一种快速PCR缓冲液及其试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种快速PCR缓冲液及其试剂盒和方法，涉及PCR扩增技术领域，本发明专利技术采用Bis

【技术实现步骤摘要】
一种快速PCR缓冲液及其试剂盒和方法


[0001]本专利技术涉及PCR扩增
，具体而言，涉及一种快速PCR缓冲液及其试剂盒和方法。

技术介绍

[0002]PCR是聚合酶链式反应的简称，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，其研究对生物学各个领域有着深刻的影响，与医、农业、生物工程等的关系十分密切，例如PCR技术涉及在农业上育种的新途径，涉及在医学上检测、治疗遗传疾病，涉及以基因工程为基础的新兴工业，涉及法医物证鉴定、亲子鉴定等。
[0003]“快速PCR”(或“快速循环”)一般是指在10
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60分钟内完成30个循环。每个循环的实际时间长于用于变性、退火和延伸通常程序化的时间的总和，因为需要时间来使这些阶段中的每个阶段之间的温度升高。多年来，系统变得更快，变性、退火和延伸的动力学要求变得更加清晰。市面上专利技术了许多快速PCR仪，虽有能有效缩短反应时间，但仍需要结合快速PCR技术的进一步提升才能有效提高反应速率。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种快速PCR缓冲液及其试剂盒和方法。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术实施例提供了一种快速PCR扩增试剂盒，其包括PCR缓冲液和快速Taq酶；其中，所述PCR缓冲液中采用的缓冲对为Bis
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Tris。
[0008]第二方面，本专利技术实施例提供了一种快速PCR扩增的方法，其包括采用如前述实施例所述的试剂盒中的快速Taq酶以及PCR缓冲液进行PCR扩增。
[0009]第三方面，本专利技术实施例提供了一种快速PCR缓冲液，其包括以下组分：缓冲对Bis
‑
Tris、盐离子、表面活性剂和增强剂。
[0010]本专利技术具有以下有益效果：
[0011]本专利技术采用Bis
‑
Tris作为缓冲对用于制备PCR缓冲液，采用该PCR缓冲液用于快速PCR扩增，能够在酶量低至0.15625U/25μl体系时仍有较高扩增效率，具有扩增效率高、反应时间短、扩增稳定性高等特性，能有效缩短DNA样本检测时间。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0013]图1为验证例1中Bis Tris缓冲溶液不同pH值测试结果；
[0014]图2为验证例1中Bis Tris缓冲溶液(pH8.8)不同浓度测试；
[0015]图3为验证例2中不同种类铵盐测试结果；
[0016]图4为验证例3中不同种类钾盐测试结果；
[0017]图5为验证例4中含有和不含表面活性剂的扩增结果；
[0018]图6为验证例5中BSA与乙酰BSA在相同用量条件下扩增结果差异；
[0019]图7为验证例7中本专利技术提供的不同Taq酶和缓冲液的测试结果；
[0020]图8为AK Taq和5
×
Fast buffer与SpeedSTAR
TM
HS套装交叉测试结果。
具体实施方式
[0021]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0022]本专利技术实施例提供了一种快速PCR扩增试剂盒，其包括：采用PCR缓冲液和快速Taq酶；所述PCR缓冲液中采用的缓冲对为Bis
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Tris。
[0023]本专利技术采用Bis
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Tris作为缓冲对用于制备PCR缓冲液，采用该PCR缓冲液用于快速PCR扩增，能够在酶量低至0.15625U时仍有较高扩增效率，具有扩增效率高、反应时间短、扩增稳定性高等特性，能有效缩短DNA样本检测时间。
[0024]快速Taq酶是指：在Taq DNA polymerase基础上经基因工程改造实现快速扩增的DNA聚合酶，其延伸速度可以在1～20sec/kb的范围内任意选择，例如2.5sec/kb、10sec/kb或15sec/kb。
[0025]在优选的实施方式中，所述快速Taq酶选自：AK Taq酶、TaKaRa厂家的SpeedSTAR
TM
HS DNA Polymerase、Thermo Fisher厂家的Platinum
TM
Taq DNA聚合酶、诺唯赞2
×
Rapid Taq Master Mix的Taq酶中的任意一种。AK Taq酶包括菲鹏AK Taq DNA聚合酶，货号：MD099。
[0026]在优选的实施方式中，所述PCR缓冲液的pH值可以在8.0～9.2的范围内任意选择，例如8.0、8.2、8.4、8.6、8.8、9.0和9.2中的任意一项或任意两项之间的范围。
[0027]在优选的实施方式中，在所述PCR缓冲液中，Bis
‑
Tris的终浓度可以在15～150mM的范围内任意选择，例如18.75～150mM的范围内任意选择，例如15mM、18.75mM、20mM、25mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM和100mM中的任意一项或任意两项之间的范围。在该范围内，可有效扩增。
[0028]在优选的实施方式中，所述PCR缓冲液还包括以下组分:盐离子、表面活性剂和增强剂的至少一种。
[0029]在优选的实施方式中，所述盐离子包括铵盐和钾盐中的至少一种。
[0030]优选地，在所述PCR缓冲液中，当所述盐离子包括铵盐时，所述PCR缓冲液中铵盐的浓度可以在20～60mM的范围内任意选择，例如20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM和60mM中的任意一项或任意两项之间的范围。铵根离子电离氢离子具有可逆性竞争，能提高特异性结合的引物和模板间的结合力(提供氢离子)，通过竞争性夺取氢离子可以降低非特异结合力，提高退火条件的严谨性，进一步减少反应过程中的非特异扩增，显著提高
PCR反应的专一性和灵敏度。优选地，所述铵盐选自(NH4)2SO4、NH4Cl和CH3COONH4中的至少一种，更优选为NH4Cl。
[0031]当所述盐离子包括钾盐时，所述PCR缓冲液中钾盐的终浓度可以在5～45mM的范围内任意选择，例如5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM和45mM中的任意一项或任意两项之间的范围。钾离子结合模板和引物上的磷酸基团以中和DNA过量的负电荷，可以提高模板引物结合力，可进一步提高扩增效率。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，其包括PCR缓冲液和快速Taq酶；其中，所述PCR缓冲液中采用的缓冲对为Bis
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Tris。2.根据权利要求1所述的快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述快速Taq酶选自：菲鹏厂家的AK Taq酶、TaKaRa厂家的SpeedSTAR
TM HS DNA聚合酶Thermo Fisher厂家的Platinum
TM
Taq DNA聚合酶、诺唯赞2
×
Rapid Taq Master Mix的Taq酶中的任意一种；优选地，所述PCR缓冲液的pH值为8.0～9.2。3.根据权利要求1或2所述的快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，在所述PCR缓冲液中，Bis
‑
Tris的终浓度为15～150mM；可选地，所述PCR缓冲液还包括以下组分:盐离子、表面活性剂和增强剂的至少一种；优选地，所述盐离子选自铵盐和钾盐中的至少一种；优选地，当所述盐离子包括铵盐时，所述PCR缓冲液中铵盐的浓度为20～60mM；优选地，所述铵盐选自(NH4)2SO4、NH4Cl和CH3COONH4中的至少一种；优选地，所述铵盐为NH4Cl；优选地，当所述盐离子包括钾盐时，所述PCR缓冲液中钾盐的终浓度为5～45mM；优选地，所述钾盐选自KCl和K2SO4中的任意一种；优选地，所述钾盐为KCl。4.根据权利要求3所述的快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，当包括表面活性剂时，所述PCR缓冲液中所述表面活性剂的体积分数为0.001％～0.05％；优选地，所述表面活性剂选自吐温20、CA630中的任意一种；优选地，所述表面活性剂为吐温20；优选地，当包括增强剂时，所述PCR缓冲液中所述增强剂的终浓度为0.1～5mg/mL；优选地，所述增强剂选自BSA和乙酰化BSA中的至少一种；优选地，所述增强剂为BSA。5.根据权利要求1或2所述的快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：dNTP混合液、引物对、Mg
2+
以及水中的至少一种。6.一种快速PCR扩增的方法，其特征在于，其包括采用如权利要求1～5任一项所述的试剂盒中的快速Taq酶以及PCR缓冲液进行PCR扩增。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡统聪，钟晓珊，钟淑瑶，
申请(专利权)人：广东菲鹏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：