用于产生丝状噬菌体的细菌菌毛蛋白质复合物FimGt-DsF稳定蛋白质复合物制造技术

本发明专利技术涉及用于产生噬菌粒或丝状噬菌体的细菌菌毛蛋白质复合物FimGt

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生丝状噬菌体的细菌菌毛蛋白质复合物FimGt
‑
DsF稳定蛋白质复合物
[0001]本专利技术涉及用于产生噬菌粒或丝状噬菌体的细菌菌毛蛋白质复合物FimGt
‑
DsF稳定蛋白质复合物，以及它们的使用方法。

技术介绍

[0002]噬菌体展示是一种用于选择改进的结合物的有效方法。噬菌体展示工作通常涉及使用感染大肠杆菌的丝状噬菌体M13，因为与其他噬菌体相比，使用M13相对容易。像M13这样的丝状噬菌体不会裂解宿主细胞，而是通过分泌来释放。这允许从潜在干扰细胞质蛋白中更简单和更有效地纯化噬菌体颗粒。最常见地，M13上的目的多肽(POI)的展示是通过与次要外壳蛋白pIII的N末端融合来实现，但也使用了与其他外壳蛋白(pVI、pVII、pVIII和pIX)的融合。
[0003]噬菌体展示已被广泛用于抗体和肽文库的成功选择。然而，传统的噬菌体展示存在一些限制，阻碍了其更广泛的使用。一个缺点是缺乏稳健的N末端展示(定义为通过连接POI的N末端进行展示)，以用于不适合C末端展示(诸如需要游离C末端进行相互作用的蛋白质的展示、cDNA文库和不耐受C末端融合的蛋白质的展示)的应用。
[0004]WO 2018/041740公开了一种利用在细胞表面上固定蛋白质的非共价展示系统，其包含与第一结合部分融合的目标蛋白(POI)，其中第一结合部分包含FimGT/DsF相互作用对的一个配偶体。
[0005]WO 2012/028697公开了一种基于供体链(Ds)互补的系统，其包含Ds标签和Ds标签的同源配体作为蛋白质标签和亲和配体，用于固定和/或亲和纯化程序。
[0006]Giese等人(在：
″
The Most Stable Protein
‑
Ligand Complex：Applications for One
‑
Step Affinity Purification and Identification of Protein Assemblies
″
，ANGEWANDTE CHEMIE INTERNATIONAL EDITION，vol.51，no.18，27April 2012，pages 4474
‑
4478中)公开了使用FimGT/DsF系统进行一步亲和纯化和蛋白质装配的识别。
[0007]已显示蛋白质的N末端与pIII、pVI、pVIII和pIX的C末端的融合，但导致了展示水平低(Jespers等人Bio/Technology 1995，13，378；Velappan等人，Nucleic Acid Res.2010，38，4，e22)，并且是成功的或者仅使用肽或小蛋白质成功地展示(Fuh等人FEBS Letters 2000，480，231；Fuh，Germaine and Sidhu，Sachdev S.(2000)，Efficient phage display of polypeptides fused to the carboxy
‑
terminus of the M13gene
‑
3minor coat protein，FEBS Letters，480，doi：10.1016/S0014
‑
5793(00)01946
‑
3；25Velappan等人Nucleic Acid Res.2010，38，4，e22)，和/或需要定制优化(Held等人，J Mol Biol.2004，340(3)，587)。
[0008]因此，本专利技术的一个目的是提供用于产生噬菌粒或丝状噬菌体的改进的稳定蛋白质复合物，以及这些的生产和使用方法。
[0009]当研究本专利技术的当前描述时，其他目的和优点对于本领域技术人员将变得显而易见。
[0010]在本专利技术的第一方面，上述目的通过提供一种蛋白质复合物来解决，该蛋白质复合物包含
[0011]a)在N末端至C末端方向上具有通式(I)的第一多肽链
[0012]X
‑
DsF
‑
Y
‑
POI
ꢀꢀ
(I)，
[0013]和
[0014]b)在N末端至C末端方向上具有通式(II)的第二多肽链
[0015]X
‑
FimGt
‑
Y
‑
CPF
ꢀꢀ
(II)，
[0016]其中
[0017]X不存在或者表示细菌前导序列或易位序列，
[0018]DsF表示与FimGt或其细菌同源物结合所需的细菌DsF
‑
多肽，
[0019]Y不存在或者表示接头序列、可检测的肽序列和/或用于纯化所述多肽链的肽序列中的至少一者，
[0020]POI表示目的蛋白，
[0021]FimGt表示与DsF或其细菌同源物结合所需的细菌FimGt
‑
多肽，并且
[0022]CPF表示丝状噬菌体的外壳蛋白。
[0023]在本专利技术的第二方面，上述目的通过提供一种蛋白质复合物来解决，该蛋白质复合物包含
[0024]a)在N末端至C末端方向上具有通式(III)的第一多肽链
[0025]X
‑
SUB
‑
DsF
‑
Y
ꢀꢀ
(III)，
[0026]和
[0027]b)包含至少一个POI并且在N末端至C末端方向上具有通式(IV)的第二多肽链
[0028]X
‑
FimGt(POI)
‑
Y(POI)
‑
CPF
ꢀꢀ
(IV)，
[0029]其中
[0030]X不存在或者表示细菌前导序列或易位序列，
[0031]DsF表示与FimGt或其细菌同源物结合所需的细菌DsF
‑
多肽，
[0032]Y(POI)不存在或者表示其上连接有POI的分支接头序列、可检测的肽序列和/或用于纯化所述多肽链的肽序列中的至少一者，
[0033]POI表示目的蛋白，
[0034]FimGt(POI)表示与DsF或其细菌同源物结合所需的细菌FimGt
‑
多肽，
[0035]任选地其上连接有POI，
[0036]SUB表示底物或配体，并且
[0037]CPF表示丝状噬菌体的外壳蛋白。
[0038]有利地，根据本专利技术的蛋白质复合物通过式I和II以及式III和IV各自的独立连续多肽序列之间的供体链互补而稳定或基本稳定。
[0039]在本专利技术的第三方面，上述目的通过提供一种展示至少一种目的蛋白(POI)的丝状噬菌体来解决，该丝状噬菌体包含根据本专利技术的蛋白质复合物。优选的是根据本专利技术的丝状噬菌体文库，展示POI和/或底物和/或配本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种蛋白质复合物，其包含a)在N末端至C末端方向上具有通式(I)的第一多肽链X
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DsF
‑
Y
‑
POI(I)，和b)在N末端至C末端方向上具有通式(II)的第二多肽链X
‑
FimGt
‑
Y
‑
CPF(II)，其中X不存在或者表示细菌前导序列或易位序列，DsF表示与FimGt或其细菌同源物结合所需的细菌DsF
‑
多肽，Y不存在或者表示接头序列、可检测的肽序列和/或用于纯化所述多肽链的肽序列中的至少一者，POI表示目的蛋白，FimGt表示与DsF或其细菌同源物结合所需的细菌FimGt
‑
多肽，并且CPF表示丝状噬菌体的外壳蛋白。2.一种蛋白质复合物，其包含a)在N末端至C末端方向上具有通式(III)的第一多肽链X
‑
SUB
‑
DsF
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Y(III)，和b)包含至少一个POI并且在N末端至C末端方向上具有通式(IV)的第二多肽链X
‑
FimGt(POI)
‑
Y(POI)
‑
CPF(IV)，其中X不存在或者表示细菌前导序列或易位序列，DsF表示与FimGt或其细菌同源物结合所需的细菌DsF
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多肽，Y(POI)不存在或者表示其上连接有POI的分支接头序列、可检测的肽序列和/或用于纯化所述多肽链的肽序列中的至少一者，POI表示目的蛋白，FimGt(POI)表示与DsF或其细菌同源物结合所需的细菌FimGt
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多肽，任选地其上连接有POI，SUB表示底物，并且CPF表示丝状噬菌体的外壳蛋白。3.根据权利要求1或2所述的蛋白质复合物，其中所述细菌前导序列或易位序列选自通过分泌途径分泌的前导序列或通过易位系统易位的易位序列，例如PelB、DsbA、TorA和PhoA，以及一般分泌(Sec)途径、双精氨酸易位(Tat)途径、T2SS途径、T3SS途径、T5SS途径和SecA2途径。4.根据权利要求1至3中任一项所述的蛋白质复合物，其中所述细菌DsF多肽和细菌FimGt多肽来源于大肠杆菌或者选自来源于革兰氏阴性细菌，特别是肠杆菌科的革兰氏阴性细菌的DsF和/或FimGt的同源物。5.根据权利要求1至4中任一项所述的蛋白质复合物，其中Y选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：