一种区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品及其试剂盒、应用制造技术

本发明专利技术涉及一种区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品及其试剂盒、应用，属于动物检疫技术领域。本发明专利技术所提供的阳性对照品为经序列改造的阳性对照，选取特异性检测引物扩增的非洲猪瘟病毒P72基因靶标序列中的一部分区域更改为内标探针序列；引物探针以非洲猪瘟病毒P72基因序列为靶目标，设计了一对特异性引物、探针以及内标探针。利用探针引物制备了检测用试剂盒，试剂盒中含有经序列改造的阳性对照，防污染双重荧光PCR检测反应液、酶制剂、阴性对照。本发明专利技术提供的试剂盒在检测应用中，能够排除实验中待测样品被试剂盒中阳性对照污染的因素，准确获得非洲猪瘟病毒检测结果。本发明专利技术的试剂盒具有结果准确、检测特异性强、敏感性高、操作简便防污染等优点。操作简便防污染等优点。操作简便防污染等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品及其试剂盒、应用


[0001]本专利技术涉及一种区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品及其试剂盒、应用，属于动物检疫


技术介绍

[0002]非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的一种急性、烈性的传染病，强毒株感染时死亡率高达100％。我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情后开始在全国范围不断蔓延，对我国养猪业造成严重危害，由于目前缺乏针对非洲猪瘟病毒的有效疫苗，使用荧光PCR检测技术精准检出病猪以达到对非洲猪瘟病猪“拔牙”的效果便成了防范疫情在猪场蔓延的主要手段，因此迅速、准确的检测方法对该疫病的防控就处于十分重要的地位。
[0003]荧光PCR技术在病原检测方面有独到优势，快速、灵敏、准确是其最大亮点，近年来越来越受到大家的青睐。TaqMan荧光实时定量检测病原的技术具有灵敏度高、特异性强、快速诊断、操作简单、重复性好、自动化程度高、易标准化操作和试验的生物安全性高等突出优点，灵敏度比普通PCR灵敏度高100倍以上，是国际上公认的快速准确本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品，其特征在于，所述阳性对照品为经序列改造的阳性对照，选取特异性检测引物扩增的非洲猪瘟病毒P72基因靶标序列的一部分区域更改为内标探针序列。2.根据权利要求1所述的区分阳性对照污染待测样品的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品，其特征在于，所述经序列改造的阳性对照的序列如SEQ ID No.1所示，下划线为序列改造部分，具体为：aattctcttgctctggatacgttaatatgaccactgggttggtattcctcccgtggcttcaaagcaaaggtaaTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAggttttaatcgcattgcctccgtagtggaagggtatgtaagagctgcagaactttgatgga。3.一种含有如权利要求1所述的非洲猪瘟病毒荧光PCR阳性对照品的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：经序列改造的阳性对照，防污染双重荧光PCR检测反应液、酶制剂、阴性对照。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述防污染双重荧光PCR检测反应液是由2体积浓度为10μmol/L上游引物、2体积浓度为10μmol/L的下游引物、0.5体积浓度为10μmol/L的检测探针、0.2体积浓度为10μmol/L的内标探针、5体积的5
×
RT缓冲液、3体积浓度为25mmol/L的MgCl2、3体积的dNTP Mix和4.3体积的焦碳酸二乙酯处理水组成。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述检测引物探针以非洲猪瘟病毒P72基因序列为靶目标，内标探针可与检测探针共用引物，无序列交叉，序列为：上游引物 ASFVF，如SEQ ID No.2所示: TCAAAGTTCTGCAGCTCTTACATAC；下游引物 ASFVR，如SEQ ID No.3所示: TCTTGCTCTRGATACGTTAATATGRC；检测探针 ASFVP，如SEQ ID No.4所示:FAM
‑
CACTGGGTTGGTATTCCTCCCGT
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：丁凯，臧京帅，苏莹，王丽萍，
申请(专利权)人：北京森康生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：