PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，证实了PRRX1在DN肾小管细胞EMT及肾脏纤维化中的重要作用，而下调PRRX1可明显改善肾小管EMT，抑制肾脏纤维化。因此，PRRX1可以作为分子靶点用于制备防治DN的药物，为DN防治药物的研发提供了新的思路。为DN防治药物的研发提供了新的思路。为DN防治药物的研发提供了新的思路。

【技术实现步骤摘要】
TTTTGTGGTC AAAGATGAAC TTTGGCTGGT CATGAAATTA CTAAGTGGAG GTTCAATGTT GGATATCATA AAATACATTG TCAACCGAGG AGAACACAAG AATGGAGTTC TGGAAGAGGC AATAATAGCA ACAATTCTTA AAGAGGTTTT GGAAGGCTTA GACTATCTAC ACAGAAACGG TCAGATTCAC AGGGATTTGA AAGCTGGTAA TATTCTTCTG GGTGAGGATG GTTCAGTACA AATAGCAGAT TTTGGGGTAA GTGCGTTCCT AGCAACAGGG GGTGATGTTA CCCGAAATAA AGTAAGAAAA ACATTCGTTG GCACCCCATG TTGGATGGCT CCTGAAGTCA TGGAACAGGT GAGAGGCTAT GACTTCAAGG CTGACATGTG GAGTTTTGGA ATAACTGCCA TTGAATTAGC AACAGGAGCA GCGCCTTATC ACAAATATCC TCCCATGAAA GTGTTAATGT TGACTTTGCA AAATGATCCA CCCACTTTGG AAACAGGGGT AGAGGATAAA GAAATGATGA AAAAGTACGG CAAGTCCTTT AGAAAATTAC TTTCACTGTG TCTTCAGAAA GATCCTTCCA AAAGGCCCAC AGCAGCAGAA CTTTTAAAAT GCAAATTCTT CCAGAAAGCC AAGAACAGAG AGTACCTGAT TGAGAAGCTG CTTACAAGAA CACCAGACAT AGCCCAAAGA GCCAAAAAGG TAAGAAGAGT TCCTGGGTCA AGTGGTCACC TTCATAAAAC CGAAGACGGG GACTGGGAGT GGAGTGACGA CGAGATGGAT GAGAAGAGCG AAGAAGGGAA AGCAGCTTTT TCTCAGGAAA AGTCACGAAG AGTAAAAGAA GAAAATCCAG AGATTGCAGT GAGTGCCAGC ACCATCCCCG AACAAATACA GTCCCTCTCT GTGCACGACT CTCAGGGCCC ACCCAATGCT AATGAAGACT ACAGAGAAGC TTCTTCTTGT GCCGTGAACC TCGTTTTGAG ATTAAGAAAC TCCAGAAAGG AACTTAATGA CATACGATTT GAGTTTACTC CAGGAAGAGA TACAGCAGAT GGTGTATCTC AGGAGCTCTT CTCTGCTGGC TTGGTGGATG GTCACGATGT AGTTATAGTG GCTGCTAATT TACAGAAGAT TGTAGATGAT CCCAAAGCTT TAAAAACATT GACATTTAAG TTGGCTTCTG GCTGTGATGG GTCGGAGATT CCTGATGAAG TGAAGCTGAT TGGGTTTGCT CAGTTGAGTG TCAGC。
[0010]在一种优选方案中，PRRX1作为药物靶点在制备抗糖尿病肾病防治药物中的应用。
[0011]PRRX1用于制备糖尿病肾病防治药物时，药物可以制成固体制剂或者液体制剂。进一步地，在本专利技术提供的技术方案的基础上，药物可以制成注射剂、口服液、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊剂。
[0012]在一种优选方案中，PRRX1以腺相关病毒(AAV)作为载体，制备PRRX1敲低腺相关病毒(pAAV
‑
U6
‑
shRNA
‑
PRRX1
‑
CMV bGlobin
‑
eGFP
‑
3Flag，简称为pAAV
‑
PRRX1)。
[0013]本专利技术还提供PRRX1敲低腺相关病毒在制备糖尿病肾病防治药物中的应用。在一种优选方案中，本专利技术提及的PRRX1敲低腺相关病毒(pAAV
‑
U6
‑
shRNA
‑
PRRX1
‑
CMV bGlobin
‑
eGFP
‑
3Flag，简称为pAAV
‑
PRRX1)，制备方法包括如下步骤：
[0014]1)质粒构建：
①
载体线性化：以质粒PT
‑
2743(pAAV
‑
U6
‑
shRNA
‑
PRRX1
‑
CMV bGlobin
‑
eGFP
‑
3Flag)为骨架进行改造，采用BsmB I酶切，获得线性化的载体片段。
②
目的片段获取：将基因合成质粒pUC57
‑
2733用BsmBI酶切，获得目的基因PRRX1。
③
骨架和目的基因连接：将线性化载体与片段混合，在T4连接酶作用下，实现片段与载体的连接。
④
转化大肠杆菌Trans1
‑
T1，挑取单克隆，并通过PCR检测、酶切和测序鉴定出阳性克隆。
[0015]2)腺相关病毒包装：将Lentity
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Easy Pacaging Mix和GFP Control Plasmid(或PRRX1腺相关病毒载体质粒)共转染AAV293包装细胞中，包装腺相关病毒，扩增收集病毒，采用超速离心的浓缩纯合发生得到高浓度的腺相关病毒保存液，测定病毒滴度；将空载体和腺相关病毒载体按照上述步骤共转染AAV293细胞，包装阴性对照腺相关病毒。
[0016]本专利技术通过qRT
‑
PCR、Western Blot及免疫学方法验证。结果发现：PRRX1在糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达明显升高，表明PRRX1上调与DN的形成有关。在体外实验中，在人源肾小管上皮细胞转染PRRX1过表达病毒，结果发现：上调PRRX1诱导肾小管EMT过程。在肾小
管上皮细胞敲低PRRX1，结果发现：敲低PRRX1可改善高糖诱导的EMT过程。进一步地，在小鼠肾脏特异性转染PRRX1过表达病毒，结果发现：PRRX1异常高表达可促进肾脏纤维化。接下来，又在糖尿病肾病小鼠肾脏特异性敲低PRRX1，结果发现：敲低PRRX1可抑制糖尿病肾病小鼠的肾脏纤维化过程。从而从正反两方面明确PRRX1在DN肾小管细胞EMT及肾脏纤维化过程中的作用，为DN防治药物的研发提供了新的思路。
[0017]本专利技术还提供一种诊断试剂，该诊断试剂以上述PRRX1敲低腺相关病毒为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。其中，药学上可接受的辅料在整个制剂技术发展过程中起到关键的作用，许多制剂中辅料占到大部分，因而很大程度上辅料的性质决定了制剂的性质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PRRX1在制备糖尿病肾病防治药物中的应用，其特征在于，所述PRRX1的序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PRRX1作为药物靶点在制备抗糖尿病肾病防治药物中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PRRX1以腺相关病毒作为载体。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物制成液体制剂或固体制剂。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜蕾，卢寅飞，印泽远，许柳，何林林，王雪，鲁茜，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：