本发明专利技术提供了一种用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒。其中，该试剂盒包括DNA病毒引物探针混合液和RNA病毒引物探针混合液；其中，DNA病毒引物探针混合液中的引物包括SEQ ID NO：1等序列；DNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第一荧光基团和第一淬灭基团的SEQ ID NO：3等序列；RNA病毒引物探针混合液中的引物包括SEQ ID NO：10等序列；RNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第二荧光基团和第二淬灭基团的SEQ ID NO：12等序列。能够解决现有技术中病毒性心肌炎相关检测时间长的问题，适用于生物技术领域。域。域。
【技术实现步骤摘要】
用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒
[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒。
技术介绍
[0002]病毒性心肌炎是由病毒感染所致心肌炎症细胞浸润和/或心肌细胞坏死的复杂心血管疾病，好发于青少年，是导致儿童和青壮年发生猝死的常见病因之一。病毒性心肌炎患者大多临床症状轻微，部分患者病情可进一步加重甚至出现爆发型心肌炎，造成较大的负担。现有技术中，并没有确切的“病毒性心肌炎相关病毒”的分类概念或分类方法，病毒性心肌炎可能由一种病毒或多种病毒混合感染所引起，能够导致病毒性心肌炎的病毒多达三十余种。
[0003]目前对于病毒的检测方法包括病毒分离培养、免疫学方法和分子生物学方法。病毒分离培养是诊断病毒感染的金标准，但是病毒分离培养所需周期长、阳性率不高且操作复杂，该方法在临床很少使用。免疫学方法基于抗原抗体反应原理，检测患者是否携带某种病毒抗原或是否产生抗体。但患者感染病毒后需间隔一段时间才能检测出相应的抗体，有一定的滞后性，抗原检测由于其方法学的限制导致其灵敏度和特异度不是很理想。PCR方法在特异性引物的引导下可在数小时内将病毒的核酸扩增数百万倍，具有高度的灵敏性和特异性。实时荧光定量PCR技术由于其结果可实时检测、无需开管、简便快捷、重复性好和污染少等优点，已成为目前病毒筛查的常用方法，可作为临床病原诊断的有效、快速的手段。
[0004]目前我国市场上有肠道病毒多重检测试剂盒和呼吸道病毒多重检测试剂盒，但尚无用于病毒性心肌炎相关病毒的检测试剂盒，而肠道病毒和呼吸道病毒均可引起该疾病，在现有技术中并无具体的何种病毒或病毒组合能够导致病毒性心肌炎的研究。用目前的肠道病毒检测试剂盒和呼吸道病毒检测试剂盒进行该疾病病原体的筛查则费时费力，造成时间、实验成本的浪费，特别是给处于危急重症中的患者选择治疗方向带来困惑，现有技术难以在病情凶险的情况下为医生抉择是否进行抗感染治疗提供科学、准确的依据。所以迫切需要开发一种能够同时扩增病毒性心肌炎相关病毒的检测试剂。
技术实现思路
[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒，以解决现有技术中病毒性心肌炎相关检测时间长的问题。
[0006]为了实现上述目的，根据本专利技术的第一个方面，提供了一种用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒，该试剂盒包括DNA病毒引物探针混合液和RNA病毒引物探针混合液；其中，DNA病毒引物探针混合液中的引物包括如下序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8；DNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第一荧光基团和第一淬灭基团的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和
SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：9的5'或3'端均带有不同的第一荧光基团，相应地，3'或5'端均带有不同且能够吸收第一荧光基团激发的荧光的第一淬灭基团；RNA病毒引物探针混合液中的引物包括如下序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；RNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第二荧光基团和第二淬灭基团的SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18的5'或3'端均带有不同的第二荧光基团，相应地，3'或5'端均带有不同且能够吸收第二荧光基团激发的荧光的第二淬灭基团。
[0007]进一步地，DNA病毒引物探针混合液和RNA病毒引物探针混合液均包括用于检测内参基因的引物和探针；内参基因包括人源基因RNP。
[0008]进一步地，DNA病毒引物探针混合液和RNA病毒引物探针混合液均包括用于检测内参基因的引物和探针，用于检测内参基因的引物包括SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20，用于检测内参基因的探针包括连接有第三荧光基团和第三淬灭基团的SEQ ID NO：21，第三荧光基团和第三淬灭基团分别连接在SEQ ID NO：21的两端，第三荧光基团与第一荧光基团和第二荧光基团均不同，第三淬灭基团与第一淬灭基团和第二淬灭基团均不同。
[0009]进一步地，第一荧光基团、第二荧光基团或第三荧光基团包括FAM、JOE、TexasCY5、VIC、TET、HEX或ROX；第一淬灭基团、第二淬灭基团或第三淬灭基团包括DABCYL、BHQ1、BHQ2、BHQ3或TAMRA。
[0010]进一步地，DNA病毒引物探针混合液中的探针包括：FAM
‑
SEQ ID NO：3
‑
DABCYL，JOE
‑
SEQ ID NO：6
‑
BHQ1和
[0011]进一步地，RNA病毒引物探针混合液中的探针包括：FAM
‑
SEQ ID NO：12
‑
DABCYL，JOE
‑
SEQ ID NO：15
‑
BHQ1和
[0012]进一步地，用于检测内参基因的探针包括CY5
‑
SEQ ID NO：21
‑
BHQ3。
[0013]进一步地，试剂盒还包括酶混合液、RNA病毒阳性对照品、DNA病毒阳性对照品、阴性对照品；酶混合液中包括Taq DNA聚合酶和逆转录酶；RNA病毒阳性对照品包括具有RNA病毒目的片段的核苷酸序列；DNA病毒阳性对照品包括具有DNA病毒目的片段的核苷酸序列；阴性对照品为无核酸酶水；DNA病毒目的片段能够与DNA病毒引物探针混合液中的引物特异性结合；RNA病毒目的片段能够与RNA病毒引物探针混合液中的引物特异性结合。
[0014]进一步地，酶混合物中还包括缓冲液，缓冲液包括KCl、Tris HCl、MgCl2、Triton X
‑
100和dNTPs；dNTPs包括dATPs、dGTPs、dCTPs和dTTPs；优选地，缓冲液包括500mM KCl、100mM Tris HCl pH 9.0 25℃、15mM MgCl2和1％ Triton X
‑
100；优选地，dNTPs的浓度为0.01mM
‑
1M，优选为0.1
‑
10mM，更优选为0.2mM。
[0015]进一步地，试剂盒还包括核酸提取试剂。
[0016]应用本专利技术的技术方案，利用上述引物和探针，对上述3种DNA病毒或3种RNA病毒同时进行检测，能够降低对于心肌炎相关病毒的检测时间和检测成本。
附图说明
[0017]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测病毒性心肌炎相关病毒的多重荧光定量PCR的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括DNA病毒引物探针混合液和RNA病毒引物探针混合液；其中，所述DNA病毒引物探针混合液中的引物包括如下序列：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8；所述DNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第一荧光基团和第一淬灭基团的SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：9的5'或3'端均带有不同的第一荧光基团，相应地，3'或5'端均带有不同且能够吸收所述第一荧光基团激发的荧光的第一淬灭基团；所述RNA病毒引物探针混合液中的引物包括如下序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17；所述RNA病毒引物探针混合液中的探针包括连接有第二荧光基团和第二淬灭基团的SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18的5'或3'端均带有不同的第二荧光基团，相应地，3'或5'端均带有不同且能够吸收所述第二荧光基团激发的荧光的第二淬灭基团。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA病毒引物探针混合液和所述RNA病毒引物探针混合液均包括用于检测内参基因的引物和探针；所述内参基因包括人源基因RNP。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA病毒引物探针混合液和所述RNA病毒引物探针混合液均包括用于检测内参基因的引物和探针，所述用于检测内参基因的引物包括SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20，用于检测内参基因的探针包括连接有第三荧光基团和第三淬灭基团的SEQ ID NO：21，所述第三荧光基团和所述第三淬灭基团分别连接在SEQ ID NO：21的两端，所述第三荧光基团与所述第一荧光基团和所述第二荧光基团均不同，所述第三淬灭基团与所述第一淬灭基团和所述第二淬灭基团均不同。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一荧光基团、所述第二荧光基团或所述第三荧光基团包括FAM、JOE、Texas CY5、VIC、TET、HEX或ROX；所述第一淬灭基团、第二淬灭基团或第三淬灭基团包括DABCYL、BHQ1、BHQ2、BH...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋岩，王俊文，徐飞，王海滨，宁永忠，刘薇，
申请(专利权)人：北京市垂杨柳医院，
类型：发明
国别省市：
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