【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荧光探针，具体涉及一种检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、高水平的一氧化氮(no)和过氧亚硝酰(onoo-)以及线粒体复合物i的功能障碍被认为是多种疾病发生的重要原因之一。有研究表明，onoo-氧化损伤和线粒体功能障碍之间存在精确的时间关系。过氧亚硝酰的形成是继发性线粒体氧化损伤的介质，已知会通过增加线粒体蛋白质硝化[3-硝基酪氨酸(3-nt)]、脂质过氧化[4-羟基壬烯醛(4-hne)]和蛋白质羰基对线粒体造成损伤，从而削弱线粒体呼吸功能。据估计，身体某些区域会以高达每分钟50-100μm的速度生成过氧亚硝酰。该物质的浓度被认为在纳摩尔范围内，并且在生理ph值下的半衰期为10毫秒。因此在生理及病理期间实时监测onoo-水平具有挑战性，但对于更深入地了解onoo-在体内的各种生理及病理作用和寻找更有效的治疗方法至关重要。
2、目前已经开发了多种技术来检测onoo-，例如电化学和拉赫曼散射技术。然而，荧光成像技术因其操作简便、选择性和灵敏度而脱颖而出。此外，它可以用于进行高时空分辨率的原位实时监测，因此是研究onoo-最受欢迎的策略之一。由于小分子荧光探针的可定制结构、生物相容性、稳定性和成本效益，荧光成像技术越来越依赖小分子荧光探针。
3、因此，开发合适的小分子荧光探针，用于研究onoo-在生理和病理情况下的作用和机制，是本专利技术亟需解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供的一种检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生
2、为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术公开了一种检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物，具有如下式(i)所示的结构通式：
4、
5、式中，r为硝基或三氟甲基
6、第二方面，本专利技术公开了一种如第一方面所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)在惰性气氛保护下，将荧光团cy7.5-pq和三乙胺添加到含有二氯甲烷的圆底烧瓶中，混合搅拌均匀，得到处理后的cy7.5-pq溶液；
8、(2)在惰性气氛保护下，将4-硝基苯乙醛酸或2-氧代-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸、草酰氯和二氯甲烷混合搅拌均匀，然后加入两滴n，n-二甲基甲酰胺dmf，加热反应，得到反应混合物；
9、(3)将步骤(2)的反应混合物冷却至室温后旋蒸，缓慢滴加到步骤(1)处理后的cy7.5-pq溶液中，在惰性气氛保护下,将混合物搅拌反应，得到苯并花菁衍生物粗品；
10、(4)将所述苯并花菁衍生物粗品进行纯化处理，得到式(i)所示的苯并花菁衍生物。
11、在专利技术的较佳实施方式中，步骤(1)中，所述荧光团cy7.5-pq和三乙胺的摩尔比为1:5，且混合搅拌时的条件为：在0℃条件下搅拌30分钟。
12、在专利技术的较佳实施方式中，步骤(2)中，4-硝基苯乙醛酸或2-氧代-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸与草酰氯的摩尔比为3:10，加热反应时的条件为：在45℃条件下反应1小时。
13、在专利技术的较佳实施方式中，步骤(3)中，混合物搅拌反应时的条件为：在25℃条件下搅拌反应4小时。
14、在专利技术的较佳实施方式中，步骤(4)中，苯并花菁衍生物粗品进行纯化处理的方法为：在减压条件下除去溶剂，通过硅胶色谱柱用ch2cl2和ch3oh的混合洗脱液进行梯度洗脱，纯化。
15、进一步的，所述混合洗脱液中，ch2cl2和ch3oh的体积比为100-5∶1。
16、第三方面，本专利技术公开了一种如第一方面所述的苯并花菁衍生物在检测生物体内外的过氧亚硝酰onoo-中的应用。
17、第四方面，本专利技术公开了一种如第一方面所述的苯并花菁衍生物在检测线粒体外膜过氧亚硝酰onoo-中的应用。
18、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
19、本专利技术提供的苯并花菁衍生物用于作为检测细胞或生物体内的onoo-的荧光探针化合物，其在onoo-存在下发生亲核反应，使探针有明显的荧光变化，紫外吸收亦发生明显的变化，进而可以用于生物体内外onoo-的检测。
20、本专利技术提供的苯并花菁衍生物用作荧光探针，可用于细胞内onoo-进行检测，还可对细胞内的线粒体进行定位，这对深入研究onoo-在生物体内的生理及病理作用有重要的生物医学意义。
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1.一种检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物，其特征在于，具有如下式(I)所示的结构通式：
2.一种如权利要求1所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述荧光团Cy7.5-Pq和三乙胺的摩尔比为1:5，且混合搅拌时的条件为：在0℃条件下搅拌30分钟。
4.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，4-硝基苯乙醛酸或2-氧代-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸与草酰氯的摩尔比为3:10，加热反应时的条件为：在45℃条件下反应1小时。
5.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，混合物搅拌反应时的条件为：在25℃条件下搅拌反应4小时。
6.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，苯并花菁衍生物粗品进行纯化处理的方法为：在减压条件下除去溶剂，通过硅胶色谱柱用CH2Cl
7.根据权利要求6所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，所述混合洗脱液中，CH2Cl2和CH3OH的体积比为100-5∶1。
8.如权利要求1所述的苯并花菁衍生物在检测生物体内外的过氧亚硝酰ONOO-中的应用。
9.如权利要求1所述的苯并花菁衍生物在检测线粒体外膜过氧亚硝酰ONOO-中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物，其特征在于，具有如下式(i)所示的结构通式：
2.一种如权利要求1所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述荧光团cy7.5-pq和三乙胺的摩尔比为1:5，且混合搅拌时的条件为：在0℃条件下搅拌30分钟。
4.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花菁衍生物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，4-硝基苯乙醛酸或2-氧代-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙酸与草酰氯的摩尔比为3:10，加热反应时的条件为：在45℃条件下反应1小时。
5.根据权利要求2所述的检测过氧亚硝酰的苯并花...
【专利技术属性】
技术研发人员：于法标，王振凯，窦昆，邢艳珑，王锐，刘恒，程子译，赵琳璐，蒋童蒙，王蕊，王俊杰，杜芳芳，郑小洁，王娟，金剑锋，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：
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