靶向PABPC4的siRNA及其在肝癌治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了靶向PABPC4的siRNA及其在肝癌治疗中的应用，属于生物医药领域。确定了PABPC4表达水平与MYC的核阳性具有显著相关性，筛选了一系列针对PABPC4的siRNA，转染肝癌细胞后，证实利用siRNA靶向抑制ABPC4的表达可显著抑制肝癌细胞的增殖与克隆能力，可显著抑制MYC和PABPC4高表达的，对于开发新的抗MYC和PABPC4高表达的肝癌基因药物和提高MYC和PABPC4高表达的肝癌的治疗效果有重要的意义，具有显著的应用前景和经济价值。具有显著的应用前景和经济价值。具有显著的应用前景和经济价值。

【技术实现步骤摘要】
靶向PABPC4的siRNA及其在肝癌治疗中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及靶向PABPC4的siRNA及其在肝癌治疗中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]转录因子MYC的异常活化可导致多种肿瘤的发生；其中，超过30％以上的肝细胞肝癌(HCC)表现出癌基因MYC的异常活化；然而，特异性靶向MYC的小分子抑制剂的开发至今没有获得成功。由于MYC激活导致的基因表达失调是肿瘤形成的关键驱动因素，并可能对特定转录程序产生依赖，深度挖掘肝癌发生、发展过程中MYC以来的关键分子和通路，寻找于MYC异常活化相关联的协同致死策略，是实现MYC特异的肝癌靶向治疗的新思路。
[0004]大多数真核mRNA 3`端的poly(A)
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尾在其稳定性、核转运和翻译中起着关键作用。这些作用在很大程度上是由poly(A)结合蛋白(PABPs)介导的，PABPCs参与RNA生物发生和转录翻译功能。人类细胞中共表达5种PABP蛋白，PABP1、PABPC3、PABP5、PABPC1L和iPABP。iPABP(又称PABPC4)是一种在活化的T细胞中表达上调的蛋白，也是一种在活化的血小板表面表达的蛋白，其mRNA也在其他组织中表达。PABPC4蛋白在多种肿瘤中高表达，包括结肠癌、肺腺癌、三阴性乳腺癌和肝细胞肝癌。有研究证明PABPC4能够促进三阴性乳腺癌的生长和转移，但是，目前关于PABPC4在HCC中的作用机制探讨甚少。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供靶向PABPC4的siRNA及其在肝癌治疗中的应用，本专利技术通过高效抑制PABPC4表达水平，应用于肝癌治疗。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0007]本专利技术为了确认PABPC4蛋白水平与MYC核染色的相关性，对85名肝癌患者的肿瘤样本进行了免疫组织化学染色，确定了PABPC4表达水平与MYC的核阳性具有显著正相关性；其次，筛选了一系列针对PABPC4的siRNA，转染肝癌细胞后，通过荧光定量PCR的方法检测siRNA沉默PABPC4的效率，同时采用免疫组化染色、CCK
‑
8、Western blot等实验方法检测siRNA对肝癌细胞增殖、克隆的影响，结果显示多条siRNA转染对PABPC4具有较高的沉默效率，可显著抑制MYC和PABPC4高表达的肝癌细胞的增殖与克隆能力，即显著抑制MYC高活性分子亚型肝癌的进展。
[0008]本专利技术的第一个方面，本专利技术提供了能够高效抑制PABPC4基因的siRNA，其序列选自SEQ ID NO.1
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2或3
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4或5
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6中的一组或多组。
[0009]本专利技术提供的siRNA使肝癌细胞中PABPC4基因的表达水平下调50％以上。
[0010]优选的，当siRNA的序列为SEQ ID NO.3
‑
4时，抑制PABPC4基因表达效果更好。
[0011]本专利技术的第二个方面，提供一种靶向PABPC4基因的siRNA在制备用于治疗肝癌的药物中的应用，所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.1
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2或3
‑
4或5
‑
6中的一组或多组。
[0012]优选的，所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.3
‑
4。
[0013]优选的，所述靶向PABPC4基因的siRNA通过抑制肝癌细胞的增殖和克隆达到治疗肝癌的目的。
[0014]优选的，所述肝癌为MYC高活性分子亚型肝癌。
[0015]专利技术的第三个方面，提供一种用于治疗肝癌的药物制剂，该药物制剂包括siRNA或其核酸序列修饰物及载体，所述siRNA或其核酸序列修饰物抑制PABPC4基因的表达；
[0016]所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.1
‑
2或3
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4或5
‑
6中的一组或多组。
[0017]本专利技术提供的用于治疗肝癌(例如HCC)的药物制剂中，所述核酸序列修饰物是通过对所述siRNA进行任意核苷酸的核糖修饰、碱基修饰和磷酸骨架修饰中的一种或多种修饰而获得的。
[0018]优选的，所述载体选自病毒、纳米颗粒、胆固醇或脂质体。
[0019]优选的，所述肝癌为MYC高活性分子亚型肝癌。
[0020]本专利技术的有益效果为：
[0021]本专利技术通过靶向PABPC4基因的siRNA降低PABPC4表达水平，能够有效抑制肝癌细胞的增殖、克隆形成能力，对于开发新的抗MYC和PABPC4高表达的肝癌基因药物和提高MYC和PABPC4高表达的肝癌的治疗效果有重要的意义，具有显著的应用前景和经济价值。
附图说明
[0022]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0023]图1是本专利技术实施例的检测结果；
[0024]其中，A为对肝癌患者进行的MYC和PABPC4免疫组化染色的代表性结果；
[0025]B为对A中免疫组化MYC和PABPC4表达量的定量分析，MYC与PABPC4在肝癌中的表达成正相关；
[0026]C为PABPC4与MYC在不同肝癌细胞系表达水平的关联；
[0027]D为在高表达PABPC4的细胞系SK
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Hep1上3条PABPC4的siRNA的不同敲降效率；
[0028]E为CCK8检测三条siRNA敲低对肝癌细胞增殖的影响，PABPC4敲低效果与对细胞增殖抑制相关，相比之下，MYC低表达细胞系SNU
‑
387、SNU
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182和Li7未受影响；
[0029]F、G为克隆形成实验中PABPC4敲低降低了HCC细胞系的克隆形成能力的结晶紫染色图，MYC低表达细胞系SNU
‑
387、SNU
‑
182和Li7细胞几乎未受影响。
具体实施方式
[0030]为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本专利技术的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本专利技术的技术方案。
[0031]实施例1
[0032]一、实验材料
[0033]1、实验细胞系
[0034]SK
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Hep1：人肝癌肿瘤细胞，来自于中国科学院细胞库，DMEM加入10％FBS 1％双抗培养。
[0035]HepG2：人肝癌肿瘤细胞，来自于中国科学院细胞库，DMEM加入10％FBS1％双抗培养。
[0036]SNU
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387：人肝癌肿瘤细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA，其特征在于：该siRNA抑制PABPC4基因的表达；所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.1
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2或3
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4或5
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6中的一组或多组。2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA使肝癌细胞中PABPC4基因的表达水平下调50％以上。3.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于：所述siRNA的序列为SEQ ID NO.3
‑
4。4.靶向PABPC4基因的siRNA在制备用于治疗肝癌的药物中的应用，所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.1
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2或3
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4或5
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6中的一组或多组。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述siRNA的序列选自SEQ ID NO.3
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【专利技术属性】
技术研发人员：袁得天，李石洋，张鹏，梁金媛，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：