LHPP基因在肝癌免疫治疗中的应用及肝癌免疫治疗药物制造技术

本发明专利技术提供了LHPP基因在肝癌免疫治疗中的应用及肝癌免疫治疗药物。促进LHPP基因表达的试剂可用于制备肝癌免疫治疗药物。本发明专利技术还提供了一种mRNA纳米药物，其由以下方法制备获得：将Meo

【技术实现步骤摘要】
LHPP基因在肝癌免疫治疗中的应用及肝癌免疫治疗药物


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫治疗
，具体涉及LHPP基因在肝癌免疫治疗中的应用及肝癌免疫治疗药物。

技术介绍

[0002]化疗是肿瘤治疗的基石，但是化疗药物缺乏靶向性，肿瘤细胞被杀伤的同时正常细胞受到极大损害(肝肾功能障碍/骨髓移植等)，这导致部分患者无法耐受化疗副作用而中断治疗。肿瘤细胞中有多种癌抑制相关基因，抑癌基因在正常细胞中高表达，和肿瘤的发生/发展，侵袭/转移密切相关。现阶段，针对肝癌相关基因的药物主要有小分子激酶抑制剂，如针对多靶点的酪氨酸激酶抑制剂(索拉菲尼，瑞格菲尼，乐伐替尼)。
[0003]传统化疗药物缺乏靶向性，易出现副作用，易发生耐药；其它可选的治疗方法(经动脉化疗栓塞，经皮热频消融等)均为有创治疗；而针对肝癌驱动相关基因的小分子激酶抑制剂药效不高，并且容易造成耐药，制备成本高，患者经济负担重。因此，缺乏有效的治疗手段已成为肝癌预后差的原因。
[0004]肝癌已被证明具有免疫原性，并且已经为肝癌治疗引入了免疫治疗策略，旨在通过诱导或增强现有的肿瘤特异性免疫反应来选择性地靶向肿瘤细胞。但是肝脏主要倾向于耐受，这在一定程度上可能会对肝癌的免疫治疗带来挑战，这可能跟某些重要基因的缺失相关。因此，寻找肝癌免疫耐受中关键的一些基因，在此基础上寻找解决方案对于肝癌免疫治疗至关重要。
[0005]mRNA技术通过核酸在细胞内表达外源蛋白，也就是表面抗原，激活细胞的免疫反应或者以此得到正常的功能蛋白，修复受损基因。但是外源性RNA到达体内肿瘤细胞中需要克服多重生理屏障。因此需要寻找高效率的递送系统帮助mRNA进入细胞。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的在于提供LHPP基因在肝癌免疫治疗中的应用及肝癌免疫治疗药物。LHPP可参与肝癌的免疫治疗，其通过影响自噬调节IFN
‑
β的表达，进而增强STAT1入核，促进肝癌细胞分泌的T细胞相关的趋化因子的表达，最终促进CD8
+
T细胞浸润。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
[0008]促进LHPP基因表达的试剂在制备肝癌免疫治疗药物中的应用。
[0009]在一些实施例中，所述肝癌免疫治疗药物为肝癌T细胞免疫治疗药物。
[0010]在一些实施例中，所述药物可以促进CD8
+
T细胞浸润。
[0011]在一些实施例中，所述药物具有以下效果中的至少一种：(1)促进细胞自噬；(2)促进IFN
‑
β的表达；(3)激活JAK
‑
STAT1信号通路；(4)促进STAT1入核；(5)促进以下趋化因子中的一种或多种的表达：CXCL10、CXCL11。
[0012]在一些实施例中，所述促进LHPP基因表达的试剂选自激动剂、过表达质粒载体、载有LHPP基因mRNA的纳米颗粒。
[0013]在一些实施例中，所述药物还包含PD1抗体。
[0014]本专利技术还提供了一种肝癌免疫治疗药物，所述药物包含促进LHPP基因表达的试剂及药物学上可接受的辅料。
[0015]在一些实施例中，所述药物还包含PD1抗体。
[0016]在一些实施例中，所述促进LHPP基因表达的试剂为纳米颗粒，其由以下方法制备获得：将Meo
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PEG
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Dlink
m
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PLGA溶液、LHPP基因的mRNA水溶液和阳离子脂质体溶液混匀，在搅拌条件下逐滴加入到水中，获得纳米溶液；将所述纳米溶液转移至超滤膜中离心分离，获得所述纳米颗粒。
[0017]在一些实施例中，所述PEG
‑
Dlink
m
‑
PLGA、LHPP基因的mRNA和阳离子脂质体的质量比为250：1：25。
[0018]在一些实施例中，所述阳离子脂质体通过以下方法制备获得：将1，2
‑
环氧十四烷加入到0代PAMAM树枝状聚合物中，混匀，在搅拌条件下于90℃反应2天，反应产物通过硅胶色谱分离；所述1，2
‑
环氧十四烷和0代PAMAM树枝状聚合物的摩尔比为7：1。将所述阳离子脂质体命名为G0
‑
C14，使用所述G0
‑
C14制备纳米药物可以提高转染效率。
[0019]在一些实施例中，所述Meo
‑
PEG
‑
Dlinkm
‑
PLGA溶液的溶剂为二甲基甲酰胺。
[0020]在一些实施例中，所述搅拌的转速为1000
±
200rpm。
[0021]本专利技术首次发现了LHPP可参与肝癌的免疫治疗，并且和肝癌的生存预后相关。LHPP通过影响自噬调节IFN
‑
β的表达，进而增强STAT1入核，促进肝癌细胞分泌的T细胞相关的趋化因子的表达，最终促进CD8
+
T细胞浸润。因此，LHPP基因可作为肝癌免疫治疗的新靶点，促进LHPP基因表达的试剂可以作为肝癌T细胞免疫治疗的药物。
[0022]进一步地，本专利技术还发现，促进LHPP基因表达的试剂与PD1抗体联合使用能产生协同作用，增加对肝癌的免疫治疗效果。
[0023]本专利技术通过原料优化制备获得了一种载有LHPP基因mRNA的纳米药物，Meo
‑
PEG
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Dlink
m
‑
PLGA高分子材料中，PEG结构能够保护负载的mRNA免受血液中阳离子蛋白或核酸酶攻击，延长纳米药物的血液循环时间；另一方面，结构中的Dlink
m
，在肿瘤细胞内的弱酸微环境下(肿瘤细胞内弱酸微环境pH6.5)断裂，释放出负载的mRNA，具有明显的CD8
+
T细胞浸润并发挥杀伤肿瘤的作用。通过“纳米沉淀法”合成获得所述纳米药物，纳米粒子合成过程中可按实际需求按比例投入原料，在不同的pH条件下能高效输送mRNA到肿瘤细胞内，并在肿瘤胞浆内弱酸微环境的作用下，释放出mRNA，达到治疗肿瘤的目的。其具有以下优点：(1)在血液中的循环时间较长；(2)在肿瘤中富集量高；(3)Meo
‑
PEG
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Dlink
m
‑
PLGA在pH6.5的弱酸性环境中加快mRNA的释放；(4)可高效过表达靶基因；(5)增强肝癌的免疫治疗；(6)制备方法简单，成本低。
[0024]本专利技术通过过表达LHPP靶基因可增加肝癌免疫治疗，减少传统治疗副作用，为临床肝癌患者提供新的治疗方案。
附图说明
[0025]图1为载有LHPP基因mRNA的纳米粒子的尺寸分布图。
[0026]图2为载有LHPP基因mRNA的纳米粒子的电势图。
[0027]图3为载有mRNA的纳米粒子在不同pH溶液中释放曲线。
[0028]图4为Cy5...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.促进LHPP基因表达的试剂在制备肝癌免疫治疗药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝癌免疫治疗药物为肝癌T细胞免疫治疗药物。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物可以促进CD8
+
T细胞浸润。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物具有以下效果中的至少一种：(1)促进细胞自噬；(2)促进IFN
‑
β的表达；(3)激活JAK
‑
STAT1信号通路；(4)促进STAT1入核；(5)促进以下趋化因子中的一种或多种的表达：CCL5、CXCL10、CXCL11。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进LHPP基因表达的试剂选自激动剂、过表达质粒载体、载有LHPP基因mRNA的纳米颗粒。6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包含PD1抗体。7.一种肝癌免疫治疗药物，其特征在于，所述药物包含促进LHPP基因表达的试剂及药物学上可接受的辅料。8.如权利要求7所述的肝癌免疫治疗药物，其特征在于，所述药物还包含PD1抗体。9.如权利要求7所述的肝癌免疫治疗药物，其特征在于，所述促进LHPP基因表达的试剂为纳米颗粒，其由以下方法制备获得：将Meo
...

【专利技术属性】
技术研发人员：许小丁，刘少敏，张凤倩，林春浩，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：