同时检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，属于生物医学检测技术领域。本发明专利技术提供的试剂盒包括针对甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的核酸提取液、检测液和SAT酶液，通过优化设计更适合于以上这些微生物检测的引物和探针，并在检测过程中分步添加各组分进行分步反应可以实现对多种呼吸道病原体的实时、快速检测，并且灵敏度高、特异性好，扩增产物RNA易降解不会引起环境污染，且在检测过程中不会引起样本交叉污染。且在检测过程中不会引起样本交叉污染。

【技术实现步骤摘要】
同时检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医学检测
，具体涉及一种同时检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，还涉及同时检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的专用引物和探针，特别是涉及使用特异性靶标捕获技术和实时荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Test，SAT)结合的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测中使用的引物、探针及相关试剂盒。

技术介绍

[0002]呼吸系统感染性疾病是临床上的常见病、多发病。引起呼吸道疾病的病原体种类很多，通过临床症状和常规的实验室检测很难鉴别确定所感染的病原体种类。呼吸道病毒可以通过空气传播，是引起急性呼吸系统感染性疾病的病原体，具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，严重危害人类的健康。常见的呼吸道病毒包括以下几种。
[0003]流行性感冒病毒(Influenza virus)属于正粘病毒科(O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，所述流感病毒包括甲型流感病毒和乙型流感病毒，其特征在于，包括：(T1)核酸提取液：其包含含有第一特异性捕获探针、第二特异性捕获探针、第三特异性捕获探针和第四特异性捕获探针的固相支持物，其中第一至第四特异性捕获探针分别用于捕获甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的检测序列；(T2)检测液：其包含第一引物、第二引物、第一靶标检测探针、第三引物、第四引物、第二靶标检测探针、第五引物、第六引物、第三靶标检测探针、第七引物、第八引物和第四靶标检测探针；其中所述第一引物、第二引物和所述第一靶标检测探针配合，用于检测甲型流感病毒的靶标序列；所述第三引物、第四引物和所述第二靶标检测探针配合，用于检测乙型流感病毒的靶标序列；所述第五引物、第六引物和所述第三靶标检测探针配合，用于检测呼吸道合胞病毒的靶标序列；所述第七引物、第八引物和第四靶标检测探针配合，用于检测副流感病毒的靶标序列；在所述第一靶标检测探针、第二的靶标检测探针、第三靶标检测探针和第四靶标检测探针的核苷酸序列两端分别携带有荧光报告基团和淬灭基团，且四者携带的荧光报告基团不同；(T3)SAT酶液：其包含至少一种RNA聚合酶和M
‑
MLV反转录酶；其中：所述第一特异性捕获探针包含如SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列，所述第二特异性捕获探针包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列，所述第三特异性捕获探针包含如SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列，所述第四特异性捕获探针包含如SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列；所述第一引物包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述第二引物包含如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述第一靶标检测探针包含如SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；所述第三引物包含如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，所述第四引物包含如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列，所述第二靶标检测探针包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列；所述第五引物包含如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列，所述第六引物包含如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列，所述第三靶标检测探针包含如SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列；所述第七引物包含如SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列，所述第八引物包含如SEQ ID NO:11所示的核苷酸序列，所述第四靶标检测探针包含如SEQ ID NO:12所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：(M1)洗涤液：其含有NaCl和SDS；优选含有5
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50mM HEPES、50
‑
500mM NaCl、0.5
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1.5％SDS、1
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10mM EDTA；和/或(M2)矿物油；和/或(M3)阳性对照：含有甲型流感病毒核酸、乙型流感病毒核酸、呼吸道合胞病毒核酸、副流感病毒核酸的体系，可选为含有甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒体外转录RNA的体系；和/或(M4)阴性对照：不含有甲型流感病毒核酸、乙型流感病毒核酸、呼吸道合胞病毒核酸、副流感病毒核酸的体系。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取液的组分包括：250
‑
800mM HEPES、4
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10％LLS(十二烷基磺酸锂)、1
‑
50μ
Μ的第一特异性捕获探针、1
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50μΜ的第二特异性捕获探针、1
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50μΜ的第三特异性捕获探针、1
‑
50μΜ的第四特异性捕获探针、50
‑
500mg/L磁珠；所述检测液的组分包括：250
‑
750pmol/mL的第一引物、250
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750pmol/mL的第二引物、250
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750pmol/mL的第三引物、250
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750pmol/mL的第四引物、250
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750pmol/mL的第五引物、250
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750pmol/mL的第六引物、250
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750pmol/mL的第七引物、250
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750pmol/mL的第八引物、250
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750pmol/mL的第一靶标检测探针、250
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750pmol/mL的第二靶标检测探针、250
‑
750pmol/mL的第三靶标检测探针、250
‑
750pmol/mL的第四靶标检测探针；所述SAT酶液的组分包括：16000
‑
160000U/mL的M
‑
MLV反转录...

【专利技术属性】
技术研发人员：居金良，崔振玲，葛俊楠，侯伟，
申请(专利权)人：上海仁度生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：