【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及taq酶的适配体。
技术介绍
1、taq酶是重组dna研究和疾病的医疗诊断中大量技术的关键。特别是对于诊断应用，目标核酸序列可能仅仅是所考察dna或rna的一小部分，因此在不扩增的情况下可能难以检测到目标核酸序列的存在。在pcr过程中，由于taq酶在变性步骤中(约94℃)不失活，可直接进入第二轮循环，因此不必每轮循环时重新加入新酶，这使得taq酶成为pcr反应中的独特用酶。
2、由于常规的taq酶活性位点直接暴露，在常温下存在活性，易导致非特异性产物的产生，造成pcr产物含有较多的非特异性产物或者无目的产物。但如果将taq酶的活性位点进行封闭，该非特异性现象能够被明显改善。目前，常规使用的修饰方法有单克隆抗体修饰和小分子化学基团修饰等，但由于taq酶蛋白表面存在多个抗原表位，因此在初期需要大量的针对其聚合酶活性的位点的抗体表位筛选工作，且需要定量对多个单克隆抗体进行pcr性能的验证，整体操作周期较长，操作过程复杂。其次，在后期抗体的放大生产时，需要对动物进行免疫，采集血液或者腹水分离单克隆抗体。但由于动物本身在饲养过程中接触环境中的其他抗原，会产生一定量的非目的抗体，导致纯化后的抗体纯度不高；且动物的健康状态也会影响到最终抗体的活性。此外，本身细胞株在传代、存放过程中会存在退化的情况，同样会导致抗体本身活性下降，批次间抗体活性存在差异，导致抗体酶批次间存在活性差异。化学修饰taq酶同样存在一定的缺点：化学基团通过与taq酶中的氨基酸残基进行反应而达到修饰的目的，但由于同一个蛋白的氨基酸残
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为克服现有技术中存在的技术问题，本专利技术特提出如下技术方案：
2、一种适配体，包括核苷酸序列：
3、5’-gatcatctc(x1)6ttcttagcgttt(x2)6tgtgtatgatc-3’，其中x1和x2独立地包含6个任意的核苷酸。
4、在一种可能的实现方式中，x1与x2反向互补匹配。
5、在一种可能的实现方式中，x1与x2之间完全匹配。
6、在一种可能的实现方式中，x1与x2之间允许至多1个错配。
7、在一种可能的实现方式中，x1与x2之间错配不位于与主框架的交界处。
8、作为优选，x1包括：nnddhh。
9、在一种可能的实现方式中，x1包括atgaca、acgata、agaaca、atagca、attacc、gaaaca、acgtta、ttagca、cgaata、agagaa、agtatc或cagaat。
10、作为优选，x2包括：ddhhnn。
11、在一种可能的实现方式中，x2包括tgtcat、tatcgt、tgttct、tgctat、ggtaat、tgtttc、taacgt、tgctaa、tattcg、ttctct、gatact或attctg。
12、在一种可能的实现方式中，上述的适配体包括如下任意一条核苷酸序列：
13、5’-gatcatctcatgacattcttagcgttttgtcattgtgtatgatc-3’。
14、5’-gatcatctcacgatattcttagcgttttatcgttgtgtatgatc-3’。
15、5’-gatcatctcagaacattcttagcgttttgttcttgtgtatgatc-3’
16、5’-gatcatctcatagcattcttagcgttttgctattgtgtatgatc-3’。
17、5’-gatcatctcattaccttcttagcgtttggtaattgtgtatgatc-3’。
18、5’-gatcatctcgaaacattcttagcgttttgtttctgtgtatgatc-3’。
19、5’-gatcatctcacgttattcttagcgttttaacgttgtgtatgatc-3’。
20、5’-gatcatctcttagcattcttagcgttttgctaatgtgtatgatc-3’。
21、5’-gatcatctccgaatattcttagcgttttattcgtgtgtatgatc-3’。
22、5’-gatcatctcagagaattcttagcgtttttctcttgtgtatgatc-3’。
23、5’-gatcatctcagtatcttcttagcgtttgatacttgtgtatgatc-3’。
24、5’-gatcatctccagaatttcttagcgtttattctgtgtgtatgatc-3’。
25、在一种可能的实现方式中，所述适配体为茎环结构。
26、在一种可能的实现方式中，所述适配体的核苷酸被修饰。
27、在一种可能的实现方式中，所述修饰发生在核苷酸的5’和/或3’端。
28、在一种可能的实现方式中，发生在5’端的修饰包括硫代修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰、双脱氧修饰或生物素修饰。
29、在一种可能的实现方式中，发生在3’端的修饰包括硫代修饰、磷酸化修饰、脱羟基修饰、巯基修饰、双脱氧修饰、氨基修饰或生物素修饰。
30、在一种可能的实现方式中，所述适配体结合taq酶。
31、本专利技术还提供了上述的适配体在封闭或部分封闭taq酶活性的应用。
32、在一种可能的实现方式中，所述适配体在低于酶反应温度的条件下封闭或部分封闭taq酶活性。
33、在一种可能的实现方式中，所述适配体可在35-60℃下封闭或部分封闭taq酶活性。
34、本专利技术提供的还有适配体组合，包括上述适配体的至少2条核苷酸序列。
35、本专利技术提供的还有酶混物，包括上述适配体或适配体组合，以及taq酶。
36、本专利技术提供的还有试剂盒，包括上述适配体，或适配体组合，或酶混物。
37、本专利技术提供的还有上述的适配体，或适配体组合，或酶混物在封闭taq酶活性、核酸扩增、制备核酸延伸反应混合物、制备核酸扩增试剂盒中的应用。
38、本专利技术提供的还有核酸延伸反应混合物，包括上述的酶混物、至少一种引物、dntps。
39、本专利技术提供的还有核酸扩增的方法，包括：将上述的核酸延伸反应混合物与待测模板反应，在允许发生核酸扩增条件下，适配体脱离taq酶，形成引物延伸产物。
40、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
41、本专利技术提供的taq酶适配体具有在室温下抑制taq酶的活性的功能，有效提高taq酶的常温稳定性，相比于单独使用taq酶，对pcr抗干扰能力大大加强，能本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种适配体，包括核苷酸序列
2.如权利要求1所述的适配体，其中X1与X2反向互补匹配。
3.如权利要求2所述的适配体，其中X1与X2之间完全匹配。
4.如权利要求2所述的适配体，其中X1与X2之间允许至多1个错配。
5.如权利要求4所述的适配体，其中X1与X2之间错配不位于与主框架的交界处。
6.如权利要求1-5任一项所述的适配体，所述X1包括：NNDDHH。
7.如权利要求6所述的适配体，X1包括ATGACA、ACGATA、AGAACA、ATAGCA、ATTACC、GAAACA、ACGTTA、TTAGCA、CGAATA、AGAGAA、AGTATC或CAGAAT。
8.如权利要求1-5任一项所述的适配体，所述X2包括：DDHHNN。
9.如权利要求8所述的适配体，X2包括TGTCAT、TATCGT、TGTTCT、TGCTAT、GGTAAT、TGTTTC、TAACGT、TGCTAA、TATTCG、TTCTCT、GATACT或ATTCTG。
10.如权利要求1-9任一项所述
11.如权利要求1-10任一项所述的适配体，所述适配体为茎环结构。
12.如权利要求1-11任一项所述的适配体，所述适配体的核苷酸被修饰。
13.如权利要求12所述的适配体，所述修饰发生在核苷酸的5’和/或3’端。
14.如权利要求13所述的适配体，发生在5’端的修饰包括硫代修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰、双脱氧修饰或生物素修饰。
15.如权利要求13所述的适配体，发生在3’端的修饰包括硫代修饰、磷酸化修饰、脱羟基修饰、巯基修饰、双脱氧修饰、氨基修饰或生物素修饰。
16.如权利要求1-15任一项所述的适配体，所述适配体结合Taq酶。
17.如权利要求1-16任一项所述的适配体在封闭或部分封闭Taq酶活性的应用。
18.如权利要求17所述的应用，所述适配体在低于酶反应温度的条件下封闭或部分封闭Taq酶活性。
19.如权利要求17所述的应用，所述适配体可在35-60℃下封闭或部分封闭Taq酶活性。
20.适配体组合，包括选自权利要求1-16任一项的所述适配体的至少2条核苷酸序列。
21.酶混物，包括权利要求1-16任一项的所述适配体或权利要求20所述的适配体组合，以及Taq酶。
22.试剂盒，包括权利要求1-16任一项的所述适配体，或权利要求20所述的适配体组合，或权利要求21所述的酶混物。
23.权利要求1-16任一项所述的适配体，或权利要求20所述的适配体组合，或权利要求21所述的酶混物在封闭Taq酶活性、核酸扩增、制备核酸延伸反应混合物、制备核酸扩增试剂盒中的应用。
24.核酸延伸反应混合物，包括权利要求21所述的酶混物、至少一种引物、dNTPs。
25.核酸扩增的方法，包括：将权利要求24所述的核酸延伸反应混合物与待测模板反应，在允许发生核酸扩增条件下，适配体脱离Taq酶，形成引物延伸产物。
...【技术特征摘要】
1.一种适配体，包括核苷酸序列
2.如权利要求1所述的适配体，其中x1与x2反向互补匹配。
3.如权利要求2所述的适配体，其中x1与x2之间完全匹配。
4.如权利要求2所述的适配体，其中x1与x2之间允许至多1个错配。
5.如权利要求4所述的适配体，其中x1与x2之间错配不位于与主框架的交界处。
6.如权利要求1-5任一项所述的适配体，所述x1包括：nnddhh。
7.如权利要求6所述的适配体，x1包括atgaca、acgata、agaaca、atagca、attacc、gaaaca、acgtta、ttagca、cgaata、agagaa、agtatc或cagaat。
8.如权利要求1-5任一项所述的适配体，所述x2包括：ddhhnn。
9.如权利要求8所述的适配体，x2包括tgtcat、tatcgt、tgttct、tgctat、ggtaat、tgtttc、taacgt、tgctaa、tattcg、ttctct、gatact或attctg。
10.如权利要求1-9任一项所述的适配体，包括如下任意一条核苷酸序列：
11.如权利要求1-10任一项所述的适配体，所述适配体为茎环结构。
12.如权利要求1-11任一项所述的适配体，所述适配体的核苷酸被修饰。
13.如权利要求12所述的适配体，所述修饰发生在核苷酸的5’和/或3’端。
14.如权利要求13所述的适配体，发生在5’端的修饰包括硫代修饰、氨基修...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡统聪，范凌云，孟媛，卢庆庆，林钰琼，
申请(专利权)人：广东菲鹏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。