靶向p53-R175H的核酸适配体及其蛋白靶向降解嵌合体与应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及靶向p53

【技术实现步骤摘要】
靶向p53
‑
R175H的核酸适配体及其蛋白靶向降解嵌合体与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及靶向p53
‑
R175H的核酸适配体及其蛋白靶向降解嵌合体与应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]TP53是最常见的突变基因，大多数突变是错义突变，这些突变通常聚集在p53蛋白DNA结合域内的几个热点，包括R175、G245、R248、R249、R273和R282。这些热点突变不仅消除了野生型p53的肿瘤抑制功能，还获得了致癌功能，以促进病灶转化、癌症生长、转移和耐药性。野生型p53在生理条件下会被快速降解，但p53突变体在癌细胞中高度表达且异常稳定。因此，特异性降解p53突变体是一种很有前途的癌症治疗策略。尽管靶向p53突变体被誉为精准医疗的圣杯，但目前仍没有相关药物上市。
[0004]p53
‑
R175H突变在各种类型的癌症中发生率最高，与其他突变体相比，p53
‑
R175H更容易促进肿瘤的起始、转移和耐药性，导致癌症的预后最差。蛋白水解靶向嵌合体(PROTACs)是一种异质双功能分子，它用一个分子招募目标蛋白，用另一个分子招募E3连接酶，随后通过泛素蛋白酶体系统诱导目标蛋白的泛素化降解。然而，据专利技术人研究了解，目前，直接靶向p53突变体的PROTACs尚未报道，其主要原因是难以找到合适的p53突变体的配体。核酸适配体是通过配体指数富集的人工系统进化方法(SELEX)产生的短单链寡核苷酸。虽然已有了特异性靶向p53
‑
R175H的RNA核酸适配体，但该适配体在血清中极不稳定，严重限制了其应用范围。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供靶向p53
‑
R175H的核酸适配体及其蛋白靶向降解嵌合体与应用，本专利技术提供的靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体亲和力更高、血清稳定性高，从而实现对p53
‑
R175H突变肿瘤精准医疗。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0007]一方面，一种靶向p53
‑
R175H的核酸适配体，如SEQ ID NO.1所示。
[0008]另一方面，一种上述靶向p53
‑
R175H的核酸适配体的改造方法，包括如下步骤：
[0009]获取靶向p53
‑
R175H突变的RNA适配体的序列并构建靶向p53
‑
R175H突变的RNA适配体的三维构象；
[0010]利用分子动态模拟方法分析RNA适配体与p53
‑
R175H突变体的结合位点，获得RNA适配体与p53
‑
R175H突变体相互作用的关键氨基酸残基和核苷酸；
[0011]在维持RNA适配体的三维结构基础上，将核苷酸逐个进行替换，根据替换后的适配
体与p53
‑
R175H突变体的结合情况获得靶向p53
‑
R175H的核酸适配体。
[0012]第三方面，一种靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体，包括DNA核酸适配体，DNA核酸适配体通过连接分子与E3泛素连接酶的配体连接，所述DNA核酸适配体为上述靶向p53
‑
R175H的核酸适配体。
[0013]第四方面，一种上述靶向p53
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R175H的蛋白靶向降解嵌合体的制备方法，包括如下步骤：
[0014]合成含有叠氮修饰的单链DNA，所述单链DNA包含核苷酸连接分子和DNA核酸适配体，叠氮基团位于连接分子上；
[0015]将叠氮修饰的单链DNA与炔基修饰的E3泛素连接酶的配体进行点击反应偶联，即得。
[0016]第五方面，一种上述靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体在制备降解p53
‑
R175H突变相关疾病药物中的应用。
[0017]第六方面，一种抗肿瘤药物，包括活性成分和至少一种药物非活性成分，所述活性成分为上述靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]本专利技术利用分子动态模拟的方法来指导核酸适配体的优化，获得的核酸适配体亲和力更高，血清稳定性显著提高。以优化后的适配体为配体，开发了首个选择性降解p53
‑
R175H突变体的嵌合体降解剂，从而实现对p53
‑
R175H突变患者的精准治疗。
[0020]经试验验证，本专利技术提供的靶向p53
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R175H的蛋白靶向降解嵌合体具有很好的降解效率和抗肿瘤细胞效果，其中500nM的嵌合体分子可以有效显著抑制p53
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R175H突变肿瘤细胞的增殖，而对p53野生型和其它突变位点肿瘤细胞没有抑制效果。且单纯的核酸适配体在相同浓度几乎不能抑制p53
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R175H突变肿瘤细胞的增殖；同时，该嵌合体分子能够显著提高p53
‑
R175H突变肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
[0021]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0022]图1为本专利技术实施例1中DNA核酸适配体p53m
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DA及其叠氮修饰形式(N3‑
p53m
‑
DA)的质谱图，A为p53m
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DA，B为N3‑
p53m
‑
DA；
[0023]图2为本专利技术实施例1中含炔基修饰的CRBN配体的
13
C核磁图谱；
[0024]图3为本专利技术实施例1中RNA核酸适配体p53m
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RA与p53
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R175H结合的分子模拟图，A为相互作用位点分析图，B为螺旋构象情况图；
[0025]图4为本专利技术实施例1中利用分子动态模拟指导的核酸适配体改造策略得到的p53m
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DA与p53
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R175H结合的分子模拟图，A为相互作用位点分析图，B为螺旋构象情况图；
[0026]图5为本专利技术实施例1中的核酸适配体p53m
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RA、p53m
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DA与p53
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R175H(A)以及p53m
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DA与p53
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R175H、p53
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WT(B)的亲和力测试结果图；
[0027]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向p53
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R175H的核酸适配体，其特征是，如SEQ ID NO.1所示。2.一种权利要求1所述的靶向p53
‑
R175H的核酸适配体的改造方法，其特征是，包括如下步骤：获取靶向p53
‑
R175H突变的RNA适配体的序列并构建靶向p53
‑
R175H突变的RNA适配体的三维构象；利用分子动态模拟方法分析RNA适配体与p53
‑
R175H突变体的结合位点，获得RNA适配体与p53
‑
R175H突变体相互作用的关键氨基酸残基和核苷酸；在维持RNA适配体的三维结构基础上，将核苷酸逐个进行替换，根据替换后的适配体与p53
‑
R175H突变体的结合情况获得靶向p53
‑
R175H的核酸适配体。3.一种靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体，其特征是，包括DNA核酸适配体，DNA核酸适配体通过连接分子与E3泛素连接酶的配体连接，所述DNA核酸适配体为权利要求1所述的靶向p53
‑
R175H的核酸适配体。4.如权利要求3所述的靶向p53
‑
R175H的蛋白靶向降解嵌合体，其特征是，所述连接分子为至少一个
‑
CH2CH2O
‑
单元或至少一个脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：周军，谢松波，刘敏，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：