ#1酶和EZ#3酶为江苏伟禾生物科技有限公司市售商品。
[0051]实施例1
[0052]本实施例的全血DNA快提取试剂盒，检测试剂由独立包装的红细胞裂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全血基因组DNA快提取试剂盒，其特征在于，包括独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B；所述红细胞裂解液包括如下组分：浓度为155mM的NH4Cl，浓度为12mM的NaHCO3，和浓度为0.1mM EDTA；所述Solution A包括如下组分：浓度为0.2M的NaOH；所述Solution B包括如下组分：浓度为1M pH 7.8的Tris
‑
HCl。2.根据权利要求1所述的全血基因组DNA快提取试剂盒，其特征在于，所述的全血DNA快提取试剂盒中，检测试剂由独立包装的红细胞裂解液、Solution A和Solution B组成。3.根据权利要求2所述的全血基因组DNA快提取试剂盒，其特征在于，所述的红细胞裂解液由如下组分组成：155mM NH4Cl，12mM NaHCO3和0.1mM EDTA。4.根据权利要求2所述的全血基因组DNA快提取试剂盒，其特征在于，所述的Solution A为0.2M NaOH。5.根据权利要求2所述的全血基因组DNA快提取试剂盒，其特征在于，所述的Solution B为1M pH 7.8Tris
‑
HCl。6.如权利要求1
‑
5任意一项所述全血基因组DNA快提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)准备1.5ml EP管，加入20μl全血；(2)加入1ml红细胞裂解液，颠倒数次离心管混匀，置于离心机中7000转离心30s，移弃上清；(3)重复步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炤源，王浩，章婷婷，崔江应，
申请(专利权)人：江苏伟禾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：