一种用于检测人类白细胞抗原制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测人类白细胞抗原

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测人类白细胞抗原HLA
‑
DQA1基因分型的引物组及试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组及试剂盒，属于生物医学临床分子检测领域
。

技术介绍

[0002]HLA
位于人类6号染色体短臂的
21.31
区，约含
360
万个碱基对，是目前已知的人类染色体中基因密度最高
、
多态性最丰富的区域，分为
HLA
‑Ⅰ
、Ⅱ和Ⅲ类基因
。
经典的
HLA
‑Ⅰ
类基因包括
HLA
‑
A、HLA
‑
B
和
HLA
‑
C
三类，经典的Ⅱ类基因一般指
DR、DP
和
DQ
，
HLA
‑Ⅲ
类基因与前两类不同，除包含肿瘤坏死因子
(Tumour Necrosis Factor
，
TNF)
基因
、
淋巴毒素
α
(lymphotoxin alpha
，
LTA)
基因
、
热休克蛋白基因等具有免疫相关功能的基因外，还包括许多非免疫相关基因
。HLA
系统在抗原识别与呈递
、
免疫应答与调控等方面起着极其重要的作用，是影响器官移植物长期存活和造血干细胞移植成败的关键因素之一，
HLA
与多种疾病密切相关，如强直性脊柱炎
、
类风湿关节炎
、
贝赛特氏症
、
乳糜泻等
。
[0003]快速而准确地检测
HLA
‑
DQA1
基因分型，对临床疾病辅助诊断
、
医学研究及疾病病因学研究等具有重要意义
。
目前常用的检测上述基因的方法主要有
PCR
‑
SSP
法
、SYBR Green I、Taqman
荧光定量
PCR
法
、
测序法等
。PCR
‑
SSP(sequence specific primer)
即序列特异引物引导的
PCR
反应，是目前被广泛采用的检测方法，其基本方法是设计一系列等位基因型特异性引物，通过特定
PCR
反应体系扩增各等位基因型特异性
DNA
片段，产生相对应的特异性扩增产物条带，并用琼脂糖凝胶电泳检测
PCR
产物，此方法成本低，但操作复杂，无法自动获取结果，准确度也有待提高
。SYBR GreenⅠ是一种结合于所有
dsDNA
双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，其与
DNA
的结合是非特异性的，此方法虽然操作简便
、
快速，但缺乏特异性，准确性差
。Taqman
荧光定量
PCR
法虽然操作简便快速，但无法实现高分辨的分型结果
。
测序法可以获得高分辨结果，但目前应用不广
。
由此可见，只有测序法可以获得高分辨的分型结果，但首先需要设计特异性的扩增引物，进行
PCR
扩增，考虑到
HLA
多态性非常高，结果易出现假阳性，从而影响其准确性
。
本领域急需一种操作简便
、
快速，且准确度高的检测
HLA
‑
DQA1
基因分型的解决方案
。
[0004]另外，申请号为
202210661530.5
的中国专利申请，其名称为一种用于
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组和分析方法，公开了一种用于
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组，用于扩增
DQA1
基因，扩增产物打断后建库，进行二代测序
。
该方法使用了二代测序法，先设计了一组引物来扩增
DQA1
基因，彼此不分型，上述专利对扩增产物进行随机打断，构建成文库，进行二代测序，不需要特异性测序引物
。
类似的，中国专利申请
201610589111.X
，名称为
HLA
基因的
DNA
分型方法和试剂盒，公开了一种用于
HLA
各基因座扩增的上游引物和下游引物，但不分亚型
。
对扩增产物直接进行测序，没有特异性测序引物
。
上述两个专利的分型方法都没有进行
DQA1
各亚型基因的扩增，结果特异性差，会出现模棱两可，多种组合的结果
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组及试剂盒
。
[0006]本专利技术的引物组设计原理如下：根据已知人类白细胞抗原基因序列，应用扩增阻碍突变系统
(Amplification refractory mutation system
，
ARMS)
分析法结合双突变碱基法，设计
HLA
‑
DQA1
各亚型特异性扩增引物
。
当引物序列与待测目标序列能完全匹配时，进行聚合酶链式
(Polymerase Chain Reaction,PCR)
反应
。
在反应过程中，目标核酸片段将被复制与放大，说明在样本中存在与特异性引物完全相同的基因序列，反之则否
。
利用琼脂糖凝胶电泳法对
PCR
反应结果进行检测分析
。
当电泳胶经染色后通过凝胶成像系统分析，核酸片段会因大小不同而被区分开来
。
经过电泳初步鉴定的反应扩增物会被纯化进行下一步的测序分析以鉴定各个等位基因的序列，从而实现对
HLA
‑
DQA1
的高分辨基因分型
。
[0007]HLA
约含
360
万个碱基对，是目前已知的人类染色体中基因密度最高
、
多态性最丰富的区域
。
普通的引物设计方法对于区分
HLA
基因亚型存在一定局限性，准确性不高
。
专利技术人首次使用了
ARMS
结合双突变碱基引物设计方法，首先于数据库中找到
DQA1
基因各亚型的特异性突变碱基，上游突变碱基位于1号内含子末本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组，其特征在于，所述的引物组包括特异性
PCR
扩增引物组，所述的特异性
PCR
扩增引物组包含4对根据
HLA
‑
DQA1
基因亚型特异性序列设计的引物；所述的4对引物分别用于扩增
DQA1*01
所有亚型，
DQA1*02
所有亚型，
DQA1*03
所有亚型，
DQA1*04/DQA1*05/DQA1*06
所有亚型；所述的4对特异性
PCR
扩增引物组核苷酸序列如下表所示：所述的
PCR
扩增引物组，是根据扩增阻碍突变系统
(Amplification refractory mutation system
，
ARMS)
结合双突变碱基法设计；所述的用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组，还包括5条
DQA1
通用型测序引物；所述的5条
DQA1
通用测序引物，每个引物核苷酸序列如下表所示：通用测序引物，每个引物核苷酸序列如下表所示：
2.
如权利要求1所述的用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组在制备检测
HLA
‑
DQA1
基因分型的试剂盒中的应用
。3.
含有如权利要求1所述的用于检测人类白细胞抗原
HLA
‑
DQA1
基因分型的引物组的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括
PCR
反应试剂
。4.
根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的
PCR
反应试剂包括
PCR
反应液和...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炤源，王浩，章婷婷，崔江应，
申请(专利权)人：江苏伟禾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：