抑制骨关节炎的分子干预靶点及其骨关节炎抑制剂制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种抑制骨关节炎的分子干预靶点及其骨关节炎抑制剂。本发明专利技术通过实验证明，在骨关节炎症反应过程中，lncRNA SNHG14表达量显著升高，抑制lncRNA SNHG14能够显著抑制炎症反应和凋亡，增强软骨细胞活力。增强软骨细胞活力。

【技术实现步骤摘要】
抑制骨关节炎的分子干预靶点及其骨关节炎抑制剂


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抑制骨关节炎的分子干预靶点及其骨关节炎抑制剂。

技术介绍

[0002]骨关节炎(OA)是一种常见的退行性疾病，与年龄、肥胖、性别、体重和创伤有关。其特征是滑膜增生、骨赘形成、软骨下骨硬化、进行性关节软骨破坏以及由细胞外基质合成和分解代谢失衡引起的软骨丢失。目前，早期和中期OA的治疗策略是缓解关节疼痛和关节内注射，晚期OA的治疗策略是关节置换手术。然而，尽管这些治疗可以在一定程度上缓解OA的症状并改善患者的生活质量，但它们对阻止OA的进展影响甚微。OA的具体发病机制尚不清楚。已有证据表明OA的发病机制与炎症因子、软骨细胞异常凋亡和细胞外基质降解有关。在OA的发展过程中，TNF
‑
a、IL
‑
6和其他炎症因子异常表达，导致软骨细胞凋亡增加和细胞外基质降解。
[0003]长链非编码RNA(10ng noncoding RNA，lncRNA)是哺乳动物基因组转录合成的一类长度超过200bp、不具备编码蛋白质功能的RNA，已被证明具有调控多种生物过程的潜力。它最初被定义为基因组的“转录噪音”，没有生物学功能。然而，随着二代基因测序技术的广泛应用，通过对某些特异性表达lncRNA的具体分析和研究，发现IncRNA在生物学的许多领域都发挥着重要作用，如干细胞生物学、X染色体失活、个体发育、组织形成、机体代谢等。目前，关于lncRNA SNHG14在促进骨关节炎的炎症反应，凋亡和细胞外基质降解中的相关作用研究尚未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供一种抑制骨关节炎的分子干预靶点长链非编码RNA lncRNA SNHG14，其正向引物序列为5
’‑
GGGTGTTTACGTAGACCAGAACC
‑3’
，反向引物序列为5
’‑
CTTCCAAAAGCCTTCTGCCTTAG
‑3’
，其cDNA序列如SEQ ID No:1所示。
[0005]本专利技术还提供了一种骨关节炎抑制剂，其为siRNA，shRNA中的一种。
[0006]基因抑制剂siRNA的正向引物序列为5
’‑
GCAAAUGAAAGCUACCAAU
‑3’
，反向引物序列为5
’‑
AUUGGUAGCU UUCAUUUGC
‑3’
；
[0007]基因抑制剂为shRNA的的正向序列为5'
‑
GCACAAUAUCUUUGAACUA
‑
3'，shRNA的反向序列为5'
‑
UAGUUCAAAGAUAUUGUGC
‑
3'。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供一种长链非编码RNA SNHG14特异性结合miR
‑
137作为分子干预靶点在调控骨关节炎中的应用，miR
‑
137序列如SEQ ID No:2所示。
[0009]本专利技术的长链非编码RNA作为miRNA分子海绵特异性结合miR
‑
137，从而抑制miR
‑
137的功能，miR
‑
137的功能受到抑制后能够降低细胞活性，TNF
‑
α、IL
‑
6水平上升，细胞凋亡增加，ADAMTS
‑
5和MMP13的蛋白表达水平上升，Collagen II和Aggrecan蛋白表达水平降低，从而对骨关节炎进行调节。
[0010]本专利技术表明体外过表达lncRNA SNHG14显著促进人源软骨细胞CHON
‑
001的炎症反应、促进细胞的凋亡，体外干扰lncRNA SNHG14，显著降低CHON
‑
001的炎症反应、抑制细胞的凋亡。
[0011]本专利技术提示lncRNA SNHG14通过调节与细胞炎症反应和凋亡有关的基因表达影响人源软骨细胞CHON
‑
001的炎症和凋亡，有潜力成为抑制骨关节炎的新靶点。
附图说明：
[0012]图1为使用不同浓度LPS诱导软骨细胞CHON
‑
001建立骨关节炎模型，其中，(A)为CCK
‑
8检测骨关节炎模型中的细胞活力；(B)为RT
‑
qPCR检测骨关节炎模型中lncRNA SNHG14的表达水平；(C)为RT
‑
qPCR检测骨关节炎模型中miR
‑
137的表达水平变化，***P<0.001表示差异具有统计学意义。
[0013]图2为敲低lncRNA SNHG14对炎症因子TNF
‑
α和IL
‑
6和细胞凋亡的影响，其中，(A)为RT
‑
qPCR检测SNHG14的表达；(B)为ELISA检测TNF
‑
α的浓度；(C)ELISA为检测IL
‑
6的浓度；(D)为CCK
‑
8检测细胞活力；(E)为流式细胞仪检测细胞凋亡，**P<0.01，***P<0.001表示差异具有统计学意义。附图中从左至右依次为：空白组，LPS组(炎症模型组)，LPS+sh
‑
NC组(炎症模型+空载质粒转染组)和LPS+sh
‑
SNHG14组(炎症模型+干扰RNA转染组)
[0014]图3为敲低SNHG14对ADAMTS
‑
5、MMP13、Collagen II和Aggrecan蛋白表达的影响。附图中从左至右依次为：空白组，LPS组(炎症模型组)，LPS+sh
‑
NC组(炎症模型+空载质粒转染组)和LPS+sh
‑
SNHG14组(炎症模型+干扰RNA转染组)
[0015]图4为lncRNA SNHG14通过靶向抑制miR
‑
137表达，促进炎症的发展的依据，其中，(A)为RT
‑
qPCR检测miR
‑
137在Control，LPS组，LPS+sh
‑
NC组和LPS+sh
‑
SNHG14组中的表达；(B)为荧光素酶报告基因检测miR
‑
137与SNHG14之间的调节关系。
[0016]图5为lncRNA SNHG14通过靶向miR
‑
137调节炎症反应、凋亡和细胞活力，其中，(A)为RT
‑
qPCR检测miR
‑
137的表达；(B)为ELISA检测TNF
‑
α的浓度；(C)为ELISA检测IL
‑
6的浓度；(D)为CCK
‑
8检测细胞活力；(E)为流式细胞仪检测细胞凋亡。附图中从左至右依次本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制骨关节炎的分子干预靶点，其特征在于，所述分子干预靶点为lncRNA SNHG14，其cDNA序列如SEQ ID No:1所示。2.根据权利要求1所述的分子干预靶点，其特征在于，所述lncRNA SNHG14的正向引物序列为5
’‑
GGGTGTTTACGTAGACCAGAACC
‑3’
；所述lncRNA SNHG14的反向引物序列为5
’‑
CTTCCAAAAGCCTTCTGCCTTAG
‑3’
。3.一种骨关节炎抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为siRNA，化学修饰siRNA，shRNA中的一种。4.根据权利要求3所述的骨关节炎抑制剂，其特征在于，所述的siRNA正向引物序列为5
’‑
GCAAAUG...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕松伟，郑栋，唐润理，刘璇，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：