一种甲氨蝶呤纳米载药体系及其制备方法与治疗类风湿性关节炎的应用技术

本发明专利技术公开了一种甲氨蝶呤纳米载药体系及其制备方法与治疗类风湿性关节炎的应用，具体为一种甘露糖修饰的还原响应性囊泡包载甲氨蝶呤用于类风湿性关节炎的治疗技术方案。本发明专利技术公开的甲氨蝶呤纳米载药体系递送到巨噬细胞，纳米药物进入炎症部位巨噬细胞内，发挥药物作用，将M1M转化为M2M；在RA小鼠模型中，Man

【技术实现步骤摘要】
一种甲氨蝶呤纳米载药体系及其制备方法与治疗类风湿性关节炎的应用


[0001]本专利技术涉及纳米药物，具体涉及一种甘露糖修饰的还原响应性囊泡包载甲氨蝶呤用于类风湿性关节炎的治疗技术方案。

技术介绍

[0002]类风湿性关节炎（RA）是一种系统性自身免疫疾病，临床的一些抗风湿性关节炎药物可以控制由RA引起的炎症和疼痛，但不能有效的阻止骨破坏的形成与发展，这些造成了RA患者的关节疼痛、关节部位严重肿胀、关节畸形甚至永久性不可逆损伤。部分RA药物已经被批准用于临床，其中甲氨蝶呤（MTX）在低剂量治疗时可以实现对RA的整体抗炎效果，其具体治疗机制目前尚未完全研究清楚。MTX作为一种亲水性的小分子药物，其具有一些药物治疗缺陷，如：循环时间短，生物利用率低，起效慢，需要长期持续治疗，容易发生不良反应和造成骨侵蚀。针对MTX的治疗缺点，现有技术出现了许多包载MTX的纳米药物，其可以通过主动靶向和被动靶向作用递送到患病部位进行抗风湿性治疗，比如一种基于人血清白蛋白的装载有MTX的纳米药物（MTX@HSA NMs）用于SPARC靶向RA治疗。现有技术公开的MTX纳米药物制备方法还需简化，治疗效果还需提升。

技术实现思路

[0003]现有包载MTX的脂质体、纳米颗粒等药物实现了通过被动运输的方式进入炎症部位，但是这些纳米体系的治疗效果还需改善。本专利技术公开了新的甘露糖修饰的还原响应性囊泡包载甲氨蝶呤，Man
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PMTX对RA小鼠腿部炎症的消除效果、对病变关节处滑膜的炎症浸润减缓、软骨的骨保护作用以及关节处免疫微环境的调控具有优异的作用效果。
[0004]本专利技术采用如下技术方案：一种甲氨蝶呤纳米载药体系，包括聚合物囊泡以及甲氨蝶呤；聚合物包括PEG
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P(TMC
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DTC)
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Y、PEG
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P(CL
‑
DTC)
ꢀ‑
Y或者PEG
‑
P(LA
‑
DTC)
ꢀ–
Y，Y为阳离子片段；进一步的，聚合物还包括X
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PEG
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P(TMC
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DTC)、X
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PEG
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P(CL
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DTC)或者X
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PEG
‑
P(LA
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DTC)，X为修饰分子；优选的，X为甘露糖。
[0005]本专利技术以含双硫五元环的DTC单体、其他单体（TMC、CL、LA）与聚乙二醇共聚制备嵌段聚合物，结合阳离子片段或者修饰分子，得到用于包载甲氨蝶呤的聚合物，聚合物的分子量为10～50 kg/mol，聚合物中，PEG链段的分子量为2～10 kg/mol，阳离子片段的分子量为0.1～2 kg/mol，DTC链段的分子量为1～5 kg/mol。优选的，聚合物的分子量为20～35 kg/mol，聚合物中，DTC链段的分子量为1.5～4 kg/mol。
[0006]本专利技术公开了上述甲氨蝶呤纳米载药体系的制备方法，以聚合物、甲氨蝶呤为原料，制备甲氨蝶呤纳米载药体系；其中，所述聚合物为含阳离子片段聚合物，包括PEG
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P(TMC
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DTC)
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Y、PEG
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P(CL
‑
DTC)
ꢀ‑
Y或者PEG
‑
P(LA
‑
DTC)
ꢀ–
Y；或者聚合物为含阳离子片段聚合物和含修饰分子聚合物（包括X
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PEG
‑
P(TMC
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DTC)、X
‑
PEG
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P(CL
‑
DTC)或者X
‑
PEG
‑
P(LA
‑
264.7细胞与PMTX或Man
‑
PMTX孵育4小时后的CLSM图像，用FITC标记的MTX和Cy5标记的聚合物囊泡（5
ꢀµ
g Cy5/mL和14
ꢀµ
g FITC/mL），比例尺：50
ꢀµ
m。（B）流式细胞仪检测RAW 264.7细胞在与自由MTX、PMTX或Man
‑
PMTX（MTX: 20
ꢀµ
g/mL）孵育24 h后M2M的含量（CD206+, n = 3）及其半定量分析（C）。
[0015]图6为LPS刺激的BMDMs加入PBS、PMTX或Man
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PMTX（MTX: 20
ꢀµ
g/mL, n = 4）孵育24 h后的激活和复极化。（A）典型的流式细胞仪荧光强度图；（B） M1M在总细胞中占有的比例和（C）M2M/M1M比例。
[0016]图7为LPS 刺激的BMDMs在和PBS、PMTX或Man
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PMTX（MTX: 20
ꢀµ
g/mL, n = 4）孵育24 h后培养基中细胞因子（A）TNF
‑
α、（B）IL
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1β、（C）IL
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10的浓度。
[0017]图8为RA小鼠模型的建立（500 μg酵母聚糖/膝关节）以及PMTX和Man
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PMTX在ZIA小鼠体内的靶向性（Cy5: 0.3
ꢀµ
g/只，MTX: 4 mg/kg，n = 3）。（A）ZIA小鼠关节出现明显肿胀；注射酵母聚糖12小时前后小鼠的（B）膝关节直径和（C）血浆中IL
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6和TNF
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α的浓度（n = 6）。（D）静脉注射Cy5标记的PMTX或Man
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PMTX后RA小鼠的体内荧光成像和半定量分析。注射后24小时后关节和主要器官的离体荧光图像（E）以及后腿的离体成像和荧光半定量分析（F）。
[0018]图9为Man
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PMTX给药剂量和给药次数对抗小鼠RA疗效的影响（第一针给药设为第0天，n = 5）。PBS和自由MTX组为对照。（A）实验安排。（B）炎症和（C）健康侧膝关节宽度的变化。（D）炎症和（E）健康侧的膝关节围度的变化。
[0019]图10为Man
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PMTX给药剂量和给药次数对于RA小鼠细胞因子分泌的影响。治疗第三天（A）、第六天（B）和第九天（C）血浆中TNF
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α的浓度（n = 5），以及第九天关节部位（D）TNF
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α和（E）IL
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6的浓度（n = 3）。
[0020]图11为Man
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PMTX、PMTX或自由MTX对RA小鼠的治疗。（A）实验安排。在第0、3天静脉注射（MTX：4 mg/kg）两次，健康小鼠和PBS为对照。（B）RA膝关节宽带和膝围的变化（n = 7）及（C）第7天血浆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲氨蝶呤纳米载药体系，其特征在于，包括聚合物囊泡以及甲氨蝶呤；聚合物包括PEG
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P(TMC
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DTC)
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Y、PEG
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P(CL
‑
DTC)
ꢀ‑
Y或者PEG
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P(LA
‑
DTC)
ꢀ–
Y，Y为阳离子片段。2.根据权利要求1所述甲氨蝶呤纳米载药体系，其特征在于，聚合物还包括X
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PEG
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P(TMC
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DTC)、X
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PEG
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P(CL
‑
DTC)或者X
‑
PEG
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P(LA
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DTC)，X为修饰分子。3.根据权利要求2所述甲氨蝶呤纳米载药体系，其特征在于，X为甘露糖。4. 根据权利要求1所述甲氨蝶呤纳米载药体系，其特征在于，聚合物的分子量为10～50 kg/mol，聚合物中，PEG链段的分子量为2～10 kg/mol，阳离子片段的分子量为0.1～2 kg/mol，DTC链段的分子量为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟凤华，杨靓，钟志远，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：