一种量子点-抗体复合物微球及其制备方法、应用技术

本发明专利技术提出了一种量子点

【技术实现步骤摘要】
一种量子点
‑
抗体复合物微球及其制备方法、应用


[0001]本专利技术涉及抗原检测领域，特别涉及一种量子点
‑
抗体复合物微球及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte
‑
associated antigen
‑
4，CTLA
‑
4)又名CD152，是一种白细胞分化抗原，是T细胞上的一种跨膜受体，与CD28共同享有B7分子配体，而CTLA
‑
4与B7分子结合后诱导T细胞无反应性，参与免疫反应的负调节。
[0003]目前，多种方法用于检测CTLA
‑4+ T细胞，其中荧光偶联单克隆抗体(单克隆抗体)是最常用的方法。由于CTLA
‑4+ T细胞亚群在外周血和肿瘤组织中的比例较低，且易受到肿瘤微环境的干扰，导致采用单克隆抗体检测时难度增加，且费用昂贵。因此，迫切需要一种更简单、更敏感的检测方法来监测CTLA
‑4+
T细胞亚群。纳米体(Nbs)是一种特殊类型的单结构域抗体，由不同区域的重链抗体组成，存在于骆驼的血液中。与传统抗体相比，Nbs具有高特异性、理化稳定性高、缺乏免疫原性、产量高、成本低等优点，适合于癌症的免疫靶向诊断和治疗。采用CTLA
‑
4特异性抗体，并与CTLA 4
+ T细胞有效结合，能够有效提高对CTLA4
+ T细胞检测的特异性和敏感性。
专利技术内容
[0004]鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种量子点
‑
抗体复合物微球及其制备方法、应用，解决上述问题。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]一种量子点
‑
抗体复合物微球的制备方法，包括如下步骤：
[0007]S1配制量子点溶液：在磷酸盐缓冲液中加入量子点，振荡，静置，得量子点溶液；
[0008]S2制备量子点
‑
抗体复合物：采用磷酸盐缓冲液溶液溶解纳米抗体Nb90，得纳米抗体Nb90溶液；
[0009]取步骤S1的量子点溶液，加入EDC溶液，涡旋混匀，加入NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液，轻轻搅拌，培养；培养后离心，收集共轭量子点
‑
抗体复合物，加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬，得量子点
‑
抗体复合物溶液；
[0010]在量子点
‑
抗体复合物溶液中加入水解乳清蛋白溶液，于36
‑
38℃反应后，加入乙醇胺，于36
‑
38℃终止反应，离心，收集沉淀物，加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬，得的修饰量子点
‑
抗体复合物溶液；
[0011]S3制备量子点
‑
抗体复合物微球溶液：取DTAB加入水，边搅拌边加入步骤S2的修饰量子点
‑
抗体复合物溶液，超声，加入表面活性剂，搅拌反应后，加入乳清蛋白溶液，搅拌，得量子点
‑
抗体复合物微球溶液。
[0012]进一步说明，步骤S2中，所述纳米抗体Nb90溶液的质量浓度为0.8
‑
1.5mg/mL。
[0013]进一步说明，步骤S2中，所述量子点溶液、DEC溶液、NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液
的体积比为4
‑
4.5：10
‑
12：10
‑
12：25
‑
27，EDC溶液的浓度为1
‑
1.4mM，NHS溶液的浓度为1
‑
1.4mM；所述培养1
‑
1.5h，所述离心的条件为：10000
‑
12000r/min离心20
‑
30min。
[0014]进一步说明，步骤S2中，所述量子点
‑
抗体复合物溶液的质量浓度为8
‑
12mg/mL，所述修饰量子点
‑
抗体复合物溶液的质量浓度为4
‑
6mg/mL。
[0015]进一步说明，步骤S2中，所述量子点
‑
抗体复合物溶液、水解乳清蛋白溶液和乙醇胺的体积比为25
‑
27：1
‑
1.2：3
‑
3.5，所述36
‑
38℃反应30
‑
40min，所述36
‑
38℃终止反应30
‑
40min。
[0016]进一步说明，步骤S3中，所述DTAB、水和修饰量子点
‑
抗体复合物溶液的料液质量体积比为15
‑
17mg：20
‑
22mL：1.5
‑
2mL。
[0017]进一步说明，步骤S3中，所述超声的条件为：超声温度为4
‑
5℃，超声功率为300
‑
400W，超声时间为30
‑
40min；所述搅拌反应的时间为9
‑
11h。
[0018]进一步说明，步骤S3中，所述表面活性剂为烷基葡糖苷，烷基葡糖苷的加入量为体系的2.5
‑
4wt％。
[0019]进一步说明，本专利技术提供一种量子点
‑
抗体复合物微球的制备方法制备得到的量子点
‑
抗体复合物微球。
[0020]进一步说明，本专利技术提供一种量子点
‑
抗体复合物微球在提高与CTLA
‑4+
T细胞的结合率中的应用。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0022]本专利技术选用CTLA
‑
4特异性抗体与量子点结合，提供一种新的量子点
‑
抗体复合物微球，CTLA
‑
4特异性抗体可有效结合CTLA
‑4+ T细胞，量子点则提供强的荧光信号，采用量子点
‑
抗体复合物微球能够用于检测CTLA
‑4+ T细胞。
[0023]其中，本专利技术通过水解乳清蛋白溶液和乙醇胺制成的修饰量子点
‑
抗体复合物，结合DTAB、烷基葡糖苷和乳清蛋白制成的量子点
‑
抗体复合物微球，在PHA刺激的细胞中，量子点
‑
抗体复合物微球与CTLA
‑4+ T细胞具有较强的特异性结合，在肿瘤浸润的T细胞中，量子点
‑
抗体复合物微球检测到的阳性细胞数量高于抗CTLA
‑
4单抗，这些结果表明，量子点
‑
抗体复合物微球的检测效率明显高于抗CTLA
‑
4单抗，提高检测CTLA
‑4+ T细胞的特异性和荧光强度。
[0024]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种量子点
‑
抗体复合物微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1配制量子点溶液：在磷酸盐缓冲液中加入量子点，振荡，静置，得量子点溶液；S2制备量子点
‑
抗体复合物：采用磷酸盐缓冲液溶液溶解纳米抗体Nb90，得纳米抗体Nb90溶液；取步骤S1的量子点溶液，加入EDC溶液，涡旋混匀，加入NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液，轻轻搅拌，培养；培养后离心，收集共轭量子点
‑
抗体复合物，加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬，得量子点
‑
抗体复合物溶液；在量子点
‑
抗体复合物溶液中加入水解乳清蛋白溶液，于36
‑
38℃反应后，加入乙醇胺，于36
‑
38℃终止反应，离心，收集沉淀物，加入含有牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液溶液进行重悬，得的修饰量子点
‑
抗体复合物溶液；S3制备量子点
‑
抗体复合物微球溶液：取DTAB加入水，边搅拌边加入步骤S2的修饰量子点
‑
抗体复合物溶液，超声，加入表面活性剂，搅拌反应后，加入乳清蛋白溶液，搅拌，得量子点
‑
抗体复合物微球溶液。2.根据权利要求1的一种量子点
‑
抗体复合物微球的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述纳米抗体Nb90溶液的质量浓度为0.8
‑
1.5mg/mL。3.根据权利要求1的一种量子点
‑
抗体复合物微球的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述量子点溶液、DEC溶液、NHS溶液和纳米抗体Nb90溶液的体积比为4
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4.5：10
‑
12：10
‑
12：25
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27，EDC溶液的浓度为1
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1.4mM，NHS溶液的浓度为1
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1.4mM；所述培养1
‑
1.5h，所述离心的条件为：10000
‑
12000r/min离心20
‑
30min。4.根据权利要求1的一种量子点
‑
抗体复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：王武，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：