一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法技术

本发明专利技术属生物技术领域，涉及细菌分离培养技术领域，具体涉及一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法。该细菌分离培养技术能稳定分离并扩增目标组织的优势和非优势菌群的单一菌株，适用于珍贵组织的细菌分离培养，操作安全、成本低及效果良好。可推进低微生物容量器官菌群相关研究，并与其他报道结果类似，本方法可供临床推广，对于分析低微生物容量器官菌群组成以及对机体健康影响的研究具有实际意义。的研究具有实际意义。

【技术实现步骤摘要】
一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法


[0001]本专利技术属生物
，涉及细菌分离培养
，特别涉及一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法。

技术介绍

[0002]据研究报道，人类相关的微生物已经显示出巨大多样性、功能和与年龄相关的动态，它们不仅寄生于肠道及阴道等耳熟能详的高微生物容量器官，还寄生于既往认为无菌的乳腺、骨骼及大脑等低微生物容量器官。据研究记载，关于人类相关的微生物的研究，最初，集中在肠道，其后是关于其他高容量的微生物组的器官，例如阴道、皮肤及口腔，而对低容量微生物组的研究甚少。随着业内对有关菌群研究的进一步深入，低微生物容量器官的研究越来越被重视起来，但对其相关样本中菌群的分离培养仍存在很大困难。
[0003]基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法，该方法可用于分离低微生物容量器官组织内的优势和非优势菌株。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于基于现有技术的现状，提供一种从低微生物容量器官本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从低微生物容量器官组织中分离培养组织内共生菌群的方法，其特征在于，其包括：1)消化组织，其中包括：按照下表将下列成分加入到无菌离心管中，制备酶混合物，从组织样本中去除脂肪、纤维和坏死区域，并将组织切成片，然后将组织碎片转入含有酶混合物的无菌离心管，关闭管子，置于厌氧培养箱中消化；将细胞滤网MACS smartstrainter置于试管上过滤消化所得细胞悬浮液，接着用BHI培养基洗涤细胞滤网MACS smartfilter；收集到的细胞悬液离心，去上清，用BHI培养基重悬，得到BHI细胞悬液；2)分离培养组织菌群，其中包括：分离培养非优势菌株：取细胞悬液通过平板涂布法接种到BHI培养平板中；分离培养优势菌株：首先往剩余的细胞悬液中加BHI培养基，置于厌氧培养箱中培养，接着取培养基通过平板涂布法接种于BHI培养平板，置于厌氧培养箱培养；挑取3
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4个单克隆分别置于含BHI培养基的管子中，置于厌氧培养箱培养；BHI培养平板中长出少量上述单克隆；取细胞悬液通过平板涂布法接种于BHI培养平板中，置于厌氧培养箱培养；挑取3
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4个单克隆分别送16SrDNA全长测序，鉴定菌株纯度，并通过质谱仪鉴定菌种；初步扩增产物均显示为单一、明亮的条带，无非特异性条带产生，表明克隆中存在细菌。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的消化组织操作中，使用美天旎组织消化试剂盒130
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095
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929替代自制消化酶混合物。3.按权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵超，邬永琳，荣星喻，
申请(专利权)人：上海徐汇上医中山免疫治疗技术转化研究中心，
类型：发明
国别省市：